雙陰性T淋巴細(xì)胞在急性發(fā)作期慢性阻塞性肺疾病患者的變化及意義

李天水,張平驥,胡 萍,綦 穎,劉法永,夏國光,戴 麗

(北京積水潭醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)科，北京 100035)

外周血T淋巴細(xì)胞檢測時(shí)可以檢測出一種αβTCR+CD3+CD4-CD8-T淋巴細(xì)胞，即雙陰性T淋巴細(xì)胞(double negative T cells，DNT)[1-2]。STROBER等[3]發(fā)現(xiàn)DNT具有抑制功能并能誘導(dǎo)免疫耐受和抑制性免疫調(diào)節(jié)作用，能夠抑制骨髓移植患者的移植物抗宿主??；能通過抑制同種同源效應(yīng)性T細(xì)胞來抑制受者抗供者器官的移植排斥反應(yīng)[4-5]；在一些自身免疫性疾病中有下調(diào)免疫反應(yīng)的作用[6]，并且可能在腫瘤患者的發(fā)病和治療中存在價(jià)值[7]。也有研究發(fā)現(xiàn)各種炎癥性疾病如細(xì)菌、病毒感染，扁桃體炎創(chuàng)傷等可導(dǎo)致DNT的升高，并推測DNT增高可能通過免疫調(diào)節(jié)來防止過度的免疫反應(yīng)，對機(jī)體起保護(hù)作用[8]。

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary,COPD)存在慢性氣道炎癥及機(jī)體免疫功能調(diào)節(jié)紊亂，研究報(bào)道CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞在其發(fā)生、發(fā)展起一定作用[9-10]，推測DNT在COPD急性加重(acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease,AECOPD)患者的發(fā)病中可能同樣存在一定的作用，但目前尚未見此類報(bào)道。本研究通過回顧性研究AECOPD患者的DNT變化，探討DNT在AECOPD發(fā)病中的變化及意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015年1月1日至2017年11月1日本院住院的AECOPD患者(AECOPD組)252例和同期住院的非COPD患者(對照組)115例。AECOPD組納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)制訂的COPD和AECOPD的診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]；(2)進(jìn)行T淋巴細(xì)胞檢測。對照組納入標(biāo)準(zhǔn)為有T淋巴細(xì)胞檢測數(shù)據(jù)的非COPD患者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并呼吸系統(tǒng)慢性疾病，包括支氣管哮喘、過敏性鼻炎、支氣管擴(kuò)張、結(jié)核；(2)急性上呼吸道感染、肺炎、泌尿系統(tǒng)感染、消化系統(tǒng)感染、軟組織感染等急性感染患者；(3)惡性腫瘤患者；(4)急性骨折患者；(5)急性心肌梗死患者；(6)急性腦血管病患者；(7)腎功能不全患者；(8)自身免疫病患者。

1.2方法

1.2.1觀察指標(biāo) 選取性別、年齡、淋巴細(xì)胞(L)、總T淋巴細(xì)胞(CD3+)、CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞(CD4+)、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞(CD8+)、CD4+/CD8+、DNT、DNT占淋巴細(xì)胞比例(DNT%)，合并癥包括：冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(CHD)、高血壓病(HBP)、心律失常(ARR)、糖尿病(DM)、心力衰竭(HF)、睡眠呼吸暫停綜合征(SAS)、前列腺增生(BPH)、高脂血癥(HLP)、反流性食管炎(RE)。

1.2.2分組 將研究對象分為AECOPD組和對照組，再根據(jù)急性加重頻率將AECOPD患者分為大于或等于2次/年(高發(fā)組，n=95)和小于或等于1次/年(低發(fā)組，n=157)兩組[12]。

1.2.3儀器與試劑 儀器與試劑采用四色流式細(xì)胞術(shù)檢測DNT，儀器購自貝克曼-庫爾特公司，型號為EPIC SXL，熒光標(biāo)記單克隆抗體均購自貝克曼-庫爾特公司。

1.2.4標(biāo)本采集 所有研究對象均采集空腹靜脈血2 mL置于含有乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝劑的真空采血管中，按操作程序處理標(biāo)本并上機(jī)檢測。

2 結(jié) 果

2.1一般資料情況 兩組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。

2.2兩組免疫學(xué)指標(biāo)比較 兩組CD3+、DNT%和DNT比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

2.3不同AECOPD發(fā)作頻率組免疫學(xué)指標(biāo)比較 兩組CD3+、CD4+比較、DNT%和DNT比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表1 兩組患者一般資料比較

表2 兩組免疫學(xué)指標(biāo)比較

2.4AECOPD患者血漿清蛋白水平與免疫學(xué)指標(biāo)相關(guān)性分析 清蛋白水平與L總數(shù)存在弱相關(guān)(P<0.05)，與DNT無明顯相關(guān)性(P>0.05)，見表4。

2.5二元Logistic回歸分析AECOPD的相關(guān)因素 L、CD3+、DNT%與AECOPD發(fā)作次數(shù)有相關(guān)性，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表5。

表3 不同AECOPD發(fā)作頻率組免疫學(xué)指標(biāo)比較

表4 血漿清蛋白與其他免疫學(xué)指標(biāo)的Pearson

表5 AECOPD發(fā)作次數(shù)的Logistic回歸分析

3 討 論

COPD發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，目前并不完全清楚。研究認(rèn)為T 淋巴細(xì)胞及其介導(dǎo)的炎性反應(yīng)參與了COPD和肺氣腫的發(fā)生、發(fā)展[13-14]。T淋巴細(xì)胞亞群中存在的DNT具有獨(dú)特的免疫功能[15-20]；有研究證實(shí)COPD患者的免疫功能狀態(tài)存在異常[13]，但其外周血DNT的變化規(guī)律及在發(fā)病中的作用目前卻并不清楚。

本研究發(fā)現(xiàn)AECOPD組和對照組在L總數(shù)存在差異。T淋巴細(xì)胞亞群檢測發(fā)現(xiàn)兩組外周均存在一定數(shù)量的DNT，且AECOPD組DNT的相對比例和絕對值均較對照組有明顯降低，表明兩組患者的細(xì)胞免疫狀態(tài)確實(shí)存在差異。

按照急性發(fā)作頻率將AECOPD患者分為高發(fā)組和低發(fā)組，發(fā)現(xiàn)高發(fā)組患者的DNT相對數(shù)、絕對數(shù)更低。進(jìn)一步回歸分析發(fā)現(xiàn)DNT與AECOPD的發(fā)病存在相關(guān)性，提示DNT水平可能與AECOPD存在關(guān)系，DNT降低可能導(dǎo)致急性加重的頻率增加。已有的研究發(fā)現(xiàn)在自身免疫性疾病、腫瘤[21]、傳染性疾病[22-23]等多種疾病中DNT明顯增加，與AECOPD患者存在顯著不同。DNT可以抑制免疫細(xì)胞及炎性因子，發(fā)揮免疫抑制功能。DNT在體內(nèi)調(diào)節(jié)免疫的作用機(jī)制十分復(fù)雜。研究發(fā)現(xiàn)DNT對具有相同T細(xì)胞受體的特異性CD8+和CD4+產(chǎn)生抑制作用； DNT可通過抗原提呈細(xì)胞(APC)途徑轉(zhuǎn)變成既表達(dá)特異性抗原又表達(dá) FasL的“殺傷”細(xì)胞，并通過其 FasL將凋亡信號傳遞給CD8+細(xì)胞[4]。有學(xué)者認(rèn)為CD4+、CD8+及DNT均可從APC上獲得主要組織相容性復(fù)合體(MHC)短肽復(fù)合物并遞呈此抗原肽于其鄰近的T淋巴細(xì)胞，可能是免疫調(diào)節(jié)T淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)免疫耐受的中心機(jī)制。DNT在AECOPD患者外周血顯著降低可能會(huì)導(dǎo)致其免疫抑制功能降低，并引起AECOPD患者氣道炎癥調(diào)節(jié)的紊亂的持續(xù)存在，可能是DNT參與AECOPD發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制。

AECOPD組患者血漿清蛋白水平與對照組比較有明顯降低，急性加重高發(fā)組患者血漿清蛋白水平比低發(fā)組患者低，提示AECOPD患者的血漿清蛋白水平存在異常降低，并可能與急性加重的發(fā)作頻率有關(guān)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)AECOPD患者血漿清蛋白水平與淋巴細(xì)胞水平存在相關(guān)性(P<0.05)，但相關(guān)系數(shù)僅為0.131，而與CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、DNT%、DNT均無明顯相關(guān)性。由此可見，AECOPD患者體液免疫的改變可能是獨(dú)立于細(xì)胞免疫的變化。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)AECOPD患者存在細(xì)胞免疫和體液免疫改變，DNT減少和免疫清蛋白的降低可能是AECOPD的一個(gè)表現(xiàn)，并且提示可能是COPD急性發(fā)作頻率高的風(fēng)險(xiǎn)。