電項(xiàng)針對(duì)后循環(huán)缺血大鼠模型腦干聽覺誘發(fā)電位影響的實(shí)驗(yàn)研究*

劉 勇,孫嘉婧,陳 伊△

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 哈爾濱 150040；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040)

后循環(huán)指椎基底動(dòng)脈系統(tǒng)，由椎動(dòng)脈、基底動(dòng)脈及大腦后動(dòng)脈組成，主要供給腦干、小腦、枕葉、部分顳葉和上端脊髓。后循環(huán)缺血(Posterior circulation ischemia，PCI)約占缺血性腦血管疾病的20%[1]，包括后循環(huán)的短暫性腦缺血發(fā)作和腦梗死[2]。由于后循環(huán)供血區(qū)的功能細(xì)密復(fù)雜，會(huì)出現(xiàn)各種中樞損害的臨床表現(xiàn)和綜合征，如眩暈、肢體無力、麻木、吞咽障礙及視覺障礙、構(gòu)音障礙及共濟(jì)失調(diào)等[3]。采用電項(xiàng)針治療后循環(huán)缺血的機(jī)制尚無實(shí)驗(yàn)研究支持，本研究采用椎動(dòng)脈電凝法制備后循環(huán)缺血大鼠模型，利用BAEP波形改變證實(shí)電項(xiàng)針治療后循環(huán)缺血的療效，為臨床應(yīng)用提供可靠依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

選用1.5月齡，體質(zhì)量為250～280 g的健康清潔級(jí)雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠，購(gòu)于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK 黑2008004。將90只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、電項(xiàng)針組，每組各30只大鼠，另取20只大鼠做BAEP常值檢測(cè)。

1.2 造模前準(zhǔn)備工作

1.2.1 跳臺(tái)電刺激躲避訓(xùn)練 將大鼠放進(jìn)DTT-2型跳臺(tái)儀(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥研所)中，適應(yīng)5 min后給予強(qiáng)度為40 V的交流電刺激。大鼠為躲避電刺激跳上跳臺(tái)，每天訓(xùn)練3次，連續(xù)訓(xùn)練2天。

1.2.2 平衡試驗(yàn) 將一寬1.5 cm的木條離地40 cm水平放置，地上鋪5 cm厚軟墊，以防大鼠跌落受傷。正常大鼠在木條上可停留2 min以上。以大鼠在木條上停留時(shí)間大于2 min為陰性;小于2 min為陽(yáng)性。

1.3 動(dòng)物模型的制備

采用椎動(dòng)脈電凝法制備大鼠后循環(huán)缺血模型[4]。大鼠常規(guī)適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后造模，10%水合氯醛腹腔內(nèi)注射麻醉，將大鼠固定于解剖臺(tái)上,除去項(xiàng)背部鼠毛，消毒頸部皮膚，在枕骨下正中行約2 cm的縱行切口，沿中線鈍性逐層分離肌肉，彎鉗拉住皮膚及肌肉，暴露第一頸椎(C1)及其兩側(cè)翼孔，分離翼孔周圍組織。用頭端圓鈍、直徑約0.5 mm的電凝器深入兩側(cè)翼孔，電灼走行于寰錐內(nèi)的雙側(cè)椎動(dòng)脈，使椎動(dòng)脈形成永久性閉塞。逐層縫合，創(chuàng)面消毒后涂抹硫酸慶大霉素，預(yù)防感染。術(shù)后將大鼠放置無菌鼠籠內(nèi)，鋪置無菌墊料，再將鼠籠放置電熱毯上，待其蘇醒。假手術(shù)組僅暴露C1及翼孔后進(jìn)行縫合，不電凝翼孔。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

3組大鼠造模成功1天后，分別進(jìn)行BAEP檢測(cè)。隨后電項(xiàng)針組進(jìn)行針刺治療，抓取大鼠捆綁于固定網(wǎng)上，動(dòng)物取穴參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)(十二五)》,常規(guī)消毒后，取雙側(cè)風(fēng)池穴(頸后枕骨下，胸鎖乳突肌和斜方肌之間的凹陷處，距離兩耳連線中心約3 mm) 、供血穴(風(fēng)池穴下約2 mm)，進(jìn)針深度約3 mm，采用英迪KWD-808I型全能脈沖電療儀(常州英迪電子醫(yī)療器械有限公司)，將兩組導(dǎo)線分別連接同側(cè)的風(fēng)池穴、供血穴，正極在上，負(fù)極在下，通以疏波(電壓為9 V,頻率為20 Hz)，以大鼠頭部微顫為度，通電20 min，每天1次，連續(xù)治療7天。假手術(shù)組及模型組在相應(yīng)時(shí)間予以抓取、捆綁和固定，不予針刺治療。20只健康大鼠在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行BAEP檢測(cè)，測(cè)出標(biāo)準(zhǔn)值。

1.5 BAEP檢測(cè)方法

采用肌電-誘發(fā)電位儀Se1ect型(美國(guó)尼高力公司)，記錄針電極放置于大鼠頭頂部中央?yún)^(qū)，參考電極放置于兩耳后部，地線粘置于腕部，皮膚電極阻抗小于5 KΩ，單耳給予click聲(濾波短聲)刺激，對(duì)側(cè)耳給予白噪聲遮蔽，刺激量為主觀聽閾值加60 dB，刺激頻率為11．5 Hz，平均疊加996次，每側(cè)重復(fù)2～3次，分析時(shí)間為10 ms。實(shí)驗(yàn)前對(duì)20只健康大鼠進(jìn)行檢測(cè)。得出BAEP正常標(biāo)準(zhǔn)：波峰潛伏期Ⅰ波的正常值為1.98 ms以內(nèi)，Ⅲ波為4.36 ms以內(nèi)，Ⅴ波為6.34 ms以內(nèi)。Ⅴ波波幅與Ⅰ波波幅之比應(yīng)大于1/2。異常標(biāo)準(zhǔn)：各波的峰潛伏期大于正常值；一側(cè)波幅低于對(duì)側(cè)波幅的一倍或以上；Ⅰ波波幅大于 Ⅴ波的1.5倍；波形分化差、重復(fù)不良或未引出。若符合其中任何一項(xiàng)，則定為異常。

1.6 檢測(cè)指標(biāo)

1.6.1 跳臺(tái)實(shí)驗(yàn) 記錄大鼠受到電刺激開始到第1次跳上跳臺(tái)且30 s內(nèi)不跌落所需的時(shí)間記為潛伏期。

1.6.2 平衡試驗(yàn) 記錄大鼠停留在平衡木條上的時(shí)間或陽(yáng)性大鼠的只數(shù)。

1.6.3 BAEP檢測(cè) 觀察3組大鼠PL的Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ水平及AMP的Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ水平。

1.7 統(tǒng)計(jì)方法

用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用t或t′檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 動(dòng)物存亡情況

從動(dòng)物模型制備起始至第8天，30只假手術(shù)組全部存活，60只造模大鼠共死亡13只，存活47只，死亡率21.7%，造模成功率78.3%。致死原因考慮造模過程中麻醉藥物注射過量、注射位置把握不當(dāng)或電凝翼孔出血過多。造模成功的大鼠分別為模型組23只,電項(xiàng)針組24只,假手術(shù)組30只。

2.2 3組大鼠治療前、后跳臺(tái)潛伏期比較

與假手術(shù)組比較，模型組和電項(xiàng)針組大鼠跳臺(tái)潛伏期明顯延長(zhǎng)(P<0.01);與模型組比較，治療后的電項(xiàng)針組大鼠跳臺(tái)潛伏期明顯縮短(P<0.01)。結(jié)果表明,后循環(huán)缺血大鼠跳臺(tái)潛伏期因缺血而延長(zhǎng)，電項(xiàng)針能夠縮短后循環(huán)缺血大鼠的跳臺(tái)潛伏期，優(yōu)于模型組。見表1。

表1 3組大鼠治療前、后跳臺(tái)潛伏期比較

注:與假手術(shù)組比較，aP<0.01；與模型組比較，bP<0.01。

2.3 3組大鼠平衡試驗(yàn)比較

造模前，各組大鼠在木條上可停留2 min以上，說明造模前各組大鼠平衡性較好。造模后，模型組及電項(xiàng)針組大鼠在木條上不能站立并隨即掉落，證明造模成功，停留時(shí)間小于2 min為陽(yáng)性。治療后，與模型組比較，電項(xiàng)針組平衡試驗(yàn)中的陽(yáng)性數(shù)明顯減少(P<0.01) 。結(jié)果表明,后循環(huán)缺血大鼠平衡試驗(yàn)陽(yáng)性數(shù)因缺血而增加，電項(xiàng)針能夠減少后循環(huán)缺血大鼠的陽(yáng)性數(shù)，優(yōu)于模型組。見表2。

表2 3組大鼠平衡試驗(yàn)比較

注:與模型組比較，aP<0.01。

2.4 3組大鼠治療前后對(duì)BAEP各波波峰潛伏期(PL)比較

造模成功1天后(療前)：3組大鼠的Ⅰ波波峰潛伏期(PL)比較無顯著性差異(P>0.05)。III、V波的波峰潛伏期(PL)比較：模型組和電項(xiàng)針組大鼠分別與假手術(shù)組比較均有不同程度的延長(zhǎng)(P<0.01)；模型組和電項(xiàng)針組之間比較無顯著性差異(P>0.05)。

治療7天后(療后),3組大鼠的Ⅰ波波峰潛伏期(PL)比較無顯著性差異(P>0.05)。III、V波的波峰潛伏期(PL)比較,模型組和電項(xiàng)針組之間比較有顯著性差異(P<0.05);模型組與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P<0.01)；電項(xiàng)針組和假手術(shù)組比較有顯著性差異(P<0.05)。

結(jié)果表明,后循環(huán)缺血大鼠BAEP的I波PL無變化，而III波、V波的PL因缺血而延長(zhǎng)，電項(xiàng)針能夠縮短III波、V波的PL，優(yōu)于模型組。見表3。

表3 3組大鼠治療前后對(duì)BAEP各波波峰潛伏期(PL)比較

注：與假手術(shù)組比較,bP>0.05,cP<0.01，fP<0.05;與模型組比較，aP>0.05,dP<0.05。

2.5 3組大鼠治療前后BAEP各波波幅(AMP)比較

造模成功24 h后(療前),3組大鼠的Ⅰ波波幅(AMP)比較無顯著性差異(P>0.05)。III、V波的波幅(AMP)比較,模型組和電項(xiàng)針組大鼠分別與假手術(shù)組比較均有不同程度的減低(P<0.01)；模型組和電項(xiàng)針組之間比較無顯著性差異(P>0.05)。

治療7天后(療后),3組大鼠的Ⅰ波波幅(AMP)比較無顯著性差異(P>0.05)。III、V波的波幅(AMP)：模型組和電項(xiàng)針組之間比較有顯著性差異(P<0.05);模型組與假手術(shù)組比較有顯著性差異(P<0.01)；電項(xiàng)針組和假手術(shù)組有顯著性差異(P<0.05)。

結(jié)果表明,后循環(huán)缺血大鼠BAEP的I波波幅(AMP)無變化，而III波、V波的波幅(AMP)因缺血而減低，電項(xiàng)針能夠升高III波、V波的波幅(AMP)，優(yōu)于模型組。見表4。

表4 3組大鼠治療前后BAEP各波波幅(AMP)比較

注：與假手術(shù)組比較，bP>0.05，cP<0.01，eP<0.05;與模型組比較，aP>0.05,dP<0.05。

3 討論

后循環(huán)缺血在中醫(yī)學(xué)中歸屬為“中風(fēng)”，其病變部位在腦，與心、肝、腎、脾等多個(gè)臟腑密切聯(lián)系，病因病機(jī)有“風(fēng)、火(熱)、瘀、痰、虛”五端[5]。由于后循環(huán)缺血導(dǎo)致的臨床癥狀及綜合征復(fù)雜多樣，其中真性延髓麻痹出現(xiàn)的吞咽障礙，目前,西醫(yī)學(xué)尚無有針對(duì)性的、有效的治療方法，而電項(xiàng)針作為行之有效的治療手段越來越受到全世界的重視與肯定[6-7]。通過多年的臨床研究證實(shí)，電項(xiàng)針的方法在后循環(huán)缺血的治療上，尤其是在治療缺血導(dǎo)致的真性延髓麻痹、復(fù)視、共濟(jì)失調(diào)等西醫(yī)學(xué)無法解決的問題上，取得了非常滿意的療效。

電項(xiàng)針療法[7]是將毫針刺入項(xiàng)部腧穴后，再通以脈沖電流用以治療頭部、項(xiàng)部疾病的一種方法，是一種在臨床上實(shí)用性較強(qiáng)、安全性高、行之有效的治療后循環(huán)缺血的方法。高維濱教授[7-8]在長(zhǎng)期臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)治療后循環(huán)缺血的經(jīng)驗(yàn)要穴，創(chuàng)立了電項(xiàng)針，并運(yùn)用其治療腦干梗死后真性延髓麻痹，在2004年獲得國(guó)家科技進(jìn)步二等獎(jiǎng)，其理想的臨床療效得到了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的一致認(rèn)可，作者作為高老的博士研究生一直致力于電項(xiàng)針治療后循環(huán)缺血的研究工作，臨床經(jīng)驗(yàn)豐富。

電項(xiàng)針取雙側(cè)風(fēng)池穴和供血穴，風(fēng)池穴歸屬于足少陽(yáng)膽經(jīng)，為頭項(xiàng)部要沖,一身治風(fēng)要穴,可清肝利膽、通絡(luò)開竅，可使頭暈耳鳴、惡心嘔吐等癥狀得到明顯改善。供血穴為高老發(fā)明的經(jīng)驗(yàn)效穴，居于風(fēng)池穴下1.5寸，與足太陽(yáng)膀胱經(jīng)、足少陽(yáng)膽經(jīng)、督脈的三大陽(yáng)經(jīng)相聯(lián)系 ,針刺兩穴可平肝熄風(fēng)、醒腦開竅、疏調(diào)氣血、豁痰利咽。在解剖學(xué)中，風(fēng)池、供血穴兩穴深部分布了枕動(dòng)靜脈、椎動(dòng)靜脈和枕神經(jīng)、枕大神經(jīng)、枕小神經(jīng)的分支。電針風(fēng)池穴、供血穴可以使項(xiàng)部肌肉達(dá)到規(guī)律性的顫動(dòng)，增加針刺的強(qiáng)度、興奮局部組織而消除血管痙攣，同時(shí)提高局部肌肉的血液供應(yīng)和血液中的氧分，改善周圍組織的營(yíng)養(yǎng)，故電針風(fēng)池穴、供血穴可改善后循環(huán)的血液供應(yīng)，使腦細(xì)胞的功能得到修復(fù)。

跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)大鼠后循環(huán)缺血的重要方法,反映了大鼠后循環(huán)缺血性眩暈的嚴(yán)重程度。跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,模型組潛伏期延長(zhǎng),表明大鼠后循環(huán)的缺血程度嚴(yán)重；經(jīng)用電項(xiàng)針治療后,大鼠的跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期明顯縮短,表明大鼠后循環(huán)的缺血程度減輕。平衡試驗(yàn)是檢測(cè)大鼠后循環(huán)缺血平衡性的主要方法。平衡試驗(yàn)結(jié)果,模型組大鼠在木條上不能站立并隨即掉落,表明后循環(huán)的缺血大鼠的平衡性差；經(jīng)用電項(xiàng)針治療后,后循環(huán)缺血大鼠的陽(yáng)性數(shù)明顯減少,表明大鼠的平衡性明顯提高。通過跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)及平衡試驗(yàn)進(jìn)行大鼠神經(jīng)功能評(píng)價(jià)，大鼠在后循環(huán)缺血后神經(jīng)功能出現(xiàn)明顯障礙，主要表現(xiàn)為跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)潛伏期延長(zhǎng)及平衡試驗(yàn)得分升高，能夠反映后循環(huán)缺血模型大鼠神經(jīng)功能情況及缺血受損程度，對(duì)BAEP檢測(cè)后循環(huán)缺血模型的準(zhǔn)確性及可靠性給予強(qiáng)有力的支持。

腦干聽覺誘發(fā)電位(The brain stem auditory evoked potential，BAEP)[9-10]，是評(píng)估腦干和大腦損傷重要指標(biāo)之一，是由聲刺激引起的神經(jīng)沖動(dòng)在腦干聽覺傳導(dǎo)通路上的電活動(dòng)，記錄的是聽覺傳導(dǎo)通路中的神經(jīng)電位活動(dòng)，往往腦干輕微受損而臨床無癥狀和體征時(shí)，BAEP已有改變。該方法在實(shí)驗(yàn)研究及臨床上應(yīng)用較廣泛，因?yàn)锽AEP各波的神經(jīng)發(fā)生源與椎-基底動(dòng)脈系統(tǒng)供血區(qū)域較吻合，相對(duì)較明確，具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，且不受意識(shí)狀態(tài)的影響，其中Ⅰ波代表聽覺傳入通路的周圍性波群，III、Ⅴ波代表中樞段動(dòng)作電位，可反映出整個(gè)腦干功能的功能狀態(tài)，通過對(duì)BAEP各波波幅和波峰潛伏期的分析，可以客觀反映腦干的生理、病理功能及聽覺的改變，對(duì)腦干缺血十分敏感，是監(jiān)測(cè)后循環(huán)缺血的良好客觀指標(biāo)。

由于后循環(huán)缺血模型的建立相對(duì)復(fù)雜，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)此模型的研究較少，采用電項(xiàng)針治療后循環(huán)的機(jī)制尚無實(shí)驗(yàn)研究支持。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)過不斷改良采用椎動(dòng)脈電凝法制備了后循環(huán)缺血大鼠模型，并使用BAEP進(jìn)行檢測(cè)及評(píng)估證實(shí)該模型的準(zhǔn)確性及可靠性，具有創(chuàng)新性。實(shí)驗(yàn)從BAEP電生理角度闡明電項(xiàng)針治療后循環(huán)缺血的機(jī)制，治療前后后循環(huán)缺血大鼠BAEP的I波PL、AMP無變化，而III波、V波PL、AMP因缺血和缺血改善而出現(xiàn)相應(yīng)的變化，通過這種改變，更客觀、準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)電項(xiàng)針治療后循環(huán)缺血的療效，為后循環(huán)缺血的實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。