迷迭香精油殼聚糖納米粒的制備及其對冷藏草魚保鮮效果研究

劉善智，范小靜，閆 合，周一萬，張 興

(西北農(nóng)林科技大學(xué) 無公害農(nóng)藥研究服務(wù)中心，陜西省生物農(nóng)藥工程技術(shù)研究中心，陜西楊凌 712100)

水產(chǎn)動物具有低脂肪、高蛋白、高不飽和脂肪酸以及維生素和礦物質(zhì)豐富等特點，是合理膳食結(jié)構(gòu)中不可缺少的組成部分。同時，由于水分及營養(yǎng)成分含量高，且自身易攜帶大量細(xì)菌，水產(chǎn)品在加工、儲運(yùn)和銷售過程中極易變色、變味和腐敗變質(zhì)。目前，低溫貯藏是最常見的水產(chǎn)品保鮮方式。然而低溫環(huán)境并不能有效延緩嗜冷菌的生長繁殖和不飽和脂肪酸的氧化，過低的溫度還會使水產(chǎn)品的質(zhì)構(gòu)特性發(fā)生劣化[1]，因此，在水產(chǎn)品貯藏期間常常會使用一些化學(xué)保鮮劑。常用的化學(xué)合成保鮮劑其潛在的毒副作用被越來越多的人所詬病[2]，開發(fā)天然無毒的生物保鮮劑，延長水產(chǎn)品貨架期，提高水產(chǎn)品安全性，已成為水產(chǎn)品保藏技術(shù)發(fā)展的趨勢。

植物精油是從芳香植物中提取，具有強(qiáng)烈香味的揮發(fā)性油狀液體物質(zhì)。由于其安全無毒，活性良好等優(yōu)點，精油保鮮劑的開發(fā)與利用現(xiàn)已成為食品貯藏加工領(lǐng)域的熱點內(nèi)容。精油本身水溶性差，易揮發(fā)，對光、熱等環(huán)境因素敏感，這些特性限制了精油的使用范圍，因此研制緩釋型精油保鮮劑，提高其穩(wěn)定性和利用率，對食品保鮮意義重大[3]。殼聚糖成本低廉、安全可食用、生物降解性和生物相容性好，是制備精油保鮮劑的理想載體材料。本試驗在西北農(nóng)林科技大學(xué)無公害農(nóng)藥研究服務(wù)中心前期篩選的基礎(chǔ)上，選擇迷迭香精油作為芯材，利用離子交聯(lián)法制備迷迭香精油殼聚糖納米制劑(rosemary essential oil loaded chitosan nanoparticles，CS-NP-REO)并優(yōu)化其制備工藝，進(jìn)一步考察最優(yōu)工藝下制備的迷迭香精油殼聚糖納米制劑對冷藏草魚肉的保鮮作用，以期為冷藏魚肉保鮮劑的研制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 材料與試劑 鮮活草魚(Ctenopharyngodonidella)購自陜西省楊凌好又多超市。

殼聚糖(CS，脫乙酰度≥80%)、三聚磷酸鈉(TPP)、2-硫代巴比妥酸(TBA)、三氯乙酸、氧化鎂、硼酸、氫氧化鈉、鹽酸、甲基紅、次甲基藍(lán)等，購自上海阿拉丁試劑有限公司。

迷迭香精油(rosemary essential oil，REO)購自廣州恒信香料有限公司。

菌落總數(shù)的測定用平板計數(shù)瓊脂(plate count agar，PCA)培養(yǎng)基：將胰蛋白胨 5 g， 酵母浸膏 2.5 g，葡萄糖 1.0 g，瓊脂 15 g，加入蒸餾水中，煮沸溶解，pH 調(diào)至7.0，121 ℃高壓滅菌15 min。

1.1.2 儀器與設(shè)備 HITACHI CR22N高速冷凍離心機(jī)，日本日立公司；UV-2500 紫外分光光度計，日本島津公司；KJELTEC 2300，自動凱氏定氮儀，丹麥FOSS公司；WSC-S 測色色差計，上海精密科學(xué)儀器有限公司；PHS-3C 酸度計，上海日島科學(xué)儀器有限公司。

1.2 CS-NP-REO的制備及條件優(yōu)化

參考武陶和丁武[4]的方法，采用離子交聯(lián)法制備CS-NP-REO及空白納米粒(CS-NP)。稱取適量的殼聚糖粉末，室溫下溶于φ=1% 醋酸溶液，在室溫下攪拌(600 r/min)過夜，得到不同的CS溶液。調(diào)節(jié)溶液pH至4，0.45 μm微孔濾膜過濾。加入溶液體積φ=1%的吐溫-80，攪拌混勻。逐滴加入不同質(zhì)量濃度的TPP溶液，CS與TPP溶液體積比為5∶2，溫和攪拌30 min，即得CS-NP。

量取一定濃度的REO乙醇溶液，CS與REO體積比為5∶1，緩慢逐滴加入到配制好的CS溶液中，室溫下溫和攪拌30 min( 600 r/min )，然后逐滴加入TPP溶液，室溫下溫和攪拌30 min，即得CS-NP-REO混懸液。

1.2.1 單因素試驗 根據(jù)文獻(xiàn)中的報道以及預(yù)試驗結(jié)果，選擇CS、TPP、REO質(zhì)量濃度和反應(yīng)體系pH 4項制備條件設(shè)計單因素試驗。

pH對CS-NP-REO包封率的影響：用NaOH和醋酸調(diào)節(jié)溶液pH到3、3.5、4、4.5、5，制備CS-NP-REO，固定CS、TPP、REO分別為3、1.5、2 mg/mL，觀察納米粒混懸液狀態(tài)并測定包封率。

CS質(zhì)量濃度對CS-NP-REO包封率的影響：按前述方法分別制備質(zhì)量濃度為1、2、3、4和5 mg/mL的CS溶液用于CS-NP-REO混懸液制備，固定TPP、REO質(zhì)量濃度分別為1.5和2 mg/mL，觀察納米?；鞈乙籂顟B(tài)并測定包封率。

TPP質(zhì)量濃度對CS-NP-REO包封率的影響：按前述方法分別制備質(zhì)量濃度為0.5、1、1.5、2和2.5 mg/mL的TPP溶液用于CS-NP-REO混懸液制備，固定CS、REO質(zhì)量濃度分別為3 和2 mg/mL，觀察納米?；鞈乙籂顟B(tài)并測定包封率。

REO質(zhì)量濃度對CS-NP-REO包封率的影響：按前述方法分別制備質(zhì)量濃度為0.5、1、1.5、2和2.5 mg/mL的REO溶液用于CS-NP-REO混懸液制備，固定CS、TPP質(zhì)量濃度分別為3和1.5 mg/mL，觀察納米?；鞈乙籂顟B(tài)并測定包封率。

1.2.2 CS-NP-REO制備條件優(yōu)化 根據(jù)以上試驗結(jié)果，以CS質(zhì)量濃度(A)(1、2、3 mg/mL)、TPP質(zhì)量濃度(B)(1、1.5、2 mg/mL)、REO質(zhì)量濃度(C)(1、1.5、2 mg/mL)為影響因子設(shè)計L9(33)正交試驗進(jìn)行工藝優(yōu)化，固定CS、TPP和REO體積比為5∶2∶1。

1.3 CS-NP-REO的表征

1.3.1 包封率和載藥量的測定 取REO 10.00 mg于10 mL量瓶中，加乙醇定容，得1.0 mg/mL精油乙醇溶液。精密量取該溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0和1.2 mL，分別置于10 mL量瓶中，加乙醇稀釋，得質(zhì)量濃度為0.02、0.04、0.06、0.08、0.10和0.12 mg/mL系列待測液。以溶劑作為空白對照，在250 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，得回歸方程y= 1.09x- 0.001 7(R2= 0.991 6)，x線性范圍0.02～0.12 mg/mL。

將CS-NP-REO混懸液置于超濾離心管中，4 ℃下高速離心(8 000 r/min)60 min，取上清液，用紫外分光光度計測定游離精油含量，檢測波長250 nm。納米粒分離洗滌后，冷凍干燥稱質(zhì)量。包封率(EE)=(總投藥量-游離藥量)/總投藥量×100%；載藥量(LC)=(總投藥量-游離藥量)/納米粒質(zhì)量×100%

1.3.2 納米粒外觀形態(tài)與粒徑的測定 稱取CS-NP-REO凍干粉末，用φ=1%醋酸稀釋至適當(dāng)濃度，滴加到硅片上自然風(fēng)干，固定噴金后，掃描電鏡下觀察其形態(tài)大小。

1.4 CS-NP-REO對冷藏草魚肉保鮮效果評價

1.4.1 保鮮劑的制備 根據(jù)“1.3.1”所述方法，按照優(yōu)化后的條件制備CS-NP和CS-NP-REO。并以無水乙醇為溶劑，配制與CS-NP-REO中包封的REO濃度相同的精油溶液。

1.4.2 草魚肉處理 將質(zhì)量約1 kg的鮮活草魚，擊斃后去頭、尾、鱗、骨、內(nèi)臟，用水沖洗干凈，沿脊椎剖為兩半，置于4 ℃冰箱中，備用。使用滅菌過的案板、盛裝容器、刀具等，在無菌試驗操作臺將肉樣剝皮后切成魚塊，按質(zhì)量隨機(jī)等分為4組：CS-NP組、CS-NP-REO組、REO組和CK組。以事先配制好的不同保鮮劑浸浴處理2 min，取出后于4 ℃冷庫中瀝干，裝入滅菌的食品保鮮袋內(nèi)并密封，立即置于4 ℃冰箱中儲藏。處理當(dāng)天記為儲藏第0天，分別在貯藏的第1、3、5、7、9 天，隨機(jī)取樣進(jìn)行感官評定、pH、菌落總數(shù)、揮發(fā)性鹽基氮值(TVB-N)、硫代巴比妥酸值(TBARS)和色差的測定。

1.4.3 指標(biāo)測定 感官評定：采用5人組成的感官評定小組進(jìn)行感官描述檢驗，按照色澤、氣味、組織形態(tài)與組織彈性對不同處理條件下草魚肌肉的感官質(zhì)量進(jìn)行評定，分?jǐn)?shù)范圍為1～10分[5]，色澤(10分：非常光亮；1分：無光澤)光亮、氣味輕微(10分：輕微；1分：強(qiáng)烈)、肌肉紋理清晰(10分：清晰； 1分：模糊)、彈性好(10分：很有彈性；1分：沒彈性)，得分越高。

色差測定：用色差計測定樣品L*、a*、b*，各樣品均進(jìn)行3次測定取平均值。

pH測定：稱取5 g 魚肉于燒杯中，加入45 mL 蒸餾水，攪拌均勻后靜置，利用pH計測定其pH。

菌落總數(shù)測定：按照GB 4789.2-2010《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗菌落總數(shù)測定》[6]釆用平板計數(shù)培養(yǎng)基(PCA)傾注法計數(shù)測定。

TVB-N測定：參照水產(chǎn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SC/T3032-2007《水產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮的測定》[7]，采用KJELTEC 2300自動凱氏定氮儀測定。

TBARS測定：參照黃卉等[8]的方法。取10.0 g 魚肉樣品絞碎，加入50 mLφ=7.5%三氯乙酸(含w=0.1%EDTA)，振搖30 min，雙層濾紙過濾2次。取5 mL上清液，加入5 mL 0.02 mol/L 2-硫代巴比妥酸(TBA)溶液，沸水浴反應(yīng)40 min，取出用流動水冷卻，于8 000 r/min離心10 min，取上清液，加入5 mL氯仿?lián)u勻，靜置分層后取上清液分別在532 nm和600 nm處比色，記錄吸光值并用以下公式計算TBARS。

TBARS=(A532-A600)/155×(1/10)×72.06×100

(3)

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析

利用Excel 2010和SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理及繪圖，多重比較采用Duncan’s法(P<0.05為顯著水平)。

2 結(jié)果與分析

2.1 CS-NP-REO的制備及條件優(yōu)化

2.1.1 單因素試驗結(jié)果 由圖1可知，pH在 3～4 時，殼聚糖納米粒包封率不斷增大。當(dāng)pH等于4時，包封率達(dá)到最大(83.07%)，反應(yīng)體系最為穩(wěn)定。

圖1 單因素試驗結(jié)果Fig.1 Results of one-factor experimental

之后pH繼續(xù)增加，體系中絮狀物和沉淀更容易形成，包封率變化不顯著。在TPP質(zhì)量濃度(1.5 mg/mL)不變的條件下，包封率隨CS質(zhì)量濃度的增加而增大。當(dāng)CS質(zhì)量濃度為3 mg/mL時，納米粒包封率達(dá)到最大(84.73%)，之后開始減?。辉贑S質(zhì)量濃度(3 mg/mL)不變的條件下，納米粒包封率隨著TPP質(zhì)量濃度的增加，先增大后減小。在TPP質(zhì)量濃度為 1.5 mg/mL 時達(dá)到最大(83.06%)。納米粒包封率隨著REO質(zhì)量濃度的增加而增大。REO質(zhì)量濃度為2 mg/mL時，包封率為76.34%，當(dāng)質(zhì)量濃度超過2 mg/mL時，包封率變化不顯著。

2.1.2 正交試驗結(jié)果 由極差分析和方差分析結(jié)果可知(表1和表2)，影響包封率的因素順序為 A>C>B，其中CS質(zhì)量濃度對精油包封率有顯著影響，REO和TPP質(zhì)量濃度影響較小。組合A2B2C3包封率最高，因此，制備CS-NP-REO的較優(yōu)條件是CS、TPP和REO質(zhì)量濃度為2、1.5和2 mg/mL，體積比為5∶2∶1，pH為4。

表1 L9(33)正交試驗結(jié)果Table 1 Results of L9(33) orthogonal test

表2 方差分析結(jié)果Table 2 Variance analysis of orthogonal design

2.2 CS-NP-REO的表征

2.2.1 包封率和載藥量 采用超濾離心法檢測最優(yōu)條件(CS、TPP和REO質(zhì)量濃度為2、1.5和2 mg/mL，體積比為5∶2∶1，pH為4)下制備的CS-NP-REO，結(jié)果顯示納米粒包封率為84.52%，載藥量為10.56%。

2.2.2 納米粒外觀形態(tài)與粒徑 掃描電鏡下放大105倍后，可以觀察到CS-NP-REO呈球形顆粒狀，形態(tài)飽滿，粒徑均勻，約為200 nm，在懸液中分散性良好。

2.3 CS-NP-REO保鮮效果評價

2.3.1 CS-NP-REO對冷藏草魚肉感官評分的影響 由圖2結(jié)果可知，貯藏期間草魚肉感官評分隨貯藏時間的變化不斷下降。經(jīng)CS-NP-REO處理的樣品變化趨勢和對照組有明顯差異。貯藏初期，魚塊肌肉組織緊密完整，紋理清晰，富有彈性，表面光亮，具有鮮味。在貯藏第5天時，CS-NP-REO處理組變化較慢，尚無明顯異味，肉體表面仍具光澤，而對照組樣品開始有腥臭味，肉質(zhì)疏松且彈性較差，紅色變淡，表面缺乏光澤，感官評分平均為6.11，已接近腐?。籆S-NP-REO處理組在第7天時開始呈現(xiàn)腥臭味，感官評分降至6.20，對照組則有明顯的氨臭味，肉樣紋理不清，顏色輕微發(fā)黃，按壓變形后不易恢復(fù)且表面附有白色粘液。

圖2 冷藏草魚貯藏過程中感官評分的變化Fig.2 Changes of sensory evaluation of chilled grass carp during storage

2.3.2 CS-NP-REO對冷藏草魚肉pH的影響 冷藏草魚貯藏過程中pH的變化如圖3所示，各處理組及空白對照組的pH在整個貯藏過程中呈上升趨勢，這與周強(qiáng)等[9]的結(jié)果一致。與空白對照組相比，經(jīng)保鮮劑處理后的各樣品pH變化緩慢，CS-NP-REO處理組效果尤為明顯。在9 d的貯藏期內(nèi)，CS-NP-REO處理草魚肉的pH在6.69～6.96變化，其中第3天最低，其后一直上升。CS-NP、REO及空白處理組pH變化分別為6.72～7.02、6.87～7.11、6.79～7.21。CS-NP-REO處理組在貯藏第9天時pH達(dá)到6.96，仍未超過7，而對照組在第7天就達(dá)到7.07，且貯藏過程中其pH始終低于對照組，說明CS-NP-REO對冷藏草魚具有一定的保鮮作用。

圖3 冷藏草魚貯藏過程中pH的變化Fig.3 Changes of pH in chilled grass carp during storage

2.3.3 CS-NP-REO對冷藏草魚肉菌落總數(shù)的影響 如圖4所示，草魚肉在貯藏期間，隨著貯藏時間的延長，菌落總數(shù)不斷上升。菌落總數(shù)初始值為1.28×104～ 1.86×104CFU/g。儲藏初期，CS-NP處理組和CS-NP-REO處理組菌落總數(shù)增長相對緩慢，在冷藏第3 天時，兩組草魚肉的品質(zhì)均在一級品范圍以內(nèi)，其菌落總數(shù)與REO組和對照組存在顯著差異(P<0.05)。對照組在貯藏的第7天菌落總數(shù)達(dá)到2.09×107CFU/g，肉樣表面有白色粘液，并散發(fā)腥臭味，超出淡水魚可接受閾值，而經(jīng)CS-NP-REO處理后，魚肉菌落總數(shù)在第7天達(dá)到4.47×106CFU/g，第9天達(dá)到1.51×107CFU/g。

圖4 冷藏草魚貯藏過程中菌落總數(shù)的變化Fig.4 Changes in total viable counts(TVC) of chilled grass carp during storage

2.3.4 CS-NP-REO對冷藏草魚肉TVB-N的影響 根據(jù)《SC/T 3032-2007 水產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮測定的方法》[7]的規(guī)定，淡水魚的TVB-N不得大于限量值20 mg/hg，超出不可食用。由圖5可知，對照組在第5天TVB-N達(dá)到19.64 mg/hg，已接近不可食用的閾值，在貯藏第7天，TVB-N為31.72 mg/hg，肉樣已腐敗變質(zhì)；CS-NP-REO處理組在貯藏第7天TVB-N為18.74 mg/hg，仍低于限量值，且與REO組22.73 mg/hg 存在顯著性差異(P<0.05)。在貯藏第9天時，CS-NP-REO組TVB-N達(dá)到24.42 mg/hg，樣品腐敗變質(zhì)，草魚最終冷藏時間在9 d以內(nèi)。

圖5 冷藏草魚貯藏過程中TVB-N的變化Fig.5 Changes in TVB-N of chilled grass carp during storage

2.3.5 CS-NP-REO對冷藏草魚肉TBARS的影響 如圖6所示，貯藏初期，新鮮草魚TBARS在0.50×10-3mg/g以下，對照組和CS-NP處理組分別在第1、3天后迅速上升，CS-NP-REO組和REO組整個貯藏內(nèi)變化緩慢。從第5天到貯藏結(jié)束，CS-NP-REO組TBARS顯著(P<0.05)低于CS-NP處理組，說明CS-NP包埋迷迭香精油后，其對脂質(zhì)的抗氧化作用顯著(P<0.05)優(yōu)于空白納米粒。在貯藏第7天時，對照組TBARS已達(dá)1.72 ×10-3mg/g，CS-NP組達(dá)到1.28×10-3mg/g，而REO組和CS-NP-REO組分別為0.52×10-3mg/g、0.61×10-3mg/g。這說明REO具有良好的抗氧化作用。CS-NP-REO能有效減緩冷藏草魚肉中脂肪氧化速率。

2.3.6 CS-NP-REO對冷藏草魚肉色差變化的影響 由表4可知，隨著貯藏時間的延長，肉樣漸漸失去光澤，紅色褪去，黃度增加。各處理組較對照組變化緩慢。貯藏第7天，對照組肉樣完全腐敗變質(zhì)，其a*在4組試驗中最低(2.01)；b*最高(1.53)，且與各處理組存在顯著差異(P<0.05)。

圖6 冷藏草魚貯藏過程中TBARS的變化Fig.6 Change in TBARS of chilled grass carp during storage

色差指標(biāo)Change of color處理Treatment貯藏時間/d Storage time13579L?CS-NP-REO50.72±0.27 aA50.53±0.13 aA50.12±0.12 bA49.07±0.02 cA48.76±0.05 cACS-NP50.67±0.02 aA49.41±0.07 bB50.33±0.40 aA47.40±0.06 cD46.58±0.05 dCREO50.73±0.03 aA50.46±0.05 bA50.28±0.16 bA48.59±0.05 cB46.73±0.06 dCCK50.53±0.62 bA49.63±0.04 bA49.65±0.12 bA48.19±0.06 cC47.20±0.06 dBa?CS-NP-REO3.54±0.10 aA3.17±0.01 bA2.82±0.01 cA2.24±0.02 dB2.21±0.06 dBCS-NP3.51±0.01 aA3.16±0.04 bA2.78±0.01 cA2.23±0.04 dB2.46±0.02 cAREO3.61±0.01 aA2.92±0.02 bC2.53±0.04 cB2.56±0.01 cA2.15±0.05 dBCK3.61±0.27 aA3.01±0.02 bB2.26±0.02 cC2.01±0.10 cC1.39±0.04 dCb?CS-NP-REO0.59±0.06 bA0.52±0.01 bC0.30±0.02 cC1.27±0.03 aB1.33±0.03 aBCS-NP0.61±0.01 cA0.76±0.04 bB0.82±0.12 bB1.31±0.02 aB1.39±0.01 aBREO0.62±0.01 dA0.80±0.01 cB1.32±0.03 bA1.31±0.08 bB1.48±0.04 aBCK0.61±0.11 dA1.34±0.04 cA1.46±0.03 cA1.53±0.03 bcA1.77±0.13 aA

注：同行不同小寫字母表示顯著差異(P<0.05)，同列不同大寫字母表示顯著差異(P<0.05)。

Note:Values in the same row with the different lowercase letters are not significantly different(P<0.05),values in the same column with different capital letters are not significantly different(P<0.05).

貯藏末期CS-NP-REO組L*顯著大于其他各組，說明魚肉亮度較大，表面有光澤，CS-NP-REO處理可有效減緩草魚冷藏期間的氧化過程，改善魚肉的外觀色澤，延長保藏時間。

3 討論與結(jié)論

3.1 CS-NP-REO對冷藏草魚的保鮮效果

為開發(fā)能夠應(yīng)用于生鮮魚肉的新型綠色化學(xué)保鮮劑，本研究以殼聚糖為壁材，以迷迭香精油為芯材，制備了CS-NP-REO。經(jīng)測定CS-NP-REO處理的草魚肉在冷藏期間各指標(biāo)的變化發(fā)現(xiàn)，其對冷藏草魚具有明顯的保鮮效果。從感官指標(biāo)上看，空白處理組在貯藏第3天，L*已低于50，b*達(dá)1.34，魚肉失去光澤，顏色變黃，而CS-NP-REO處理組冷藏7 dL*降至49.07，b*上升至1.27，比對照組延長了4 d左右。從微生物指標(biāo)上看，在冷藏第3 天，CS-NP-REO處理組菌落總數(shù)為3.02×104CFU/g ，對照組為3.98×10-5CFU/g，兩者存在顯著差異，說明殼聚糖納米粒在貯藏初期，對魚肉有明顯的抑菌效果。從理化指標(biāo)方面比較，對照組在第5天TVB-N已接近不可食用的閾值，CS-NP-REO組可貯藏8 d左右，延長了3 d貨架期。對照組和CS-NP-REO組的TBARS分別于第3天和第9天達(dá)到0.7左右，將冷藏草魚的貯藏終點延長了6 d。綜合上述各項指標(biāo)的測定結(jié)果，可以看出：CS-NP-REO對冷藏草魚具有明顯的保鮮效果，可延長肉樣貨架期3～4 d。該結(jié)果與如張進(jìn)杰等[10]制備的殼聚糖和Nisin混合涂膜液，將鰱魚塊的貨架期延長了3～4 d，與劉楠等[11]利用生物保鮮劑Nisin，延長了冷藏草魚片3 d貨架期的結(jié)論一致。國外也有研究[12-14]利用殼聚糖納米粒做為藥物載體，包埋百里香精油、牛至精油、Nisin等其他生物保鮮材料，提高其保鮮效果，擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，延長了不同食品的貨架期。

3.2 CS-NP-REO通過延緩脂質(zhì)氧化和抑制致腐微生物的生長繁殖來延長草魚的貯藏時間

CS-NP-REO的保鮮作用與迷迭香精油和殼聚糖的生物活性有關(guān)。迷迭香精油具有良好的抗氧化能力[15-17]和抑菌能力[18-19]。殷燕等[19]用迷迭香提取物延長了真空包裝豬肉餅的貨架期，在一定濃度下，其保鮮效果與二丁基羥基甲苯相當(dāng)。本試驗通過比較不同處理下草魚肉TBARS隨時間發(fā)生的變化可以看出，CS-NP-REO和REO處理組都能有效地抑制丙二醛的產(chǎn)生，說明 CS-NP-REO主要依靠迷迭香精油抵抗脂質(zhì)的氧化。Maria[20]研究證明迷迭香精油能有效延緩金頭鯛魚糜中脂質(zhì)氧化的速率。同樣有研究證明，殼聚糖也具備一定程度的抗氧化能力[21]和抑菌能力[22]，本試驗在對各組肉樣菌落總數(shù)的測定結(jié)果分析中發(fā)現(xiàn)，殼聚糖納米粒能在貯藏初期較好地抑制菌落生長。這與處理美國紅魚時的測定結(jié)果相一致[23]。說明CS-NP-REO的殼聚糖壁材對魚肉上的細(xì)菌菌落有抑制作用。Solval等[24]同樣用殼聚糖納米粒來抑制凍蝦中好氧菌及霉菌的數(shù)量，改善了其在貨架期內(nèi)的質(zhì)量。CS-NP-REO結(jié)合迷迭香精油和殼聚糖的保鮮活性，并增強(qiáng)了作用效果，比兩者的單獨使用更能延長生鮮魚肉的貯藏時間。

3.3 CS-NP-REO在生鮮魚肉的保鮮應(yīng)用上具有進(jìn)一步開發(fā)價值

提高植物精油穩(wěn)定性和持效性的緩釋劑型的開發(fā)，成為研究的熱點。裴志勝等[25]利用羅望子膠和阿拉伯膠分子包埋法制備微膠囊高良姜精油，并應(yīng)用于冷藏金鯧魚糜的保鮮中，在一定程度上延緩了魚糜的變質(zhì)。丁德龍等[26]以殼聚糖為壁材，白豆蔻精油為芯材制備微膠囊保鮮劑，提升了雞肉在貯藏期內(nèi)的鮮度水平。本研究中利用離子交聯(lián)法制備的CS-NP-REO能有效延長迷迭香精油的保鮮作用時間，提高作用效果，改善其難溶于水、揮發(fā)性強(qiáng)的缺點，提高了植物精油的實用性。而且CS-NP-REO制備全程使用無毒的天然材料，因此可廣泛應(yīng)用于食品領(lǐng)域。盡管在本研究中，CS-NP-REO在冷藏草魚上保鮮效果良好，但影響生鮮魚肉貨架期的因素很多，不同的水產(chǎn)種類、棲息環(huán)境、致死方式、貯藏加工條件等都會造成結(jié)果的差異，因此，實現(xiàn)CS-NP-REO對不同生鮮魚肉的實際保鮮應(yīng)用，仍需要進(jìn)一步的指標(biāo)檢測和中試放大試驗。

經(jīng)CS-NP-REO處理的草魚肉在(4±0.5) ℃條件下儲藏時保存時間可達(dá)8 d以上，優(yōu)于對照組5 d 的儲藏期，同時優(yōu)于同質(zhì)量濃度下的殼聚糖納米粒和迷迭香精油的單獨處理，具有延長冷鮮草魚貨架期的作用，在進(jìn)一步開發(fā)新型綠色保鮮劑方面具有廣闊前景。