豬繁殖與呼吸綜合征病毒診斷與防控

陳錦嬋 （福建省福州市長樂區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 350200）

豬繁殖與呼吸綜合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)又名藍(lán)耳病，是1987 年首先在美國發(fā)現(xiàn)的一種臨床癥狀為種豬繁殖障礙、仔豬斷奶后肺炎以及豬群生產(chǎn)性能和存活率下降為的豬傳染病，因不能確定病因當(dāng)時(shí)被人們稱為“神秘病”。該病于1991年傳入歐洲，后被美國和荷蘭的研究者確定。

在國內(nèi)，PRRS病于1995年在中國北京地區(qū)開始流行，呈地方性流行性，是危害養(yǎng)豬行業(yè)發(fā)展的主要傳染病之一。郭寶清在1996年首次從流產(chǎn)胎兒中分離出藍(lán)耳病毒毒株，命名為CH-1a[1]。隨后報(bào)道楊漢春分離的BJ-4與美國RespPRRSV和VR2332同源性高，推測為美國引入。我國經(jīng)歷了3次大的疫情：1995-2004年以表現(xiàn)為母豬繁殖障礙的PRRS為主，2005-2014年以“三高”(高發(fā)病率、高死亡率和高熱)臨床特征的高致病性PRRS為主，2015-2018年多毒株并存，并且NADC30株流行日益波及著我國東北、東南、中東等十幾個(gè)省份，臨床癥狀變化多樣性，帶來的損失和危害不可估計(jì)。本文從PRRS的診斷方法和防控兩方面進(jìn)行綜述，以期對(duì)今后的防控工作提供一定的指導(dǎo)。

1 PRRSV的病原學(xué)特征

（1）PRRS的病原為豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)。其為尼多病毒目，動(dòng)脈炎病毒科，動(dòng)脈炎病毒屬的成員。PRRSV是由雙層脂質(zhì)膜包圍，是直徑為50～74nm的球形RNA病毒[2]，其基因組全長約為14.9～15.5kb。按照病毒基因組的序列差異以及抗原性，將其分為歐洲型和美洲型，目前我國流行的PRRSV主要為美洲型。（2）PRRSV對(duì)高溫和PH值敏感，在環(huán)境潮濕的環(huán)境有利于該病毒存活。PRRSV不耐熱，低溫中具有穩(wěn)定感染性。此外，其可存活的PH范圍很小，在6～7.5pH范圍內(nèi)保持高度穩(wěn)定性。

2 診斷方法

2.1 臨床診斷 PRRS主要特征為各階段豬都可發(fā)病，病豬表現(xiàn)為發(fā)熱、嗜睡、皮膚發(fā)紺、母豬表現(xiàn)繁殖障礙等現(xiàn)象；1月齡內(nèi)小豬存在明顯的呼吸道癥狀，且伴瘦弱仔豬增多、有腹瀉、雙耳發(fā)紅等；一些小豬皮膚出現(xiàn)呈青紫色或藍(lán)色斑塊。同時(shí)存在其他病原感染的情況，病原包括鏈球菌，副豬嗜血桿菌，圓環(huán)病毒2型，沙門氏菌，巴氏桿菌，放線桿菌，流感等。

2.2 病毒的分離與鑒定 病毒的分離鑒定是病毒病最真實(shí)的一種診斷方法。PRRSV常從病豬血液、腸道、腹水、肺、糞便中分離。該法是通過采集病豬的病料培養(yǎng)于MA-104，CL-2621，Marc-145、PAMS等，使細(xì)胞引起細(xì)胞病變，再進(jìn)行鑒別確診。其中，分離PRRSV歐洲株只能用PAM細(xì)胞。進(jìn)行病毒分離，成本較高，操作也較繁瑣，分離周期較長，且因種種條件的限制，結(jié)果的判定也存在很大困難，不適于田間大量樣品的快速診斷。

2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法) 血清學(xué)方法是應(yīng)用最廣泛的的病毒檢測方法。目前商品化的PRRS的ELISA檢測試劑盒用于包被的抗原有兩種，一種是純化的全病毒，另一種是如核衣殼蛋白(N蛋白)和膜蛋白(M、GP2-5)。不同毒株間核衣殼蛋白(N蛋白)保守性很高，N蛋白所建立的ELISA應(yīng)用于豬群初篩與檢查。

2.4 免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù)將熒光標(biāo)記技術(shù)與免疫學(xué)方法相結(jié)合的一種方法。由于熒光顯微鏡可觀察到熒光素的熒光，從而能對(duì)抗原進(jìn)行定位。該技術(shù)用于檢測單個(gè)發(fā)病樣品的特異性最好(99.5%)，在檢測感染2-3個(gè)月的特異性抗體有較高的可信度。此外，在高致病性豬藍(lán)耳病診斷中有相關(guān)的的應(yīng)用。

2.5 免疫過氧化酶單層細(xì)胞試驗(yàn)(IPMA) IPMA方法建立與1991年，在歐洲國家至今還是常用的檢測PRRSV的方法。IPMA可以在PRRSV感染后7～15d內(nèi)檢測到抗體，檢測感染后2～3個(gè)月內(nèi)的特異性抗體可信度較高。該法敏感性和特異性都較好，但是在結(jié)果判定存在主觀性影響，可能會(huì)造成結(jié)果無差別，使其不能被廣泛應(yīng)用于臨床檢測。

2.6 分子生物學(xué)診斷 RT-PCR技術(shù)是一種非常實(shí)用的檢測方法，此法可直接對(duì)分離培養(yǎng)物、臨床樣品中的基因組進(jìn)行檢測而不需要經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)等繁瑣的操作，從樣品中擴(kuò)增出預(yù)期的片斷。仇華吉等人根據(jù)歐洲型與美基因型分離株的基因組序列設(shè)計(jì)的引物，用所構(gòu)建的法初步證實(shí)我國分離株CH-1a株為北美洲型PRRSV[3]。同時(shí)，PCR方法在豬場PRRS群體監(jiān)測上可以發(fā)揮重要作用，例如用于后備母豬的選留和持續(xù)性感染豬的確診以及豬群的凈化工作，并且在未來具有越來越廣泛的應(yīng)用前景。

3 綜合防控

（1）PRRS目前該病尚無有效的治療措施，因此，做好生物安全、提高豬場管理、提高豬群抵抗力、加強(qiáng)免疫和檢疫成為防控該病的關(guān)鍵?？茖W(xué)的飼養(yǎng)管理是防止和控制疾病的發(fā)生和流行的前提條件，這樣才可以減少動(dòng)物疫病的發(fā)生，保證豬群健康生長，有效提高豬群對(duì)疫病的抵抗力。（2）豬場需堅(jiān)持自繁自養(yǎng)原則，制定科學(xué)免疫程序，定時(shí)對(duì)豬群開展健康評(píng)估和抗體檢測，對(duì)引種實(shí)行疫病監(jiān)測，這對(duì)防控 PRRS起到重要的作用。（3）PRRS病不像豬瘟和口蹄疫一樣有可靠保護(hù)力的疫苗，所以，生物安全顯得尤為重要。若引種時(shí)須引入PRRS陰性的豬群，嚴(yán)格實(shí)行生物安全措施，切斷帶空氣、糞污、污染物、病豬只、精液、人員、物資、車輛等多個(gè)途徑入侵豬群。隔離舍離生產(chǎn)區(qū)至少120m，后備豬經(jīng)過隔離60d以后經(jīng)過免疫并且檢驗(yàn)合格后方可入群。減少外來人員與車輛來訪，對(duì)外來人員嚴(yán)格按照制度沐浴、更衣、換鞋，并隔離一夜間后再進(jìn)生產(chǎn)區(qū)。對(duì)外來訪車輛在場外嚴(yán)格清洗消毒干燥，干燥后24h再經(jīng)過場內(nèi)消毒區(qū)消毒才可進(jìn)入。此外還要防止鼠類、貓犬、禽及鳥類與豬的直接接觸。（4）豬群在接觸PRRSV活毒后能產(chǎn)生保護(hù)性免疫抗體從而建立免疫力。建立群體免疫力的方法：一是本場的PRRSV野毒接觸，隔離馴化讓豬同期感染本場流行的PRRSV，在并群前產(chǎn)生針對(duì)性的免疫抗體保護(hù)力。二是接種PRRS疫苗。目前商品化PRRS疫苗主要是滅活苗和弱毒苗兩種，有研究表明，在誘導(dǎo)保護(hù)免疫方面，必須使用PRRS活病毒，如滅活PRRSV、亞單位蛋白等無活PRRSV的疫苗均不能誘導(dǎo)有效的免疫力。但是商品化PRRSV疫苗免疫的目的是只能降低PRRSV感染后的損失，不能阻止病毒感染。（5）育種的方法是一個(gè)防控PRRS的很好的思路，研究者發(fā)現(xiàn)，豬的CD163是PRRSV進(jìn)入細(xì)胞的受體，將該基因敲除后，豬只對(duì)經(jīng)典株和高致病株具有抵抗作用[4]。