Akt2、Livin蛋白表達(dá)情況與胃癌發(fā)病相關(guān)性及與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

王結(jié)實(shí)，蔡麗偉

(平頂山市第一人民醫(yī)院胃腸外科，河南 平頂山 467000)

胃癌是臨床上常見的的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率非常高，居惡性腫瘤的第四位，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量和生命安全。我國為胃癌的高發(fā)地區(qū)，且近年來其發(fā)病率隨著人們飲食結(jié)構(gòu)的改變而呈逐年增加的態(tài)勢，給我國帶來巨大的經(jīng)濟(jì)和社會負(fù)擔(dān)[1，2]。目前針對胃癌的治療方式多為手術(shù)治療和放化療等，但其發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，常規(guī)治療方式的治療效果并不理想，因此對胃癌發(fā)病機(jī)制以及臨床治療的研究成為學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)[3，4]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與細(xì)胞的異常增殖和生長有著密切的關(guān)系，而多種細(xì)胞因子在這一過程中均發(fā)揮著重要的作用[5，6]。為了進(jìn)一步探討絲氨酸／蘇氨酸蛋白激酶2（Akt2）、Livin蛋白在胃癌患者中的表達(dá)情況及其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系，本研究對我院討確診的胃癌患者組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本中的Akt2、Livin蛋白表達(dá)情況進(jìn)行了檢測，并分析了其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系，旨在為臨床上提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院手術(shù)后胃癌組織標(biāo)本125例（病灶組）、癌旁組織60例（癌旁組，距離腫瘤陰性切除邊緣3cm以內(nèi)的組織，在125例胃癌患者中隨機(jī)選?。占瘯r(shí)間2015年1月-2017年5月。臨床資料通過回顧患者的病歷記錄和病例報(bào)告獲得。

病灶組，男64例、女61例，年齡39～78歲，平均年齡59.5±16.2歲；腫瘤的分化程度：高分化52例，中分低化73例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移67例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例；TNM分期：I期34例、B期29例、C期30例，D期32例；浸潤深度：未侵犯漿膜51例，侵犯漿膜74例；癌旁組，男32例、女28例，年齡40～74歲，平均57.7±12.4歲。兩組患者的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 納入排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ⑴術(shù)前未合并其他部位惡性腫瘤；⑵術(shù)后病理證實(shí)為胃癌；⑶手術(shù)根治性切除腫瘤，術(shù)后生存期大于1個(gè)月，未發(fā)生圍手術(shù)期并發(fā)癥；⑷有完整規(guī)范的術(shù)后病理報(bào)告及隨訪資料；⑸術(shù)前未接受放化療。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ⑴合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者；⑵未能完成隨訪者；⑶貧血及凝血功能障礙；⑷風(fēng)濕及免疫系統(tǒng)疾??；⑸嚴(yán)重的肝腎功能疾??；⑹甲狀腺功能障礙；⑺因其他部位腫瘤進(jìn)行過放化療治療者。

1.3 免疫組化染色方法 所有組織標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋后作連續(xù)切片，采用免疫組化染色法測定組織中Akt2、Livin蛋白的表達(dá)，SP染色試劑盒、兔抗人Akt2多克隆抗體、兔抗人Livin多克隆抗體均購于北京中杉生物技術(shù)公司，以陽性切片作為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照，具體檢測步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4 免疫組化判定標(biāo)準(zhǔn) 陰性對照用PBS代替一抗進(jìn)行染色，結(jié)果做為陰性；陽性對照以各抗體說明書所提供組織進(jìn)行染色，Akt2、Livin的陽性染色表現(xiàn)于細(xì)胞質(zhì)，陽性細(xì)胞為棕黃色顆粒，標(biāo)準(zhǔn)光鏡下以細(xì)胞漿、膜中出現(xiàn)細(xì)胞核著色或粗細(xì)一致的棕黃色顆粒為陽性染色；采取二次計(jì)分法：先將染色按強(qiáng)度計(jì)分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。再將陽性細(xì)胞百分比計(jì)分，0分為陽性細(xì)胞占比＜25%，1分為25%．50%，2分為51%．75%，3分為≥75%。用染色強(qiáng)度得分與細(xì)胞數(shù)得分之和作為判斷表達(dá)的結(jié)果，0分為陰性(一)，1～2 分為弱陽性(+)，3～4 分為中等陽性(++)，5～6分為強(qiáng)陽性(+++)。所有病理切片均由高年資病理醫(yī)師盲法評定結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 16.0，采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)描述，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，三組間比較采用單因素方差分析法；計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)；P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組組織標(biāo)本中的Akt2、Livin蛋白表達(dá)情況比較 病灶組、癌旁組的Akt2蛋白表達(dá)陽性率分別為 69.60%、6.67%（P＜0.001），表 1。 Livin 蛋白陽性率分別為 47.20%、5.00%（P＜0.01），見表 2。

表1 組織標(biāo)本中的Akt2蛋白表達(dá)情況比較

表2 組織標(biāo)本中的Akt2蛋白表達(dá)情況比較

2.2 胃癌組織標(biāo)本中的Akt2、Livin蛋白表達(dá)與患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)系 Akt2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、不同浸潤深度、不同臨床分期有關(guān) （P＜0.05）；與年齡、性別無關(guān)(P＞0.05)，Livin 蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度有關(guān)(P＜0.05)；與性別、年齡、不同浸潤深度、不同臨床分期間無關(guān)(P＞0.05)。見表3。

表3 胃癌Akt2、Livin蛋白表達(dá)與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

3 討論

多項(xiàng)研究表明[7-11]，腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程與癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移和浸潤等多個(gè)基因的調(diào)控有著密切的關(guān)系，但目前仍沒有可靠、有效的判斷腫瘤惡性程度和預(yù)后的有效標(biāo)志物。研究表明[12]，生長因子受體 (Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR)具有酪氨酸激酶活性，可影響細(xì)胞的生長和分化，并通過兩條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行調(diào)控，其中一條是PI3K/Akt通路，主要參與腫瘤細(xì)胞的增殖、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移、血管生成、腫及細(xì)胞凋亡的抑制等過程。絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(Akt)是PI3K/Akt信號通路中的關(guān)鍵激酶，主要有Akt1/PKBα、Akt2/PKBβ和Akt3/PKBγ三個(gè)亞單位，其中Akt2與惡性腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移關(guān)系最為密切。

Livin基因是一種新發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族成員，其在正常成人大多數(shù)組織中不表達(dá)或很少表達(dá)，但在結(jié)腸癌、黑色素瘤及鱗狀細(xì)胞癌等腫瘤中高表達(dá)。目前有研究表明[13]，Livin基因具有抑制腫瘤細(xì)胞凋亡的作用，但其機(jī)制尚未完全闡明。本研究對我院胃癌患者組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本的Akt2、Livin蛋白表達(dá)情況進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)，病灶組、癌旁組的Akt2蛋白表達(dá)陽性率分別為69.60%、6.67%，而Livin蛋白陽性率分別為47.20%、5.00%，提示胃癌患者組織標(biāo)本的Akt2蛋白和Livin蛋白表達(dá)明顯異常，這可能反映Akt2蛋白和Livin蛋白的表達(dá)與胃癌的發(fā)生和發(fā)展有著一定的關(guān)系，而Akt2蛋白和Livin蛋白的表達(dá)情況也許能作為胃癌診斷和預(yù)后判斷的重要檢測指標(biāo)。

PI3K/Akt2通路能加快腫瘤細(xì)胞的生長、侵襲與轉(zhuǎn)移速度，同時(shí)還抑制瘤細(xì)胞的調(diào)亡。Arobleda等[14]的研究也表明，過表達(dá)Akt2的細(xì)胞系其穿透基質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)移的能力明顯提高，Akt/PKB具有促進(jìn)腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移的重要能力，這與本研究的結(jié)果基本一致。本研究發(fā)現(xiàn)，Akt2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、不同浸潤深度、不同臨床分期有關(guān)（P＜0.05）；與年齡、性別無關(guān)，提示Akt2與胃癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系，Akt2表達(dá)越高，則胃癌的嚴(yán)重程度更高。研究表明，Livin基因主要通過抑制caspase途徑及激活TAKl/JNKl信號傳導(dǎo)途徑來抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，但目前只在黑色素瘤、結(jié)腸癌、膀胱癌和肺癌組織等少數(shù)腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，在多數(shù)正常成人組織中不表達(dá)。阿娜爾古麗·阿布都熱合曼等[15]研究表明，Livin與胃癌的形成密切相關(guān)，有助于判斷胃癌的侵襲性及惡性程度。本研究發(fā)現(xiàn)，Livin蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度有關(guān)；與性別、年齡、不同浸潤深度、不同臨床分期間無關(guān)，提示Livin蛋白的表達(dá)與胃癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系。

綜上所述，Akt2、Livin蛋白在胃癌中高表達(dá)，并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切，但具體機(jī)制仍需作進(jìn)一步的深入研究。