兩點(diǎn)法校準(zhǔn)生化分析儀的應(yīng)用

蘭天

（西安市紅會(huì)醫(yī)院閻良院區(qū)檢驗(yàn)科，陜西 西安 710089）

目前全自動(dòng)生化分析儀已在各大、中型醫(yī)院普遍使用，由于其具有分析儀器穩(wěn)定，結(jié)果比較準(zhǔn)確，試劑用量少，分析速度快，工作效率高[1]。自動(dòng)生化分析技術(shù)提高了臨床檢驗(yàn)質(zhì)量和速度，減輕檢驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度，節(jié)約樣品和試劑，增加了檢驗(yàn)項(xiàng)目，提高了檢測(cè)精密度，減小了誤差，并有利于臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)現(xiàn)，而且室內(nèi)、室間質(zhì)控結(jié)果穩(wěn)定，日益受到廣大用戶的的歡迎[2]。但作為檢驗(yàn)分析儀器，同樣避免不了誤差的存在，只有誤差足夠的小，檢驗(yàn)的結(jié)果才能穩(wěn)定，檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，才能更具有較高的可信度。全自動(dòng)生化分析儀由于其儀器的穩(wěn)定性和操作過(guò)程中程序的同一性，所產(chǎn)生隨機(jī)誤差的可能性就很小。對(duì)于系統(tǒng)誤差，卻仍然不能忽視，消除或者減小系統(tǒng)誤差就是使用適當(dāng)?shù)某绦颉⒎椒?、校?zhǔn)品進(jìn)行儀器的校準(zhǔn)。在日常工作中，按儀器說(shuō)明和試劑盒的要求，把程序設(shè)定好，試劑安放至合適的試劑位，就要用試劑盒配套的校準(zhǔn)品進(jìn)行項(xiàng)目的校準(zhǔn)，把這個(gè)過(guò)程中所用的校準(zhǔn)品通常稱之為定標(biāo)液。把這個(gè)程序完成后，該項(xiàng)目的檢驗(yàn)前工作就算完成了定標(biāo)。在完成了定標(biāo)但還不能直接用于對(duì)患者標(biāo)本的分析檢驗(yàn)測(cè)定。衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心在臨床實(shí)驗(yàn)室（定量測(cè)定）室內(nèi)、質(zhì)控工作中指出：對(duì)于測(cè)定標(biāo)本的儀器一定要進(jìn)行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)時(shí)要選擇合適的（配套的）標(biāo)準(zhǔn)品/校準(zhǔn)品，如有可能，校準(zhǔn)品應(yīng)該能溯源到參考方法和/或參考物質(zhì)；對(duì)不同的分析項(xiàng)目要根據(jù)其特性確定各自的校準(zhǔn)頻率[3-6]。對(duì)于校準(zhǔn)品，它的定義是：含有已知量的待測(cè)物，用以校準(zhǔn)測(cè)定方法的數(shù)值。它與該方法及試劑，儀器是有相關(guān)聯(lián)的。校準(zhǔn)品的作用是為了減少或者消除試劑，儀器分析的整個(gè)過(guò)程中所產(chǎn)生的恒定的系統(tǒng)誤差。目前來(lái)說(shuō)大多數(shù)醫(yī)院都是完成了儀器定標(biāo)后，使用高質(zhì)量的性質(zhì)穩(wěn)定、效期長(zhǎng)的定值質(zhì)控品對(duì)儀器進(jìn)行再次的校準(zhǔn)，這個(gè)校準(zhǔn)品通常使用的是進(jìn)口的具有性質(zhì)穩(wěn)定、質(zhì)量的可靠性好、保存時(shí)間長(zhǎng)，最好是人血清基質(zhì)的，有可靠的溯源性。我們通常把校準(zhǔn)品的參考靶值作為近似真值，以此作為校準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)。我們通常在選用這樣的校準(zhǔn)品時(shí)，通常選用的靶值是在醫(yī)學(xué)臨床參考范圍內(nèi)的所謂正常值范圍內(nèi)的靶值，這樣可以保證日常檢驗(yàn)中大多數(shù)參考區(qū)間內(nèi)的結(jié)果的穩(wěn)定可靠。通常用這個(gè)水平的質(zhì)控品在儀器上測(cè)定一次或者多次求得均值，然后與該質(zhì)控品的標(biāo)準(zhǔn)靶值進(jìn)行比較，求得一個(gè)比例系數(shù)，該比例系數(shù)就是該項(xiàng)目的校準(zhǔn)系數(shù)，將這個(gè)校準(zhǔn)系數(shù)輸入到儀器的校準(zhǔn)系數(shù)欄內(nèi)，即完成了儀器該項(xiàng)目的校準(zhǔn)工作。

1 方法

我們醫(yī)院自2016年新購(gòu)進(jìn)了東芝TBA120FR全自動(dòng)生化分析儀后，起初也是用這種方法進(jìn)行儀器的校準(zhǔn)。調(diào)查表明，約15%的實(shí)驗(yàn)室因質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品的誤差導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度不合格。所以我們?cè)谶x擇校準(zhǔn)品時(shí)，選擇使用了可信度高的英國(guó)朗道（RANDOX）質(zhì)控血清，英國(guó)朗道質(zhì)控血清說(shuō)明書(shū)中指出，廊道質(zhì)控血清的賦值，每一批質(zhì)控血清都需要送到參考實(shí)驗(yàn)室，根據(jù)國(guó)際參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行賦值，若沒(méi)有國(guó)際參考標(biāo)準(zhǔn)，使用參考方法。朗道也將質(zhì)控血清送到全世界3,000多家實(shí)驗(yàn)室，然后將結(jié)果用獨(dú)特的統(tǒng)計(jì)分析賦值。對(duì)每一批質(zhì)控血清都提供了不同項(xiàng)目的不同方法學(xué)的靶值和靶值范圍。質(zhì)控范圍是平均值的±2SD。我們用的校準(zhǔn)品基本上是英國(guó)朗道（RANDOX）質(zhì)控血清水平-2日常校準(zhǔn)儀器，因?yàn)橘|(zhì)控血清水平-2賦值基本上都在臨床正常參考法內(nèi)，也就是正常值范圍內(nèi)的靶值。其實(shí)我們?cè)诠ぷ髦邪l(fā)現(xiàn)，大多數(shù)生化檢驗(yàn)項(xiàng)目有意義的或者有醫(yī)學(xué)決定水平的的參考值具有更重要的臨床診斷意義。為此我們?cè)诩饶鼙ＷC正常范圍內(nèi)的檢驗(yàn)結(jié)果可靠，也要保證處在參考區(qū)間外的臨床異常檢驗(yàn)常數(shù)值的可靠性，解決的辦法就是增加高值水平校準(zhǔn)。所以我們?cè)诠ぷ髦锌紤]嘗試是否既用水平-2校準(zhǔn)儀器，同時(shí)也用高值質(zhì)控品水平-3校準(zhǔn)品校準(zhǔn)儀器。在實(shí)際工作中，用常規(guī)方法儀器定標(biāo)后，然后用校準(zhǔn)品水平-2校準(zhǔn)了儀器，那么校準(zhǔn)品水平-3的結(jié)果必然和靶值有誤差，同樣用校準(zhǔn)品水平-3校準(zhǔn)了儀器，校準(zhǔn)品水平-2結(jié)果和靶值就有誤差，而且出現(xiàn)這樣的誤差也有顯著性的意義。兩個(gè)水平校準(zhǔn)分別得出的兩個(gè)校準(zhǔn)斜率不相同，我們經(jīng)過(guò)反復(fù)比較，雖然誤差都在誤差參考區(qū)間內(nèi)，但是總是偏離了近似真值，為此我們查閱相關(guān)資料，反復(fù)研究討論，認(rèn)真分析原因，摸索出了一個(gè)解決方法，就是用校準(zhǔn)品質(zhì)控血清水平-2，校準(zhǔn)品質(zhì)控血清水平-3同時(shí)測(cè)定，求得一個(gè)校準(zhǔn)斜率和一個(gè)校準(zhǔn)截距，用來(lái)修正校準(zhǔn)公式。我們把高、低測(cè)定值，靶值分別用MCH、MCL、MH、ML表示，修正斜率用XK表示，修正均差用XC表示，樣品測(cè)定值用MS表示，校準(zhǔn)后樣品修正值用MX表示。就得出如下計(jì)算公式：校準(zhǔn)斜率XK=(MH-ML)/( MCH-MCL)；均差 XC=MH-XK×MCH=ML-XK×MCL；MX=MS×XK+XC；用XK修正斜率誤差，用XC修正固定誤差。

以生化項(xiàng)目葡萄糖測(cè)定為例，我們使用的是中生北控生物科技股份有限公司葡萄糖測(cè)定試劑盒（葡萄糖氧化酶法），試劑盒自帶配套（一個(gè)濃度）葡萄糖校準(zhǔn)品，濃度靶值5.55 mmol/L校準(zhǔn)品使用英國(guó)朗道質(zhì)控血清：①人基質(zhì)定值生化質(zhì)控血清-水平2貨號(hào)：HN1530，批號(hào)：1093UN，有效期：2020-01，葡萄糖靶值：6.29 mmol/L（氧化酶法）；②人基質(zhì)定值生化質(zhì)控血清-水平3貨號(hào)：HE1532，批號(hào)：849UE，有效期：2020-01，葡萄糖靶值：15.4 mmol/L（氧化酶法）；用自帶定標(biāo)液定標(biāo)后，測(cè)得MCH=14.28，MCL=6.12；XK=(MH-ML)/(MCH-MCL)= (15.4-6.29)/(14.2 8-6.12)=1.116；XC=MH-XK×MCH或者XC= ML-XK×MCL；XC=15.4-1.116×14.28=0.54；或者XC=6.29-1.116×6.12=0.54。

舉例：儀器定標(biāo)后，直接測(cè)得患者血糖值為9.52 mmol/L，通過(guò)校準(zhǔn)后血糖=9.52×1.116+0.54=11.16 mmol/L，血糖11.1 mmol/L是具有醫(yī)學(xué)決定意義的數(shù)值。

我們?cè)谟脙蓚€(gè)水平質(zhì)控校準(zhǔn)品校準(zhǔn)方法引用時(shí)，有如下幾種情況需要注意：（1）改變?cè)噭┑姆N類，或者更換試劑批號(hào)；（2）儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行了一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重要部件，這些都可以影響檢驗(yàn)性能；（3）室內(nèi)質(zhì)控反映出異?；蛘咂?，或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的接收限，采取一般性糾正措施后不能識(shí)別和糾正的問(wèn)題時(shí)；（4）距上次校準(zhǔn)時(shí)間不超過(guò)1個(gè)月需要再次校準(zhǔn)。

2 結(jié)果

從2016年下半年以來(lái)，我們應(yīng)用兩個(gè)水平定值校準(zhǔn)品的朗道質(zhì)控品對(duì)生化分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)至今，多年來(lái)臨床使用中日常檢驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠，室內(nèi)、室間質(zhì)控良好。檢驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠，就為臨床提供了更加可信的檢驗(yàn)報(bào)告數(shù)據(jù)，使臨床診斷對(duì)檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的可信度更進(jìn)一步提高。取得了滿意的效果，使得檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性得到了提高，降低了分析系統(tǒng)的系統(tǒng)誤差。

3 討論

全自動(dòng)生化分析儀不論如何先進(jìn)，它作為一個(gè)儀器，測(cè)試出來(lái)的標(biāo)本結(jié)果是隨著標(biāo)準(zhǔn)限的設(shè)置不同而變化的。對(duì)于一個(gè)臨床檢測(cè)項(xiàng)目，如果所用方法的測(cè)定原理、試劑、儀器、校準(zhǔn)品中任何一個(gè)不同，都可能得到不同的測(cè)定結(jié)果。全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定系統(tǒng)包括測(cè)定原理、試劑、儀器、校準(zhǔn)品四要素。如果我們想要得到準(zhǔn)確可靠的測(cè)定結(jié)果，而該結(jié)果又需要具有與其他實(shí)驗(yàn)室的可比性，應(yīng)該自己建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定系統(tǒng)。在生化檢驗(yàn)分析過(guò)程中系統(tǒng)誤差永遠(yuǎn)都是存在的，只有在實(shí)踐中不斷采取適當(dāng)?shù)姆椒ê图m正措施減少系統(tǒng)誤差給檢驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)的影響，只可能逐漸降低，但不可能完全消除，所以就要求我們?cè)谌粘９ぷ髦胁粩喾治鲈颍粩嗵剿?，不斷?shí)踐，不斷探總結(jié)和摸索，改進(jìn)試驗(yàn)方法，改進(jìn)試驗(yàn)程序，盡可能減少誤差，以提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，使得檢驗(yàn)結(jié)果盡可能靠近真值，以給臨床診斷提供更有價(jià)值的檢驗(yàn)報(bào)告結(jié)果。此外，盡量不要使用單試劑，把能用雙試劑的項(xiàng)目改為雙試劑，因?yàn)閱卧噭┑姆€(wěn)定性，隨著使用時(shí)間會(huì)變差，同時(shí)血液中高濃度的維生素C也會(huì)嚴(yán)重干擾單試劑的Trinder反應(yīng)。在此設(shè)想是否可用三種或者多種水平質(zhì)控品校準(zhǔn)儀器的方法校準(zhǔn)儀器，希望檢驗(yàn)工作者共同努力，把檢驗(yàn)質(zhì)量不斷提高，服務(wù)于臨床醫(yī)療。