柴胡黃芩藥對(duì)的基礎(chǔ)研究探析＊

張程亮，蘭露露，任秀華，劉 東

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院藥學(xué)部 武漢 430030）

藥對(duì)又稱對(duì)藥，是臨床上中藥配伍相對(duì)固定的兩味藥物搭配形式，是在中醫(yī)藥理論指導(dǎo)及辨證論治的前提下，遵循中藥配伍的“七情和合”理論，從而發(fā)揮協(xié)同增效（功效拓展或增強(qiáng)）或配伍減毒（減輕或消除副作用）等作用[1]。柴胡與黃芩是中醫(yī)臨床常見的藥對(duì)（以下簡(jiǎn)稱柴黃藥對(duì)），首見于張仲景的《傷寒論》，是仲景名方中之一，在小柴胡湯等經(jīng)典方劑中配伍應(yīng)用[2]；柴胡苦平，疏肝開郁，和解退熱，升舉陽(yáng)氣；黃芩苦寒，清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎。柴胡入少陽(yáng)肝膽，調(diào)暢氣機(jī)；黃芩也為少陽(yáng)要藥，直折郁熱。二藥相合，升散外邪，清解郁熱，調(diào)和表里，和解少陽(yáng)[3]。近些年國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)柴黃藥對(duì)的藥效成分和藥理作用進(jìn)行廣泛的研究，取得了一定的研究成果。本文將該領(lǐng)域研究綜述如下，以期為中醫(yī)藥研究工作者對(duì)柴黃藥對(duì)的深入開發(fā)提供參考。

1 柴黃藥對(duì)配伍對(duì)主要藥效成分溶出的藥學(xué)研究

柴胡的主要藥效成分是柴胡皂苷A、D[4],黃芩的主要藥效成分是黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素[5]。柴胡黃芩配伍后在提取過(guò)程中各種成分可能會(huì)發(fā)生相互作用，導(dǎo)致主要化學(xué)成分或溶出度產(chǎn)生變化，進(jìn)而影響藥效的強(qiáng)弱。不少學(xué)者針對(duì)柴黃藥對(duì)配伍后的主要藥效成分溶出情況進(jìn)行了考察。

1.1 配伍比例對(duì)藥效成分溶出的影響

柴黃藥對(duì)與柴胡、黃芩單藥相比，配伍后柴胡皂苷和黃芩苷的煎出量增加[6]，并且柴胡黃芩的配伍比例對(duì)黃芩苷煎出量有一定影響，研究發(fā)現(xiàn)，柴胡、黃芩1：2配伍時(shí)黃芩苷的煎出量最大，與黃芩單藥相比增加19.3%[7]。但是劉逢芹[8]等利用RP-HPLC 考察柴黃藥對(duì)不同配伍比例中黃芩苷的溶出量時(shí)發(fā)現(xiàn)，不同比例配伍對(duì)提取液中黃芩苷的含量影響較小，可能是柴胡的用量偏少而達(dá)不到“混煎增溶”的效果所致，所以仍需進(jìn)一步研究配比對(duì)主要藥效成分溶出的影響。

1.2 提取方式對(duì)藥效成分溶出的影響

不同提取溶劑對(duì)柴黃藥對(duì)中藥效成分的溶出具有一定的影響。研究發(fā)現(xiàn)，柴胡黃芩配伍后水提、醇提對(duì)黃芩苷提出率影響不大，無(wú)論水提或是醇提，柴黃藥對(duì)中黃芩苷的含量都比黃芩單獨(dú)提取要高；而提取溶劑對(duì)柴胡皂苷的提出率影響較大，采用乙醇更能較為完全地將柴胡皂苷提出，水提則無(wú)效[9]。因此，在前期研究的基礎(chǔ)上，侯緒浩等[10]使用70%乙醇作為提取溶劑考察柴胡黃芩配伍前后柴胡皂苷A、D的溶出量差異，結(jié)果顯示，柴胡皂苷A的提出量幾乎比柴胡單藥的溶出量多一倍，柴胡皂苷D的提出量也比配伍前提高了45%。

總體來(lái)看，柴胡黃芩配伍可以增加有效成分的溶出，這可能是柴黃藥對(duì)配伍后藥效增強(qiáng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。然而目前的研究主要集中與兩藥配伍后主要藥效成分的溶出，對(duì)于其他物質(zhì)的溶出情況尚未見研究。更重要的是，兩藥配伍后主要藥效成分在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)考察尚未見報(bào)道，這也是將來(lái)值得探索和考察其協(xié)同作用機(jī)制的方向。

2 藥理研究

柴黃藥對(duì)的藥理作用十分廣泛，具體有以下幾個(gè)方面。

2.1 緩解肝損傷

以柴黃藥對(duì)為主要組成的小柴胡湯等多種方劑臨床上已經(jīng)用于治療各種急慢性肝炎[11]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，柴黃藥對(duì)對(duì)酒精[12]、對(duì)乙酰氨基酚[13]、四氯化碳（CCl4）[14]等物質(zhì)誘導(dǎo)的急性肝損傷具有較好的保護(hù)作用。柴胡黃芩的配伍比例對(duì)于其在不同類型肝損傷中的保護(hù)效果具有一定的影響，例如柴胡-黃芩（1∶2）配伍時(shí)對(duì)大鼠酒精性肝損傷[12]和對(duì)乙酰氨基酚[13]引起急性肝損傷的保護(hù)作用療效最佳，可以顯著降低大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）水平，提高肝組織中總蛋白的含量，改善肝組織炎癥變性和脂肪變性；而柴胡-黃芩（2∶1）配伍時(shí)對(duì)CCl4所致肝損傷保護(hù)作用最佳[14]。研究發(fā)現(xiàn)，柴黃藥對(duì)保護(hù)肝損傷的活性成分主要存在于水飽和正丁醇部位[15,16]。柴黃藥對(duì)緩解肝損傷的機(jī)制可能包括抗凋亡、抗氧化、抑制環(huán)氧合酶、抗炎等，具體介紹如下。

2.1.1 抗凋亡

CCl4通過(guò)直接攻擊細(xì)胞膜和線粒體導(dǎo)致肝細(xì)胞凋亡，這是誘導(dǎo)肝損傷的重要病理機(jī)制。陳慧慧[17]利用血清藥理學(xué)方法同時(shí)考察了不同比例柴黃藥對(duì)對(duì)于CCl4誘導(dǎo)肝損傷的保護(hù)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各比例配伍的柴黃藥對(duì)含藥血清均能不同程度降低受損肝細(xì)胞上清液中的AST、ALT水平，提高受損肝細(xì)胞的Bcl-2表達(dá)，降低Bax 表達(dá)，提高Bcl-2/Bax 比值，并減少肝細(xì)胞凋亡小體產(chǎn)生，從而對(duì)抗CCl4誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。還有研究者[18]通過(guò)考察柴黃藥對(duì)含藥血清對(duì)異煙肼所致肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，發(fā)現(xiàn)柴黃藥對(duì)可以抑制Fas及Fas L的表達(dá)，降低細(xì)胞總凋亡率，表明其可能是通過(guò)抑制Fas/Fas L通路來(lái)發(fā)揮抗凋亡作用。

2.1.2 抗氧化

有關(guān)柴胡皂苷[19]和黃芩苷[20]抗氧化應(yīng)激的作用已經(jīng)在肝臟疾病中被廣泛研究和反復(fù)驗(yàn)證。在酒精[16]和CCl4[21]誘導(dǎo)的肝損傷大鼠實(shí)驗(yàn)中，柴黃藥對(duì)可下調(diào)肝損傷大鼠血清中轉(zhuǎn)氨酶及丙二醛的升高水平，并提高谷胱甘肽和超氧化物歧化酶的活性，進(jìn)一步防止肝細(xì)胞脂肪變性、壞死和纖維組織增生，還可促進(jìn)白蛋白合成和甘油三酯代謝，表明柴黃藥對(duì)可能通過(guò)拮抗自由基及其引發(fā)的脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)來(lái)改善肝細(xì)胞損傷狀態(tài)。

2.1.3 抑制環(huán)氧合酶

環(huán)氧合酶-2（COX-2）與多種細(xì)胞和組織的炎癥損傷及增殖過(guò)程有關(guān)，在肝臟炎癥、脂肪變性、纖維化等發(fā)展中有著重要的作用[22-23]。柴黃藥對(duì)可以抑制酒精性肝損傷大鼠肝組織中COX-2 的過(guò)度表達(dá)[24]，仝艷等人[25]通過(guò)分子對(duì)接、分子動(dòng)力學(xué)模擬和結(jié)合自由能計(jì)算結(jié)合的方法，探究柴胡和黃芩中主要活性成分柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、黃芩苷、黃芩素與COX-2 的相互作用，結(jié)果表明柴胡與黃芩作用的靶點(diǎn)不同，在以COX-2 為酒精性肝損傷的治療靶點(diǎn)時(shí)，黃芩素與COX-2的結(jié)合能力最強(qiáng)，是起主要作用的中藥活性成分。

2.1.4 抗炎

CCl4損傷肝細(xì)胞時(shí)，體內(nèi)TLR4-NFκB信號(hào)通路介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)表達(dá)增強(qiáng)[26]，柴黃藥對(duì)水煎液對(duì)肝細(xì)胞中的NFκBp65 和TLR4 蛋白具有抑制作用，說(shuō)明其緩解肝損傷的機(jī)制可能與下調(diào)體內(nèi)TLR4-NFκB 信號(hào)通路，降低炎癥有關(guān)[27]。為了明確其作用的有效成分及作用機(jī)制，李敏等[28]在前期實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)上，應(yīng)用柴胡皂苷D和黃芩苷配伍干預(yù)CCl4損傷的肝細(xì)胞，證實(shí)了柴胡皂苷D-黃芩苷配伍可通過(guò)下調(diào)TLR4-NFκB信號(hào)通路保護(hù)肝細(xì)胞。

雖然國(guó)內(nèi)外已有大量的研究發(fā)現(xiàn)柴胡中主要成分柴胡皂苷和黃芩中主要活性物質(zhì)黃芩苷可通過(guò)抗氧化應(yīng)激[29]、抗炎[20]、抗凋亡[30]等多方面保護(hù)肝細(xì)胞，這些均可能是柴黃藥對(duì)配伍后保護(hù)肝細(xì)胞的作用機(jī)制，然而兩者配伍后不同藥效成分是否從不同靶點(diǎn)、或者同一機(jī)制協(xié)同發(fā)揮作用尚不得而知，具體的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)機(jī)制有待更多的研究來(lái)揭示。

2.2 抗肝纖維化

王斌等人用復(fù)合因素法建立大鼠肝纖維化模型，應(yīng)用不同劑量的柴黃藥對(duì)進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，各劑量的柴黃藥對(duì)均能顯著降低肝纖維化大鼠血清中透明質(zhì)酸（HA）、Ⅲ型前膠原（PCⅢ）和Ⅳ型膠原（Ⅳ-C）等促纖維化因子的水平，同時(shí)緩解肝臟纖維化的病理學(xué)改變，其中18 g生藥·kg-1組的作用最為明顯，證實(shí)了柴黃藥對(duì)具有明確抗肝纖維化作用[31]。柴黃藥對(duì)干預(yù)可以有效抑制CCl4誘導(dǎo)的肝星狀細(xì)胞（HSC）增殖，使HSC表面的TLR4 和NF-κB mRNA 及蛋白的表達(dá)明顯降低，從而減少NF-κB誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)和細(xì)胞壞死及纖維化，因此調(diào)控TLR4-NF-κB 信號(hào)通路可能是柴黃藥對(duì)抗纖維化的作用機(jī)制之一[32,33]。

2.3 抗病毒作用

柴黃藥對(duì)在治療柯薩奇B3嗜心臟病毒(CVB3m)誘導(dǎo)的心肌炎方面具有良好的效果。王雪峰等[34]以腹腔注射CVB3m誘導(dǎo)的心肌炎小鼠（VMC）為模型，觀察柴胡、黃芩提取物對(duì)病毒性心肌炎小鼠整體保護(hù)作用,結(jié)果表明柴胡、黃芩提取物對(duì)感染小鼠心肌病理組織學(xué)、電鏡超微結(jié)構(gòu)改變均有明顯改善作用，使小鼠死亡率明顯降低。柴胡、黃芩可以促進(jìn)受染心肌凋亡并下調(diào)凋亡相關(guān)因子Bcl-2 的表達(dá)，說(shuō)明其作用機(jī)制可能與促進(jìn)受染細(xì)胞的凋亡有關(guān)[35]。通過(guò)檢測(cè)黃芩提取物、柴胡提取物和配伍提取物給藥后VMC 心肌組織中CVB3mRNA復(fù)制和干擾素（IFN）mRNA表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)黃芩與柴胡在抑制病毒復(fù)制和誘生干擾素方面各有優(yōu)勢(shì)，而配伍組則兼具兩種作用，在病毒復(fù)制高峰時(shí)期表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢(shì)[36]。謝斌等[37]在柴黃藥對(duì)的血清藥理學(xué)研究中發(fā)現(xiàn)，柴黃藥對(duì)可以保護(hù)受CVB3m感染的心肌細(xì)胞，但是等量配伍提取物含藥血清在體外保護(hù)細(xì)胞方面與單味藥相比無(wú)顯著性差異，這一結(jié)果可能與此研究未考察不同配比柴黃藥對(duì)的作用有關(guān)，未來(lái)應(yīng)進(jìn)一步尋求療效最佳的劑量配比關(guān)系，以明確藥對(duì)治療病毒性心肌炎的效果。

研究發(fā)現(xiàn)，柴胡與黃芩配伍還能顯著抑制雞胚內(nèi)流感病毒，對(duì)小鼠肺炎病毒所致小鼠肺指數(shù)增高有降低作用且可以降低小鼠的死亡率[38]。雖然還未有文獻(xiàn)報(bào)道柴黃藥對(duì)具有抗乙肝病毒的作用，但已發(fā)現(xiàn)柴胡中的柴胡皂苷C可以抑制HBsAg分泌和HBV-DNA的產(chǎn)生，黃芩中的成分漢黃芩素可以顯著抑制HBsAg、HBeAg 分泌和HBV-DNA 的產(chǎn)生[39]，所以柴黃藥對(duì)在抑制乙型肝炎病毒方面可能具有協(xié)同作用。

2.4 解熱作用

柴黃藥對(duì)作為和解少陽(yáng)的重要配伍，在解肌退熱方面具有良好的療效[40]?！侗静輩R言》云：“清肌退熱，柴胡最佳，然無(wú)黃芩不能涼肌達(dá)表”，說(shuō)明柴胡與黃芩配伍在退熱方面有協(xié)同作用?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，柴黃藥對(duì)的不同配伍比例對(duì)不同發(fā)熱模型大鼠解熱作用強(qiáng)度有差異。柴胡黃芩1∶2 配伍對(duì)2，4-二硝基苯酚致熱大鼠模型的解熱作用最強(qiáng)，而柴胡黃芩1：1配伍對(duì)干酵母發(fā)熱模型大鼠的解熱作用則表現(xiàn)較好[41]。在對(duì)柴黃藥對(duì)中有效組分及其配伍的退熱效用考察中，發(fā)現(xiàn)柴黃藥對(duì)中化學(xué)成分群的不同配方對(duì)發(fā)熱模型表現(xiàn)出不同的作用，其中揮發(fā)油部分(B)、黃酮部分(D)和剩余混合物部分(E)在解熱效應(yīng)中發(fā)揮重要作用，化學(xué)成分群BDE為正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選出的抑制LPS誘導(dǎo)大鼠發(fā)熱最佳配方[42]。北京中醫(yī)藥大學(xué)的楊江萍[43]在對(duì)柴胡、黃芩退熱有效部位和作用機(jī)制研究中，發(fā)現(xiàn)了皂苷類和黃酮類化合物是柴黃水提液中退熱的主要效應(yīng)物質(zhì)，其退熱機(jī)制主要涉及體溫中樞正調(diào)質(zhì)前列腺素E2(PEG2)、環(huán)磷酸腺苷(cAMP)的調(diào)節(jié)及抑制內(nèi)生致熱原如腫瘤壞死因子α（TNF-α）、β內(nèi)啡肽（β-EP）的合成和釋放。

2.5 治療肝癌

雖然柴胡皂苷[44]和黃芩苷[45]防治肝癌的作用已被大量的實(shí)驗(yàn)證實(shí)，但是柴胡和黃芩配伍后的抗肝癌作用研究卻少見報(bào)道，有研究發(fā)現(xiàn)柴胡皂苷A、黃芩素及其配伍組對(duì)人肝癌HepG2和SMMC-7721 細(xì)胞具有抑制增殖、促凋亡的作用，且配伍后作用均強(qiáng)于單藥。柴黃藥對(duì)在防治肝癌方面具有明顯的協(xié)同作用，其可能是通過(guò)誘導(dǎo)凋亡相關(guān)基因Caspase-3 表達(dá)升高和下調(diào)COX-2 表達(dá)發(fā)揮作用[46]，但具體的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

2.6 利膽

柴黃藥對(duì)入少陽(yáng)膽經(jīng)，具有疏肝利膽之功效[47]。孫付軍等[48]通過(guò)考察柴胡黃芩單藥及不同比例配伍對(duì)大鼠膽汁分泌總量和膽汁中主要成分含量的影響，結(jié)果表明柴胡和黃芩配伍應(yīng)用可以增加膽汁的分泌量，同時(shí)提高膽汁中膽紅素和膽固醇水平。而且黃芩和柴胡配伍比例在1∶2和1∶1之間利膽效果最優(yōu)最佳，其利膽作用在一定范圍內(nèi)可能隨黃芩含量的增加而增強(qiáng)。

2.7 抗癲癇

中醫(yī)認(rèn)為肝氣郁滯是癲癇的主要病機(jī)，柴胡黃芩二藥相伍，恰可和解少陽(yáng)，又可以疏肝理氣、養(yǎng)肝柔肝，利于癲癇的治療[49]。有學(xué)者考察柴胡黃芩1∶1、5∶2配伍和柴胡、黃芩單藥對(duì)不同模型癲癇小鼠的抗癲癇作用，發(fā)現(xiàn)柴胡黃芩5∶2 配伍可明顯延長(zhǎng)戊四氮誘導(dǎo)的小鼠急性癲癇模型的發(fā)作性陣攣潛伏期、發(fā)作性強(qiáng)直潛伏期以及死亡潛伏期，且可降低最大電休克模型中小鼠的驚厥率[50]，表明柴黃藥對(duì)對(duì)癲癇治療有良好的效果，且其抗癲癇作用與柴胡的劑量可能有一定的量效關(guān)系。

3 結(jié)語(yǔ)

柴黃藥對(duì)是中醫(yī)方劑中的經(jīng)典配伍，已被證明具有顯著的疾病防治作用。本文通過(guò)收集近些年針對(duì)柴黃藥對(duì)的文獻(xiàn)報(bào)道，進(jìn)行了總結(jié)和歸納。從上文可見，現(xiàn)代藥學(xué)研究發(fā)現(xiàn)柴黃藥對(duì)配伍可以增加主要藥效成分柴胡皂苷和黃芩苷的溶出；藥理實(shí)驗(yàn)研究表明，柴黃藥對(duì)在緩解肝損傷、抗肝纖維化、抗病毒、解熱、治療肝癌、利膽和抗癲癇等方面具有不錯(cuò)的療效。然而，目前有關(guān)柴黃藥對(duì)主要藥效成分在體內(nèi)的生物利用度考察尚未見報(bào)道，其具體靶點(diǎn)和深入的作用機(jī)制仍未被闡明。因此未來(lái)可通過(guò)蛋白質(zhì)學(xué)和代謝組學(xué)等手段闡明藥對(duì)作用于機(jī)體后的功效物質(zhì)變化，并通過(guò)分子網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)深入研究其作用靶點(diǎn)和具體機(jī)制，為柴黃藥對(duì)的深入開發(fā)提供參考。