表皮生長(zhǎng)因子凍干粉對(duì)敏感性皮膚屏障功能改善作用的臨床觀察

常貴珍，趙睿智，嬴雙，張小艷，夏笛，周婉婷，高恒宇，張理濤

表皮生長(zhǎng)因子（EGF）又稱寡肽-1，在體內(nèi)能促進(jìn)機(jī)體表皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂，促進(jìn)微血管的生長(zhǎng)，改善細(xì)胞生長(zhǎng)的微環(huán)境，促進(jìn)創(chuàng)傷愈合［1］。EGF主要生理活性是誘導(dǎo)細(xì)胞（尤其是表皮基底層細(xì)胞）增殖、分裂分化，促進(jìn)其生長(zhǎng)。EGF通過(guò)與細(xì)胞膜上受體的結(jié)合，激活受體，產(chǎn)生一系列信號(hào)，從而加速皮膚新生細(xì)胞替代衰老細(xì)胞的進(jìn)程［2］。然而，皮膚外用EGF對(duì)皮膚屏障功能的改善及修復(fù)是否有效尚不明確。本研究旨在探討EGF對(duì)敏感肌膚屏障功能改善的影響、可能作用機(jī)制和不良反應(yīng)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2017年7月—10月就診于天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院皮膚科門診的敏感性皮膚志愿者30例，完成30例，均為女性，年齡36～55歲，平均（44.80±4.50）歲。試驗(yàn)地點(diǎn)為天津市中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院皮膚多功能檢測(cè)室，試驗(yàn)周期為1個(gè)月，時(shí)間為2017年11月—12月。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) 年齡在35～55歲、敏感性皮膚的女性志愿者，在受到輕微刺激或日常情況下即有如針刺、發(fā)熱、灼燒、疼痛、瘙癢、泛紅等癥狀；無(wú)嚴(yán)重的系統(tǒng)疾病、免疫缺陷或自身免疫性疾?。唤?個(gè)月面部未接受皮膚治療、美容以及其他可能影響結(jié)果的治療者；無(wú)活動(dòng)性、過(guò)敏性疾病者；無(wú)體質(zhì)高度敏感者；充分了解試驗(yàn)內(nèi)容，愿意參加試驗(yàn)，能夠遵醫(yī)囑配合治療、隨訪，并簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) 妊娠期、哺乳期婦女；已知對(duì)本產(chǎn)品的活性成分或輔料過(guò)敏者；面部皮膚正處于炎性反應(yīng)期者；皮損有明顯細(xì)菌、真菌或其他病原體感染征象者；酗酒者、精神病或?qū)λ幬锍砂a等不能配合者；患有其他可能干擾臨床觀察開展、治療和隨訪或可能給受試志愿者帶來(lái)危險(xiǎn)的皮膚疾病者。

1.4 試劑及設(shè)備 EGF賦活凍干粉及導(dǎo)入液（產(chǎn)品批號(hào)：BRI201712AEXP20201211，天津強(qiáng)微特生物科技有限公司，芭睿芭睿滋養(yǎng)嫩膚賦活禮盒，執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：QB/T 2660），皮膚多功能檢測(cè)儀MAP580（Courage+Khazaka公司，德國(guó)）。

1.5 試驗(yàn)方法 所有受試者在使用產(chǎn)品前接受斑貼試驗(yàn)（先將變應(yīng)原從注射器或小瓶?jī)?nèi)擠出，置于斑試器內(nèi)。液體變應(yīng)原則需預(yù)先在斑試器內(nèi)放置濾紙片，然后滴加變應(yīng)原。所加量以能接觸到皮膚又不溢出斑試器為度。變應(yīng)原加好后將斑試器敷貼于受試者皮膚上，用標(biāo)記筆作好標(biāo)記。敷貼48 h。測(cè)試部位首選上背部，以脊柱兩側(cè)部位最佳，也可以選上臂外側(cè)。下背部和前臂屈側(cè)皮膚由于吸收能力差，易致假陰性，不宜進(jìn)行斑貼試驗(yàn)。試驗(yàn)應(yīng)在完好的皮膚上進(jìn)行。局部皮膚有創(chuàng)傷、炎癥或其他皮膚病時(shí)不宜進(jìn)行斑貼試驗(yàn)）。受試者早晚潔面后按推薦劑量（0.4～0.5 mL）使用EGF 28 d，分別于使用前、使用7、14、21、28 d后來(lái)院接受皮膚多功能檢測(cè)，要求檢測(cè)前2 h清水洗臉，靜息20 min，室內(nèi)溫度19～22℃，濕度40%～50%。分別在額頭、鼻翼、下頜、左右面頰五處選擇一個(gè)固定點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，每處測(cè)5次取平均值。共隨訪檢測(cè)5次，囑受試者每周完成主觀評(píng)價(jià)表并拍攝照片；每次檢測(cè)前行乳酸刺激試驗(yàn)。

1.6 療效評(píng)價(jià) （1）斑貼試驗(yàn)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)參考斑貼試驗(yàn)臨床應(yīng)用專家共識(shí)［3］。（2）皮膚生物學(xué)指標(biāo)的定量評(píng)價(jià)：對(duì)角質(zhì)層含水量、油脂含量、經(jīng)皮水流失（TEWL）及pH進(jìn)行定量檢測(cè)評(píng)價(jià)。（3）乳酸刺激試驗(yàn)：選擇涂抹法進(jìn)行測(cè)試，在室溫下將10%乳酸涂抹于鼻唇溝與任意一側(cè)面頰，分別在2.5 min及5 min對(duì)受試者的敏感反應(yīng)進(jìn)行評(píng)分（0分為無(wú)刺痛；1分為輕度刺痛；2分為中度刺痛；3分為重度刺痛），將2次評(píng)分相加。另外定性描述乳酸刺激試驗(yàn)各時(shí)點(diǎn)的陽(yáng)性率情況，陽(yáng)性指非0分者。（4）皮損改善評(píng)價(jià)：觀察者根據(jù)受試皮膚情況進(jìn)行評(píng)價(jià)，按0～3分計(jì)分。0分：皮膚不干燥，無(wú)瘙癢、鱗屑、紅斑及丘疹；1分：皮膚輕度干燥，輕度瘙癢、鱗屑、紅斑及丘疹；2分：皮膚中度干燥、瘙癢，有鱗屑，皮膚發(fā)紅，有少數(shù)丘疹；3分：皮膚很干燥、瘙癢明顯，鱗屑較多，紅斑丘疹明顯。

1.7 安全性評(píng)價(jià) 在復(fù)診時(shí)對(duì)受試者進(jìn)行不良反應(yīng)評(píng)價(jià)，詢問(wèn)受試者靶部位原癥狀是否加重或出現(xiàn)新的皮損，如瘙癢、干燥、脫屑、刺痛、紅腫等及是否妨礙日常生活。輕度：可耐受不良反應(yīng)，受試者偶能感受到；中度：不良反應(yīng)影響日常生活，受試者自覺(jué)癥狀明顯，但可以忍受，無(wú)需停用受試產(chǎn)品；重度：不良反應(yīng)妨礙日常生活，受試者自覺(jué)癥狀顯著，不能耐受，需要停用產(chǎn)品。對(duì)出現(xiàn)不良反應(yīng)者醫(yī)生對(duì)其進(jìn)行斑貼試驗(yàn)，以確定不良反應(yīng)與產(chǎn)品的因果關(guān)系。并根據(jù)情況確定是否終止試驗(yàn)。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料用±s表示，多組間比較用單因素方差分析，組間多重比較時(shí)符合方差齊性者采用Tukey HSD法，非方差齊者采用Games-Howell法；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 斑貼試驗(yàn) 30例斑貼試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，其中1項(xiàng)（+）17例，2項(xiàng)（+）4例，3項(xiàng)（+）3例，4項(xiàng)（+）2例，5項(xiàng)（+）2例，1項(xiàng)（++）2例，變應(yīng)原均為硫酸鎳。陽(yáng)性項(xiàng)目前3位的變應(yīng)原是硫柳汞、芳香混合物、重鉻酸鉀。

2.2 皮膚生物學(xué)指標(biāo)的定量評(píng)價(jià) 與治療前相比，治療后14 d患者面部含水量、油脂含量開始呈增加趨勢(shì)，pH值呈減小趨勢(shì)（P＜0.05）；而經(jīng)皮水流失情況在治療21 d、乳酸刺激試驗(yàn)和皮損改善評(píng)分在治療7 d開始呈減少趨勢(shì)（P＜0.05），見(jiàn)表1。

2.3 乳酸刺激試驗(yàn)陽(yáng)性率情況 治療前，治療后7、14、21、28 d的陽(yáng)性率分別為100%（30/30）、93.3%（28/30）、70%（21/30）、43.3%（13/30）及23.3%（7/30），呈逐漸降低趨勢(shì)（χ2=56.863，P＜0.001）；28 d后乳酸刺激試驗(yàn)仍為陽(yáng)性的7例受試者中斑貼試驗(yàn)結(jié)果2例為硫酸鎳（++）、2例1項(xiàng)（+）、1例4項(xiàng)（+）、2例5項(xiàng)（+）。

2.4 皮損改善情況 治療后7、14、21、28 d皮損改善率分別為60%（18/30）、66.7%（20/30）、73.3%（22/30）及 86.7%（27/30），改善率呈增加趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.482，P=0.058），斑貼試驗(yàn)示28 d皮損仍無(wú)明顯改善者的4例中2列5項(xiàng)（+）、2例4項(xiàng)（+）。

2.5 產(chǎn)品安全性評(píng)估 治療前后均未發(fā)生不良反應(yīng)，無(wú)1例患者脫落。

Tab.1 Comparison of parameters of sensitive skin before and after treatment表1 敏感性皮膚治療前后各參數(shù)值對(duì)比 （n=30，±s）

Tab.1 Comparison of parameters of sensitive skin before and after treatment表1 敏感性皮膚治療前后各參數(shù)值對(duì)比 （n=30，±s）

＊＊P＜0.01；a與治療前比較，b～d與治療后7、14及21d比較，P＜0.05；#油脂含量為原數(shù)據(jù)分布非正態(tài)，經(jīng)過(guò)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后值

治療前50.86±8.43 1.55±0.29 21.35±7.45 6.32±0.57 4.87±0.43 2.80±0.48檢測(cè)項(xiàng)目含水量（%）油脂含量#（μg/cm2）經(jīng)皮水流失［g/（cm2·h）］pH乳酸刺激試驗(yàn)（分）皮損改善（分）治療7 d 55.24±7.14 1.63±0.35 16.92±6.18 6.25±0.75 3.67±0.61a 1.97±0.41a治療14 d 57.78±8.43a 1.80±0.28a 17.02±6.33 5.63±0.59ab 2.70±0.75ab 1.77±0.43a治療21 d 58.79±6.73a 1.75±0.26a 16.17±5.89a 5.51±0.44ab 1.30±0.65abc 1.13±0.43ab治療28 d 58.72±6.99a 1.74±0.26a 14.49±5.92a 5.40±0.46ab 0.57±0.568abcd 0.87±0.57ab F 5.874＊＊3.860＊＊4.742＊＊17.232＊＊243.391＊＊78.032＊＊

3 討論

敏感性皮膚是常見(jiàn)的皮膚異常狀況，主要表現(xiàn)為皮膚干燥、脫屑、發(fā)紅，容易產(chǎn)生瘙癢、燒灼、刺痛、緊繃等感覺(jué)，特征是患者主觀感覺(jué)癥狀明顯，客觀癥狀輕微，受到外界輕微刺激就會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈反應(yīng)［4］；主要發(fā)生于女性面部，但其他部位亦可受累，多見(jiàn)于雙手、頭皮和足部。敏感性皮膚并非一種獨(dú)立的疾病，而是一類具有相同核心發(fā)病機(jī)制的疾病群，嚴(yán)重者可產(chǎn)生不良情緒或精神癥狀。目前，敏感性皮膚的病理生理機(jī)制仍不清楚。有學(xué)者認(rèn)為皮膚屏障功能的損傷是敏感性皮膚的發(fā)病基礎(chǔ)［5］。皮膚屏障功能的評(píng)估傳統(tǒng)上是通過(guò)TEWL進(jìn)行，而且圍繞每個(gè)角質(zhì)細(xì)胞的蛋白質(zhì)和脂質(zhì)包膜，在防止外來(lái)物質(zhì)通過(guò)皮膚滲透和擴(kuò)散以及內(nèi)部水分流失方面起著至關(guān)重要的作用［6］。此外，敏感性皮膚患者的面部區(qū)域和鼻唇溝在應(yīng)用乳酸后的感知刺痛反應(yīng)高于正常受試者［7］，因此，在本研究中筆者采用TEWL、角質(zhì)層含水量、皮膚油脂含量及pH以及乳酸刺痛試驗(yàn)等作為皮膚屏障功能的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

表皮角質(zhì)形成細(xì)胞是EGF的豐富來(lái)源，并且EGF信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖和分化具有重要影響，EGF在皮膚生長(zhǎng)和體內(nèi)免疫平衡中起關(guān)鍵作用［8］。TEWL在用EGF腹腔注射的小鼠中可顯著降低，而表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）信號(hào)的阻斷能增加TEWL，表明EGF確實(shí)能改善皮膚的屏障功能，EGF在炎癥性皮膚組織中具有重要的免疫調(diào)節(jié)作用；EGFR信號(hào)通路在皮膚暴露于過(guò)敏原后可通過(guò)抑制Th17細(xì)胞分化，從而明顯下調(diào)炎癥細(xì)胞因子白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）和IL-1，表明EGF對(duì)皮膚屏障功能的改善與其抑制皮膚內(nèi)炎癥因子的產(chǎn)生有關(guān)［8］。然而，皮膚局部應(yīng)用EGF對(duì)皮膚屏障功能的改善情況研究較少。最近研究表明，局部應(yīng)用重組人表皮生長(zhǎng)因子（recombinant human epidermal growth factor，rhEGF）有助于緩解面部痤瘡的炎癥反應(yīng)，認(rèn)為其可能是通過(guò)調(diào)節(jié)TLR2信號(hào)，減弱痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)［9］。本研究顯示，敏感性皮膚受試者在外用EGF 28 d后皮膚TEWL明顯降低，相應(yīng)油脂含量、角質(zhì)層含水量也明顯增加，同時(shí)乳酸刺痛試驗(yàn)反應(yīng)性也明顯降低，表明含有EGF的化妝品確實(shí)改善了敏感性皮膚的屏障功能，推測(cè)與其促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)及抑制皮膚內(nèi)炎癥反應(yīng)有關(guān)。同時(shí)，在本研究中，筆者在受試者使用含EGF的產(chǎn)品之前對(duì)其進(jìn)行斑貼試驗(yàn)，以了解受試者自身的接觸過(guò)敏原情況，30例受試者斑貼試驗(yàn)至少有一項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果為（+），而對(duì)產(chǎn)品反應(yīng)較差的受試者多為斑貼試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性項(xiàng)目較多者，考慮敏感性皮膚屏障功能的損傷與患者易受外界環(huán)境刺激從而發(fā)生炎癥性反應(yīng)有關(guān)，進(jìn)而推測(cè)外用EGF改善敏感性皮膚屏障功能可能是通過(guò)抑制皮膚炎癥反應(yīng)實(shí)現(xiàn)。最近一項(xiàng)研究證實(shí)，抑制EGFR信號(hào)可促進(jìn)表皮角質(zhì)形成細(xì)胞和鼠特應(yīng)性皮炎（atopic dermatitis，AD）樣皮損中金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，還能增加抗菌肽（antimicrobial peptides，AMPs）的數(shù)量，此外，激活EGFR信號(hào)通路表現(xiàn)出與呲美莫斯相似的抗炎功效［10］。筆者課題組另一項(xiàng)研究亦顯示，外用rhEGF凝膠對(duì)面部激素依賴性皮炎有較好地輔助治療效果，可顯著改善皮膚功能［11］，表明外用EGF確實(shí)能降低皮膚的炎癥反應(yīng)，但局部外用EGF改善皮膚炎癥反應(yīng)的信號(hào)通路尚不清楚，推測(cè)可能與皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞上EGFR結(jié)合后產(chǎn)生的一系列反應(yīng)有關(guān)。

本試驗(yàn)敏感性皮膚受試者外用EGF治療28 d后，其角質(zhì)層含水量、油脂含量均增加，pH及TEWL也接近于正常范圍，乳酸刺激試驗(yàn)顯示陽(yáng)性率下降到23.3%，皮膚敏感改善率為86.7%。此外，角質(zhì)層含水量和油脂含量在使用EGF后14 d明顯增加，而TEWL明顯降低的情況則出現(xiàn)在使用后的第21天，滯后于前兩者，推測(cè)角質(zhì)層含水量與油脂含量的增加確實(shí)有改善、修復(fù)皮膚屏障功能，進(jìn)而TEWL表現(xiàn)出明顯降低。而對(duì)產(chǎn)品反應(yīng)較差的受試者多為斑貼試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性項(xiàng)目較多者，表明EGF可有效修復(fù)皮膚屏障功能，而受試者對(duì)環(huán)境反應(yīng)敏感程度將影響其功效，考慮與該產(chǎn)品使用時(shí)間僅28 d有關(guān)，延長(zhǎng)使用周期也許能提高有效率。