不同針灸療法對急性痛風性關節(jié)炎模型大鼠炎癥因子的影響

陳新華 王洪峰 李慧璟

(長春中醫(yī)藥大學，吉林 長春 130117)

急性痛風性關節(jié)炎(AGA)是一種臨床常見的急性疼痛性疾病，常見癥狀有雙下肢關節(jié)活動功能受限，皮膚紅腫并伴有強烈的劇痛，其病情纏綿不愈，并發(fā)癥多，甚至威脅患者生命〔1〕。文獻表明〔2〕：AGA主要由先天性嘌呤代謝異常引起，主要機制為血清尿酸鹽形成結晶沉積于關節(jié)部位，關節(jié)部位因自我保護產生大量炎癥因子，故而出現大量的炎性反應，使患者產生疼痛感〔3〕。針灸治療AGA具有無副作用，安全性高，價格低廉的特點，但由于針灸治療該病的方法各不相同，并且該病發(fā)作迅速，疼痛劇烈，故選取最有效的針灸療法勢在必行。本研究以選取優(yōu)選的針灸治療方法為目的，主要探討不同針灸療法對AGA模型大鼠炎癥因子的影響。

1 資料與方法

1.1動物與造模方法 選取健康SD成年大鼠64只，體重(200±20)g，雌雄各半，其中4只大鼠意外死亡故脫落，將剩余60只成年大鼠隨機分成空白組、模型組、針刺組、電針組、刺血組、艾灸組，10只/組。由長春市寬城區(qū)宏達動物養(yǎng)殖場提供，許可證號SCXK(遼)2015-0001。本研究參照梁莎等〔4〕采用的背側正中進針法建立AGA大鼠模型。稱取尿酸鈉0.2 g，加入無菌生理鹽水4 ml，制成5%尿酸鈉混懸液備用。大鼠10%水合氯醛0.35 ml/100 g腹腔注射麻醉。將大鼠右后肢踝關節(jié)擺放成直角，充分暴露踝關節(jié)與脛腓骨之間的間隙，75%酒精局部皮膚消毒，4號針頭以45%角從該間隙插入右后肢背側正中踝關節(jié)與脛腓骨之間的關節(jié)腔，注入5%尿酸鈉溶液50 μl。大鼠右后肢踝關節(jié)腫脹，關節(jié)活動受限，提示造模成功。

1.2試劑及主要儀器 尿酸鈉(規(guī)格型號：RB/1 g)；白細胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-10、腫瘤壞死因子(TNF)-α(規(guī)格型號均為96T)；蛋白濃度測定試劑盒(規(guī)格型號：P0006C-800次)；蛋白酶抑制劑混合物(規(guī)格型號：P1010-1ML)；以上均購自吉林省金泰化玻有限公司。

1.3試驗方法 空白組：不予任何處置，僅做同期對照觀察。模型組：模型建立成功后，不予任何處置，僅作同期對照觀察。各治療組均于造模成功后第2天開始治療。針刺組先將大鼠用鼠夾固定，參照《實驗針灸學》選取 “足三里”、“陰陵泉”穴，用0.25×0.25 mm毫針進行針刺，每日1次，每次20 min，連續(xù)治療7 d。電針組：固定與選穴同針刺組，針刺完畢后，連接電針治療儀，選用疏密波，頻率2 Hz/15 Hz，每日1次，每次20 min，連續(xù)治療7 d；刺血組：固定與選穴同針刺組，用三棱針在每個穴位上點刺，以出血1滴為度，每天刺血1次，連續(xù)7 d。艾灸組：固定與選穴同針刺組，用麥粒灸(每壯5 mg艾絨)灸“足三里”、“陰陵泉”各5壯，每日1次連續(xù)治療7 d。末次治療后，頸椎脫臼法處死大鼠，迅速打開大鼠右后肢脛跗關節(jié)，以眼科剪剪切軟骨及周圍肌肉組織，10%磷酸鹽緩沖液(PBS)快速洗滌，凍存于1.5 ml凍存管，保存于-80℃冰箱備用。取穴：足三里：小腿前外側，當犢鼻下10 cm(3寸)，距脛骨前緣一橫指(中指)。陰陵泉：小腿內側，當脛骨內側踝后方凹陷處。

1.4觀察指標及檢驗方法 (1)踝關節(jié)周徑測量(周長法)：各組在造模前及造模的第1～7天分別用長2～3 cm的紙條測量造模踝關節(jié)周徑。(2)各組白細胞介素(IL)-1β、腫瘤壞死因子(TNF)-α、IL-4、IL-10蛋白表達水平的檢測：取出滑膜組織，分別測定IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的含量，按試劑盒說明書進行操作。

1.5統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0軟件進行χ2檢驗、t檢驗、秩和檢驗、方差分析。

2 結 果

2.1各組大鼠踝關節(jié)周徑比較 除空白組外,其余各組造模前及造模后第1～7天關節(jié)腫脹程度差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。造模前各組關節(jié)腫脹周徑差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。第1～7天模型組及各治療組關節(jié)腫脹周徑均顯著長于造模前(P<0.05)。第2天刺血組、針刺組、電針組關節(jié)腫脹周徑均顯著短于模型組(P<0.05)，刺血組關節(jié)腫脹周徑顯著短于針刺組及電針組(P<0.05)。第3天艾灸組關節(jié)腫脹周徑顯著短于模型組(P<0.05)。第5天各治療組關節(jié)腫脹周徑均顯著短于模型組(P<0.05)。第6、7天刺血組、針刺組、電針組關節(jié)腫脹周徑均顯著短于模型組(P<0.05)。見表1。

表1 各組大鼠踝關節(jié)腫脹周徑比較

與造模前比較：1)P<0.05；與模型組比較：2)P<0.05；與刺血組比較：3)P<0.05

2.2各組大鼠炎癥因子蛋白表達比較 與空白組比較，模型組IL-1、IL-4、IL-10、TNF-α蛋白表達均顯著升高(P<0.05)。除針刺組IL-4蛋白表達外，其他各組IL-1、IL-4、IL-10、TNF-α蛋白表達與模型組比較均顯著降低(P<0.05)。見表2。

表2 各組間蛋白表達比較

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01，3)P<0.001；與空白組比較：4)P<0.05

3 討 論

痛風是由于尿酸鹽沉積于關節(jié)處引起疼痛的一類代謝性疾病〔5〕。常見癥狀為發(fā)作時劇烈疼痛、關節(jié)出現紅腫等〔6〕，被稱為“不能走路的疾病”〔7〕。近幾年由于生活富足，痛風的發(fā)病率也逐漸增加，現已成為全球疾病的沉重負擔之一〔8〕。痛風的致病因素有很多，如年齡、性別、飲食習慣等〔9～11〕，但局部關節(jié)處尿酸鹽的形成與累積是其中的關鍵因素〔12〕。西醫(yī)常用別嘌呤醇治療此病，但效果不明顯且患者有抗藥性等副作用〔13～19〕。

中醫(yī)認為痛風發(fā)病機制為“風、濕、寒、熱”4種〔20〕。AGA在中醫(yī)當中通常又稱為“痹癥”，而痹癥常從脾胃論治，“脾主四肢肌肉”且脾胃為后天之本，氣血生化之源，針刺足太陰脾經合穴陰陵泉和足陽明胃經合穴足三里的第一層意義便在于此。第二，表里經配伍可以更加有效地使疾病恢復平衡狀態(tài)，一陰一陽，一外一內，起到協(xié)同作用。第三，合穴為經氣深入臟腑的起始部位，針刺合穴可以調理臟腑，使疾病通過臟腑的調節(jié)達到標本兼治的目的，故本研究選取足三里和三陰交兩者配伍。

針灸療法在治療本病時有顯著的療效，如李琴〔21〕采用中藥配合刺絡放血法治療AGA在臨床上取得顯著療效，其研究主要以刺血來緩解患者的疼痛，以中藥達到長期止痛治病的療效。兩者配合從急緩兩方面同時入手，達到“急則治其標，緩則治其本”的目的。羅繼保等〔20〕對近10年刺血療法治療AGA進行文獻總結，發(fā)現刺血療法可與其他療法相配伍，但卻無法被其他療法所取代，根本原因在于刺血療法有通經絡，調氣血，調虛實的作用。電針療法和艾灸療法在臨床中常輔助治療AGA。針灸療法在臨床上雖得到廣泛運用，但并未出現對各個療法比較的研究，所以本研究對此展開實驗，通過實驗可以發(fā)現：(1)若不給予治療，AGA可以在急性期的部分時間恢復，但無法恢復至正常，并且恢復后癥狀加重。(2)AGA發(fā)作時刺血法通過調控IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10蛋白的表達，可以達到更好的治療效果。(3)在治療過程中不同的針灸療法會有一段時間的瓶頸期，經過此段時間繼續(xù)治療，治療方法仍對癥狀有進一步的改善。