借助輔助生殖技術(shù)妊娠的不孕癥早期流產(chǎn)患者與自然妊娠早期流產(chǎn)患者絨毛染色體異常核型比較

荊霞，馬天仲，李云清，黃日艷，林志梅，陳碧

(廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院，廣東湛江524001)

近年來(lái)，輔助生殖技術(shù)(ART)在臨床超促排卵方案應(yīng)用和胚胎室技術(shù)等方面均得到了快速發(fā)展，已成為不孕癥治療的主要手段。自1978年世界上首例試管嬰兒誕生以來(lái)，越來(lái)越多的不孕癥夫婦通過(guò)尋求ART助孕治療以達(dá)到做父母的愿望。ART技術(shù)包括宮腔內(nèi)人工授精、體外受精和胞漿內(nèi)單精子顯微注射等技術(shù)[1]。較40年前相比，ART術(shù)后的臨床妊娠率也有了很大的提高，但活產(chǎn)率仍然較低，較高的流產(chǎn)率是其主要因素。有研究[2]發(fā)現(xiàn)，染色體異常核型是借助ART妊娠的不孕癥患者發(fā)生早期流產(chǎn)的因素之一。本研究對(duì)借助ART妊娠的不孕癥早期流產(chǎn)患者和自然妊娠的早期流產(chǎn)患者的胚胎絨毛組織染色體異常核型進(jìn)行對(duì)比分析，觀察借助ART妊娠的不孕癥早期流產(chǎn)患者和自然妊娠的早期流產(chǎn)患者胚胎絨毛組織染色體異常核型是否有差異。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2014年1月～2018年12月在廣東醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心就診的早期流產(chǎn)患者164例?；颊連超檢查結(jié)果均顯示胚胎停止發(fā)育，未見(jiàn)胚芽和心管搏動(dòng)，排除感染及有害物質(zhì)接觸史等因素?；颊吣挲g23～44歲(年齡≥38歲者42例)，孕周6～12周。根據(jù)妊娠方式不同將患者分為借助ART妊娠的不孕癥早期流產(chǎn)患者組(ART組，75例)和自然妊娠早期流產(chǎn)患者組(NC組，89例)，其中ART組患者平均年齡為(34.43±5.51)歲，年齡≥38歲22例，平均孕周為(6.41±1.70)周；NC組患者平均年齡為(32.69±5.26)歲，年齡≥38歲20例，平均孕周為(7.79±2.01)周。兩組患者的年齡、孕周資料等具有可比性。

1.2 絨毛組織獲取與染色體核型分析 患者在B超引導(dǎo)下接受清宮術(shù)，術(shù)中無(wú)菌條件下獲取流產(chǎn)絨毛組織標(biāo)本10～25 mg，生理鹽水浸泡后沖洗絨毛組織，解剖鏡下分離優(yōu)質(zhì)絨毛組織，送廣州金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中心進(jìn)行染色體核型分析，比較兩組患者的染色體核型異常率，比較兩組中年齡≥38歲和<38歲的患者胚胎絨毛組織染色體核型異常率，比較兩組中流產(chǎn)男性胚胎和女性胚胎的患者胚胎絨毛組織染色體核型異常率。采樣檢查前患者均知情同意并簽署知情同意書(shū)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較用χ2檢驗(yàn)。164例早期流產(chǎn)患者中，去除性染色體和三倍體異常核型的患者，分析胚胎性別與絨毛組織常染色體核型異常發(fā)生的關(guān)系。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者絨毛組織染色體核型異常率比較 ART組患者絨毛組織染色體異常核型50例，核型異常率為66.67%，NC組患者絨毛組織染色體異常核型48例，核型異常率為53.93%，兩組相比，P>0.05。

2.2 兩組患者絨毛組織染色體異常核型比較 ART組患者絨毛組織染色體異常核型包括數(shù)目異常45例(占90.00%)、結(jié)構(gòu)異常3例(占6.00%)以及數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常同時(shí)存在2例(占4.00%)。數(shù)目異常包括單體7例(占15.56%，X-單體)、三體38例(占84.44%，22-三體11例、15-三體7例、16-三體5例、21-三體3例、3-三體2例、20-三體2例、7-三體1例、9-三體1例、10-三體1例、17-三體1例、18-三體1例、12-三體合并18-三體1例、13-三體合并21-三體1例、20-三體合并21-三體1例)。結(jié)構(gòu)異常包括10q部分單體1例、8p部分三體1例、20p部分三體1例。數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常同時(shí)存在包括22-三體合并8p部分三體1例、8-三體合并5p部分三體與15p部分單體1例。

NC組患者絨毛組織染色體異常核型包括數(shù)目異常41例(占85.42%)和結(jié)構(gòu)異常7例(占14.58%)。數(shù)目異常包括單體1例(占2.44%，22-單體)、三體35例(占85.37%，16-三體11例、22-三體6例、15-三體4例、6-三體3例、13-三體3例、18-三體3例、14-三體2例、5-三體1例、9-三體1例、21-三體1例)和三倍體5例(占12.20%)。結(jié)構(gòu)異常包括5p、6q、10q、14q部分單體各1例，8p部分單體與8q部分三體2例，11q部分單體合并14q部分三體1例。

兩組患者的單體、三倍體等異常核型資料相比，P均<0.05；其余異常核型資料相比，P均>0.05。

2.3 兩組中年齡≥38歲和<38歲的患者胚胎絨毛組織染色體核型異常率比較 ART組年齡≥38歲的22例患者中，絨毛組織染色體異常核型20例，核型異常率為90.91%；NC組年齡≥38歲的20例患者中，絨毛組織染色體異常核型13例，核型異常率為65.00%；兩組相比，P<0.05。ART組年齡<38歲的53例患者中，絨毛組織染色體異常核型30例，核型異常率為56.60%；NC組年齡<38歲的69例患者中，絨毛組織染色體異常核型35例，核型異常率為50.72%；兩組相比，P>0.05。

2.4 兩組中流產(chǎn)男性胚胎和女性胚胎的患者胚胎絨毛組織染色體核型異常率比較 去除性染色體和三倍體異常核型的12例患者后，152例流產(chǎn)患者中，ART組流產(chǎn)男性胚胎38例(占55.88%)、女性胚胎30例(占44.12%)，NC組流產(chǎn)男性胚胎45例(占53.57%)、女性胚胎39例(占46.43%)，兩組相比，P>0.05。86例絨毛組織常染色體異常核型患者中，ART組43例，NC組43例。其中ART組男性胚胎23例，占53.49%，女性胚胎20例，占46.51%；NC組男性胚胎19例，占42.22%，女性胚胎26例，占57.78%；兩組相比，P>0.05。

3 討論

本研究164例早期流產(chǎn)患者胚胎絨毛組織染色體核型分析結(jié)果顯示，檢出異常核型98例，異常率為59.76%。其中，NC組絨毛染色體異常率為53.93%，ART組為66.67%，兩組的核型異常率無(wú)顯著差異，提示染色體異常是妊娠早期流產(chǎn)的主要因素，但ART不會(huì)增加胎兒染色體核型發(fā)生異常的風(fēng)險(xiǎn)，與相關(guān)研究結(jié)論一致[3,4]。文獻(xiàn)[5]報(bào)道，引起自發(fā)流產(chǎn)最多的異常核型是16-三體，其次是22-三體。本研究結(jié)果顯示，98例異常核型中22-三體17例、16-三體16例，與報(bào)道基本一致。王珺等[6]對(duì)1 317例流產(chǎn)患者的染色體核型分析發(fā)現(xiàn)，流產(chǎn)絨毛組織樣本女性胚胎偏多，性染色體異常中Turner綜合征發(fā)生概率較高。本研究中，流產(chǎn)絨毛組織常染色體異常男女胚胎性別比無(wú)顯著差異，ART組的X單體發(fā)生概率明顯高于NC組。我們認(rèn)為，ART操作是否更易引起性染色體異常尚有待進(jìn)一步研究。

流產(chǎn)率隨著年齡的增長(zhǎng)而增加，與適齡女性相比，高齡在一定程度上可改變ART妊娠結(jié)局[5]。不論是ART妊娠還是自然妊娠，隨著女性年齡增大，卵母細(xì)胞在后續(xù)的分裂過(guò)程中錯(cuò)誤分離率升高，胚胎染色體核型非整倍體異常發(fā)生率增加，導(dǎo)致早期流產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)增大。輔助生殖過(guò)程中用藥方案、女性高齡、卵巢功能、內(nèi)膜容受性等是影響妊娠結(jié)局的重要因素，但ART是否使高齡患者染色體異常的風(fēng)險(xiǎn)增加尚無(wú)定論[7]。研究[5]報(bào)道，年齡≥35歲和年齡<35歲的自然流產(chǎn)絨毛組織標(biāo)本的染色體核型異常率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。美國(guó)的一項(xiàng)研究[9]也發(fā)現(xiàn)，>40歲的高齡女性在接受ART助孕后，流產(chǎn)率增加3倍。本研究結(jié)果也證實(shí)，在≥38歲的患者中，ART組核型異常率顯著高于NC組，提示≥38歲的不孕癥患者借助ART妊娠后發(fā)生核型異常的可能性更大。因此，38歲以上的高齡患者在接受ART助孕時(shí)，建議進(jìn)行植入前胚胎遺傳學(xué)篩查后再植入染色體正常的胚胎，可降低因染色體核型異常導(dǎo)致的流產(chǎn)風(fēng)險(xiǎn)。

有研究[10]表明，女性胚胎自然流產(chǎn)率高于男性胚胎。本研究發(fā)現(xiàn)，在早期流產(chǎn)的胎兒中，男性胚胎比例稍高于女性胚胎，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在兩組染色體核型異常的絨毛組織樣本中，男女性別比例亦無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示兩組患者中流產(chǎn)男性胚胎和女性胚胎者絨毛組織染色體核型異常率相近。

綜上所述，借助ART妊娠的不孕癥早期流產(chǎn)患者和自然妊娠的早期流產(chǎn)患者絨毛組織染色體核型異常率相近，但借助ART妊娠的不孕癥患者的絨毛組織性染色體異常核型(X單體)增多；年齡≥38歲的借助ART妊娠的不孕癥早期流產(chǎn)患者比自然妊娠早期流產(chǎn)患者絨毛組織染色體核型異常率高，接受ART助孕時(shí)應(yīng)進(jìn)行遺傳學(xué)篩查。流產(chǎn)男性胚胎和女性胚胎者的胚胎絨毛組織染色體核型異常率相近。本研究認(rèn)為，對(duì)早期流產(chǎn)患者的胚胎絨毛組織進(jìn)行染色體核型分析，有助于為臨床診斷和下次妊娠的遺傳咨詢(xún)提供指導(dǎo)。