淺談犬糞包蟲(chóng)抗原實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及分析

王婷

摘要：在現(xiàn)代社會(huì)的發(fā)展進(jìn)程中，養(yǎng)殖業(yè)領(lǐng)域的發(fā)展速度越來(lái)越快，綜合發(fā)展水平顯著提升，但是仍舊存在一定的致病菌和寄生蟲(chóng)，會(huì)給人畜的身體健康造成嚴(yán)重影響，其中包蟲(chóng)病也稱棘球蚴病，可以直接感染人畜，對(duì)動(dòng)物及人體的危害尤為嚴(yán)重?；诖耍疚闹饕接懭S中包蟲(chóng)抗原實(shí)驗(yàn)性檢測(cè)及分析，首先對(duì)包蟲(chóng)進(jìn)行概述，其次分析了包蟲(chóng)疾病的流行原因和惡性影響，最后有針對(duì)性的探討犬糞包蟲(chóng)抗原檢測(cè)及結(jié)果分析并提出一定防治措施，希望能夠?qū)θS中包蟲(chóng)的檢測(cè)技術(shù)水平提高提供必要參考。

關(guān)鍵詞：犬糞;包蟲(chóng);抗原;實(shí)驗(yàn)室檢測(cè);分析

在全世界范圍內(nèi)，我國(guó)屬于包蟲(chóng)病流行嚴(yán)重的國(guó)家之一，這主要是由于我國(guó)畜牧業(yè)的飛速發(fā)展，特別是很多農(nóng)戶在養(yǎng)殖牲畜的過(guò)程中并沒(méi)有過(guò)多的重視包蟲(chóng)病的防治，并導(dǎo)致人畜之間交叉感染，嚴(yán)重危及了人民群眾和牲畜的健康，同樣也會(huì)在一定程度上阻礙地區(qū)畜牧業(yè)的正常發(fā)展，因此包蟲(chóng)此類寄生蟲(chóng)疾病的抗原檢測(cè)和有效防治至關(guān)重要，直接關(guān)乎我國(guó)畜牧業(yè)發(fā)展水平，因此本文主要從犬糞中分析包蟲(chóng)抗原并進(jìn)行深入的探討，以期能夠進(jìn)一步促進(jìn)包蟲(chóng)抗原檢測(cè)綜合水平的提高。

1 包蟲(chóng)病概述

包蟲(chóng)病主要可以分為棘球蚴病和泡球蚴病兩種類型，能夠直接影響牲畜健康和人體健康，同時(shí)也會(huì)對(duì)地區(qū)的畜牧業(yè)發(fā)展造成嚴(yán)重影響。此類地方性疾病在我國(guó)流行廣泛，其中我國(guó)的包蟲(chóng)病流行區(qū)在我國(guó)整體陸地面積中占據(jù)4成，眾多人口始終受到包蟲(chóng)病的影響和流行危害，例如我國(guó)新疆、青海、西藏等畜牧業(yè)相對(duì)發(fā)達(dá)的地區(qū)，同樣也是包蟲(chóng)病的特高流行區(qū)。除了牛羊此類家畜以外，犬類、狐貍、狼類等動(dòng)物，同樣也更加容易感染棘球絳蟲(chóng)，并在與人的互動(dòng)和生活過(guò)程中直接將此類包蟲(chóng)病傳染給人。

2 包蟲(chóng)疾病的流行原因和惡性影響

包蟲(chóng)病傳染的根源在于牲畜和犬類的糞便，對(duì)于家犬而言，其生長(zhǎng)環(huán)境和體制環(huán)境更加容易被包蟲(chóng)寄生，此類包蟲(chóng)往往會(huì)寄生于家犬的小腸部位，在7～14d左右蟲(chóng)卵成熟。包蟲(chóng)為無(wú)性繁殖壽命相對(duì)較長(zhǎng)，同時(shí)并不會(huì)受到外界自然生態(tài)環(huán)境的影響，在不同牲畜之間傳染率和患病率較高，包蟲(chóng)同樣也會(huì)對(duì)人體造成感染，此類感染往往在于無(wú)意識(shí)的感染狀態(tài)，主要來(lái)源于人體與家犬或其他牲畜之間的親密接觸。也正因如此，包蟲(chóng)病的最嚴(yán)重災(zāi)區(qū)往往在農(nóng)牧場(chǎng)等牲畜較多的地區(qū)，如果家中飼養(yǎng)的家犬有舔肛門(mén)的習(xí)慣，那么飼養(yǎng)者需要切實(shí)觀察家犬是否存在包蟲(chóng)蟲(chóng)卵，避免與其進(jìn)行接觸，減少家犬體內(nèi)包蟲(chóng)傳染到人體的可能性。

當(dāng)前包蟲(chóng)病、棘球蚴病的最終宿主往往為犬科動(dòng)物，因此對(duì)于犬類以及犬糞中棘球絳蟲(chóng)的感染性進(jìn)行診斷，往往需要通過(guò)解剖檢驗(yàn)方法或直接檢測(cè)犬科動(dòng)物糞便中的蟲(chóng)卵含量、采取氫溴酸檳榔堿瀉下法、血清抗體檢測(cè)方法等多種方法，但是在現(xiàn)有的檢測(cè)方法中廣泛使用的方法仍舊為氫溴酸檳榔堿瀉下法以及解剖檢測(cè)法，其中以解剖檢測(cè)方式最為直觀，檢測(cè)結(jié)果更為準(zhǔn)確。但是不容忽視的是，在針對(duì)犬類感染包蟲(chóng)情況進(jìn)行抗原實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)時(shí)，如果一味使用解剖檢測(cè)法，則會(huì)導(dǎo)致動(dòng)物的死亡或難以挽回的傷害，因此在對(duì)犬類感染包蟲(chóng)病的情況進(jìn)行檢查時(shí)，可以采取氫溴酸檳榔堿瀉下法。

3 犬糞包蟲(chóng)抗原實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)分析

3.1 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

在針對(duì)犬糞中所含有的包蟲(chóng)進(jìn)行抗原檢測(cè)中，應(yīng)用酶聯(lián)免疫方法進(jìn)行吸附實(shí)驗(yàn)，提高檢測(cè)的基礎(chǔ)性。在犬糞的收集過(guò)程中，可以率先保證實(shí)驗(yàn)犬的空腹，隨后應(yīng)用氫溴酸檳榔堿瀉下法讓犬類能夠排出糞便，同時(shí)將此類犬糞進(jìn)行有效收集，為隨后開(kāi)展的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)提供保障。如果所檢測(cè)的犬糞樣品中已經(jīng)含有包蟲(chóng)抗原，那么可以將其與包蟲(chóng)抗體進(jìn)行酶標(biāo)結(jié)合物特異性融合，其次在間接融合過(guò)程中也可以根據(jù)包被板上的顯色情況進(jìn)一步判斷犬糞樣品中是否含有包蟲(chóng)抗原。

1）樣品采集與處理

在此次實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中主要應(yīng)用新鮮犬糞進(jìn)行測(cè)試和實(shí)驗(yàn)，主要實(shí)驗(yàn)儀器為酶標(biāo)儀、恒溫箱、移液器以及電子天平等等。首先需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)需要，提前采集犬糞樣品。在樣品采集過(guò)程中要做好采樣人員的防護(hù)，避免受到犬糞中所含有的包蟲(chóng)卵影響。樣品采集完成之后需要應(yīng)用蒸餾水進(jìn)行洗滌液稀釋，可以按照1：10的比例進(jìn)行混勻待用。隨后可以將待檢測(cè)的犬糞樣品置于低溫環(huán)境之下冷凍一周以上，此種低溫要盡量保持在零下70℃左右的溫度，通過(guò)此類長(zhǎng)時(shí)間的低溫冷凍能夠有效消滅犬糞中的包蟲(chóng)活卵。在檢測(cè)過(guò)程中可以在犬糞樣品中應(yīng)用電子天平稱取1g糞便并加入1mL的稀釋液進(jìn)行攪拌混勻，將混合溶液靜置10min以后應(yīng)用離心機(jī)離心10min，提取清液進(jìn)行后續(xù)檢驗(yàn)[1]。

2）樣品檢測(cè)

犬糞包蟲(chóng)抗原檢驗(yàn)首先需要做好加樣反應(yīng)，在樣品孔中加入待檢樣品，額外添加空白對(duì)照和陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各兩孔，根據(jù)不同的對(duì)照組需要加入適合的對(duì)照樣品。全部添加完成之后，需要蓋好封板膜，在常溫環(huán)境之下避光反應(yīng)30min，甩去孔內(nèi)其他液體并注入洗滌液洗板，重復(fù)6次之后可以隨后開(kāi)展加酶反應(yīng)。加酶反應(yīng)開(kāi)展過(guò)程中，除了原有設(shè)定好的空白對(duì)照孔以外，需要對(duì)其他各孔添加酶結(jié)合物100μL并蓋好封板膜，讓其充分進(jìn)行顯色反應(yīng)，最后應(yīng)用酶標(biāo)儀器，讀取OD值。

3）檢測(cè)注意事項(xiàng)

在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中要特別注意犬糞樣品試劑從冷藏環(huán)境中拿出之后需要放置到室溫狀態(tài)之后才能進(jìn)行啟用，避免過(guò)冷的環(huán)境對(duì)犬糞樣品造成影響。如果在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中存在未應(yīng)用的試劑組，也重新放回5℃左右的溫度進(jìn)行密封保存。在添加試劑之前，需要針對(duì)不同類型的試劑進(jìn)行輕搖和混勻，避免試劑混合不均而影響檢測(cè)，減少犬糞的腐敗幾率。做好個(gè)人防護(hù)，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中所應(yīng)用的各類器具和防護(hù)用品都要進(jìn)行統(tǒng)一的無(wú)害化處理或焚燒，避免成分中含有的包蟲(chóng)卵蔓延滋生。

3.2 檢測(cè)結(jié)果分析

通過(guò)對(duì)260份犬糞樣品進(jìn)行包蟲(chóng)抗原檢測(cè)，共有4份樣品檢測(cè)出陽(yáng)性反應(yīng)，此類結(jié)果顯示了該地區(qū)家養(yǎng)犬類在一定程度上有感染包蟲(chóng)的幾率。在對(duì)犬類進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)之前，抗原感染率達(dá)3%左右，而對(duì)犬類進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)之后，其感染包蟲(chóng)的幾率會(huì)降到0.5%左右，感染率的大幅度下降也在一定程度上說(shuō)明了對(duì)犬類進(jìn)行藥物驅(qū)蟲(chóng)能夠有效治療犬類的包蟲(chóng)疾病。在對(duì)犬類進(jìn)行驅(qū)蟲(chóng)之后重復(fù)檢測(cè)犬糞包蟲(chóng)抗原實(shí)驗(yàn)則得到的感染率為0，所以犬糞樣品的采集時(shí)間與是否進(jìn)行犬類藥物驅(qū)蟲(chóng)有很大程度的關(guān)系;另一方面，如果包蟲(chóng)在犬體內(nèi)滋生破裂，會(huì)導(dǎo)致感染率上升，如果卵體尚不成熟，則感染率會(huì)顯示為陰性[2]。

除此之外，如有需要也可以對(duì)參與進(jìn)行犬糞包蟲(chóng)抗原實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)犬進(jìn)行解剖檢測(cè)，以進(jìn)一步判斷包蟲(chóng)抗原實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的有效性和精準(zhǔn)度。在應(yīng)用解剖檢測(cè)法時(shí)，可以將實(shí)驗(yàn)犬進(jìn)行解剖，并從其內(nèi)臟中分離出小腸，將小腸內(nèi)的各類物質(zhì)全部置于盆中，隨后應(yīng)用生理鹽水進(jìn)行漂洗沉淀，棄去上清，多次之后可以應(yīng)用平皿進(jìn)行逐一檢查;也可以直接將實(shí)驗(yàn)犬的腸管應(yīng)用剪刀進(jìn)行剪開(kāi)，并使用生理鹽水沖洗腸壁，通過(guò)肉眼觀察的形式或采取放大鏡觀察方法，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)犬腸道內(nèi)側(cè)是否存在棘球絳蟲(chóng)情況，如有棘球絳蟲(chóng)則需要進(jìn)行計(jì)數(shù)。不同類型的檢測(cè)方法，在犬類感染棘球絳蟲(chóng)精準(zhǔn)度方面差別明顯，特別是不同類型的檢測(cè)方法在操作可行度以及適用性等方面各不相同，因此在針對(duì)犬類感染包蟲(chóng)病情況進(jìn)行有針對(duì)性的診斷中，需要綜合應(yīng)用多種方法實(shí)現(xiàn)檢測(cè)形式的有效互補(bǔ)，最大程度上彌補(bǔ)不同方法的缺陷與問(wèn)題，提高檢測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)度和科學(xué)性效果。

在針對(duì)犬糞所進(jìn)行的抗原實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中，可以進(jìn)一步分析犬糞包蟲(chóng)抗原效果同時(shí)，也可以切實(shí)提高犬類包蟲(chóng)病的防治效果。在進(jìn)行包蟲(chóng)病篩查和犬糞包蟲(chóng)篩查過(guò)程中要真正實(shí)現(xiàn)分類指導(dǎo)和因地制宜，嚴(yán)格控制各類傳染源，切實(shí)掐斷包蟲(chóng)蟲(chóng)卵的傳播途徑。通過(guò)綜合性的防治策略和防治手段，全面開(kāi)展家畜包蟲(chóng)病的有針對(duì)性防治，進(jìn)一步減少包蟲(chóng)病的危害。在早期包蟲(chóng)病發(fā)生和診斷過(guò)程中，可以應(yīng)用藥物治療方法進(jìn)行治療，同時(shí)在犬類飼養(yǎng)過(guò)程中要避免應(yīng)用已經(jīng)感染了包蟲(chóng)的動(dòng)物腎臟或肝臟等組織器官喂養(yǎng)犬類，也可以在飼養(yǎng)過(guò)程中對(duì)犬只進(jìn)行定期驅(qū)蟲(chóng)，驅(qū)蟲(chóng)完成之后的糞便要統(tǒng)一進(jìn)行焚燒或其他類型的無(wú)害化處理;日常養(yǎng)犬過(guò)程中要注意喂養(yǎng)的衛(wèi)生條件和飲水衛(wèi)生，避免出現(xiàn)犬糞污染問(wèn)題。

4 結(jié)語(yǔ)

綜上所述，在新時(shí)代發(fā)展背景之下，我國(guó)需要進(jìn)一步提高對(duì)各類寄生蟲(chóng)病的防治和檢測(cè)措施，避免多種類型的寄生蟲(chóng)病對(duì)人體造成嚴(yán)重的影響。本文從犬糞包蟲(chóng)抗原實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及分析入手，不僅探索了犬類包蟲(chóng)病的流行因素和主要感染源，同樣也圍繞實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法和檢測(cè)結(jié)果、具體的防治措施進(jìn)行全面論述，希望能夠?qū)ξ覈?guó)包蟲(chóng)病的檢疫和畜牧業(yè)的發(fā)展奠定良好基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1]宋育娟.剛察縣犬糞包蟲(chóng)抗原實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)及分析[J].青海農(nóng)牧業(yè)，2018（4）：3.

[2]鄭雪瑩，張啟龍，陳會(huì)玲，等.北京市某區(qū)犬細(xì)粒棘球絳蟲(chóng)感染情況與風(fēng)險(xiǎn)因素分析[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2020，56（3）：99-101+139.