胃癌患者腹水及外周血中乙醛脫氫酶1、胃泌素17表達(dá)觀察及其相關(guān)性分析

張晶晶，彭瓊

(合肥市第一人民醫(yī)院,合肥230000)

胃癌具有高發(fā)病率、高轉(zhuǎn)移率、高病死率特點(diǎn)，在我國發(fā)病率逐年增高，其中腹膜轉(zhuǎn)移是晚期胃癌死亡的首要原因之一[1,2]。因此研究胃癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移至腹腔的機(jī)制，對預(yù)防胃癌患者腹水生成，降低胃癌病死率具有重要意義。乙醛脫氫酶1(ALDH1)是新發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物，在肺癌、食管癌等實(shí)體瘤中高表達(dá)[3,4]，在腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及耐藥中起重要作用[5]。胃泌素17(G-17)為一種新型的腫瘤標(biāo)志物，具有無創(chuàng)、簡便易行等優(yōu)點(diǎn)，常用于癌前病變及胃癌篩查，被稱為“血清學(xué)活檢”，在臨床應(yīng)用中具有重要價值[6]。兩者在胃癌腹腔轉(zhuǎn)移機(jī)制方面的研究較少[7]。本研究采用ELISA法檢測胃癌伴腹水患者腹水及外周血中ALDH1、G-17水平，觀察其水平變化，并探討兩者在胃癌患者腹水及外周血中的相關(guān)性，為初步探討兩者在胃癌腹腔轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制提供基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2014年8月～2018年8月合肥市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科門診及住院部確診的胃癌患者92例，入組前均未予放化療及手術(shù)治療，其中高分化癌5例、中分化癌49例、低分化癌38例。納入標(biāo)準(zhǔn)：入組胃癌患者均經(jīng)胃鏡及病理學(xué)檢查確診，腹水組均經(jīng)腹水穿刺脫落細(xì)胞學(xué)檢查陽性或經(jīng)病理診斷，并排除其他可以引起腹水的非惡性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①炎癥感染性疾病或自身免疫性疾??；②近期大量使用抑酸劑、抗生素、糖皮質(zhì)激素、非甾體藥物及胃黏膜保護(hù)劑；③合并有其他類型腫瘤；④孕婦或有嚴(yán)重心肺、肝腎功能不全；⑤經(jīng)過放化療的胃癌或精神疾病。按其有無腹腔轉(zhuǎn)移分為腹水組及無腹水組，其中腹水組43例，男23例、女20例，年齡27～75(50.4±7.1)歲；無腹水組49例，男26例、女23例，年齡28～77(47.7±6.8)歲。另選取本院同期體檢中心確診為慢性非萎縮性胃炎患者25例作為對照組，其中男14例、女11例，年齡33～70(52.8±5.3)歲，均經(jīng)胃鏡檢查提示正常胃黏膜，病理組織學(xué)檢查提示黏膜輕度慢性炎癥。三組性別、年齡有可比性。

1.2 腹水及外周血中ALDH1、G-17的檢測 晨起抽取研究對象空腹外周血6 mL，2 000 r/min離心8 min，取上層血清，-80 ℃冰箱保存待檢。抽取腹水組患者腹水200 mL，以3 000 r/min恒溫離心15 min，取上清液，-80 ℃冰箱保存待檢。采用ELISA法檢測腹水組腹水及各組外周血中的ALDH1、G-17水平。其中ALDH1試劑盒購自RayBiotech公司，G-17試劑盒購自芬蘭Biohit公司。

2 結(jié)果

2.1 腹水組腹水和各組外周血中ALDH1、G-17水平比較 腹水組腹水及外周血中ALDH1分別為(27.46±11.58)、(15.57±7.59 )ng/mL，G-17 分別為(50.53±25.47)、(35.36±20.68)pmol/L；無腹水組外周血中ALDH1、 G-17分別為(9.38±4.98) ng/mL、(23.65±8.79) pmol/L；對照組外周血中ALDH1、 G-17分別為(3.32±1.64) ng/mL、(7.67±6.23) pmol/L。 腹水組中腹水ALDH1、G-17水平高于外周血中(P均<0.05)；外周血中ALDH1、G-17水平比較，腹水組高于無腹水組和對照組(P均<0.05)，無腹水組高于對照組(P均<0.05)。

2.2 腹水組外周血及腹水中ALDH1、G-17水平的相關(guān)性 腹水組中，腹水和外周血中ALDH1水平與G-17水平呈正相關(guān)(r=0.592、P<0.05；r=0.523、P<0.05)；在無腹水組中，外周血ALDH1水平與G-17水平呈正相關(guān)(r=0.655、P<0.05)。

3 討論

胃癌是我國最常見的消化道腫瘤[8]，早期發(fā)現(xiàn)率低，易出現(xiàn)腹腔、肝、肺、骨等臟器轉(zhuǎn)移，根治性手術(shù)難度大，術(shù)后易復(fù)發(fā)，常年居我國惡性腫瘤病死率第一位。胃癌腹腔轉(zhuǎn)移時易出現(xiàn)腹水，是晚期胃癌的嚴(yán)重并發(fā)癥，也是導(dǎo)致患者死亡的重要原因，一旦患者出現(xiàn)腹水，5年生存率不到3%，平均生存時間和中位生存時間分別為6.5個月和3.1個月。

ALDH1是乙醛脫氫酶家族新發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤干細(xì)胞(CSC)標(biāo)志物[9,10]，是各組織中正常干細(xì)胞和腫瘤干細(xì)胞生長、分化的必需物質(zhì)，在神經(jīng)系統(tǒng)、造血系統(tǒng)的干、祖細(xì)胞中明顯升高[11]。ALDH1在腫瘤組織中表達(dá)高于癌旁組織，臨床分期越高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越早、預(yù)后越差的患者，ALDH1表達(dá)水平越高[12]，ALDH1與腫瘤分期、有無轉(zhuǎn)移及預(yù)后有明顯相關(guān)性[5,13]。ALDH1在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的具體機(jī)制尚不明確，可能通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(EMT)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)中導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移[14,15]。本研究發(fā)現(xiàn)，相對無腹水組，腹水組患者外周血中ALDH1表達(dá)升高，且腹水組患者腹水中ALDH1表達(dá)高于外周血中,提示ALDH可能通過某些機(jī)制，如EMT、VEGF，發(fā)揮CSC的作用，導(dǎo)致胃癌發(fā)展、轉(zhuǎn)移，腹水生成。

G-17是胃竇和十二指腸G細(xì)胞合成和分泌的一種胃泌素，在消化道腫瘤患者外周血及癌組織中高表達(dá)，臨床分期越高者其表達(dá)水平越高[16]。因此，目前認(rèn)為G-17在胃癌疾病篩查及疾病早期診斷過程中可能發(fā)揮重要作用，臨床中廣泛用于癌前疾病及早期胃癌篩查[17,18]。G-17與進(jìn)展期胃癌，特別是胃癌伴腹腔轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究較少，其在腫瘤發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制尚未完全明確。目前研究認(rèn)為，G-17可能通過與其受體，如胃泌素與膽囊收縮素-2受體(CCK-2R)結(jié)合，刺激多個信號傳導(dǎo)路徑，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖。此外，G-17可通過激活混合譜系激酶3及INK1等激酶，活化金屬基質(zhì)蛋白酶[19]，降解細(xì)胞外基質(zhì)，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移[20～22]。本研究發(fā)現(xiàn)，在腹水組患者中，其外周血中G-17表達(dá)水平較無腹水組及對照組升高，且腹水中G-17表達(dá)高于患者外周血，提示在胃癌腹水轉(zhuǎn)移過程中，G-17可能通過與CCK-2R等受體結(jié)合啟動信號傳導(dǎo)通路或者通過金屬基質(zhì)蛋白酶作用導(dǎo)致腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移。

腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移是一個漸進(jìn)式的過程，涉及多級反應(yīng)。在胃癌腹腔轉(zhuǎn)移形成惡性腹水過程中，ALDH1通過VEGF促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，導(dǎo)致腫瘤和新生組織中血管生成；而G-17通過與CCK-2R結(jié)合發(fā)揮作用，在血管生成中增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞活性，增加微血管和小靜脈的通透性從而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[23]；由此考慮兩者可能通過相同或者相近的機(jī)制協(xié)同作用，促進(jìn)和加速腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移。本研究發(fā)現(xiàn)，在腹水組中，腹水和外周血中ALDH1表達(dá)水平與G-17水平呈正相關(guān)；在無腹水組中，外周血ALDH1水平與G-17水平呈正相關(guān)；提示ALDH1和G-17可能通過上述機(jī)制或其他機(jī)制，共同促進(jìn)和加速腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移。

綜上所述，胃癌患者腹水及外周血中ALDH1、G-17異常高表達(dá)，且具有高度相關(guān)性，可能通過某種協(xié)同機(jī)制，促進(jìn)胃癌進(jìn)一步轉(zhuǎn)移、惡化。