鼻咽癌患者的MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白表達(dá)水平及其臨床意義研究

李茉莉

(開封市中心醫(yī)院檢驗科，河南 開封 475000)

流行病學(xué)研究證實，我國2010-2017年部分地區(qū)鼻咽癌的發(fā)病率可達(dá)273~593/10萬人左右[1]。臨床上鼻咽癌的發(fā)生，能夠?qū)е禄颊吒吣[瘤臨床負(fù)荷的出現(xiàn)，導(dǎo)致患者總體生存時間和無瘤生存時間的下降[2]。

在揭示鼻咽癌的病情進(jìn)展機(jī)制的過程中發(fā)現(xiàn)，腫瘤調(diào)控相關(guān)蛋白的表達(dá)異常，能夠通過調(diào)控信號通路的活性，影響到癌細(xì)胞內(nèi)的調(diào)控因子的濃度，進(jìn)而影響到惡性腫瘤的病情進(jìn)展速度。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因 （Metastasis Associated In Colon Cancer 1，MACC1）的表達(dá)，能夠通過提高細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移能力，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的浸潤和擴(kuò)散[3]；絲裂原活化蛋白激酶的激酶4（Mitogen-activated protein kinase kinase，MKK4）的表達(dá)，能夠通過對于絲裂原蛋白激酶的磷酸化修飾作用，進(jìn)而調(diào)控ras信號通路的激活，降低癌細(xì)胞的增殖擴(kuò)增速度[4]；磷酸化的需醇激酶 （phosphorylated inisotol requiling kinase，p-IRE1）的表達(dá)能夠通過對于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的損傷，增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的折疊障礙，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的病變過程[5]。 為了揭示 MKK4、MACC1、p-IRE1的表達(dá)與鼻咽癌的關(guān)系，本次研究選取2016年2月-2018年2月在我院接受治療的鼻咽癌患者為研究對象，探討了MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白的表達(dá)情況及與鼻咽癌患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 患者一般資料 選取2016年2月-2018年2月在我院接受治療的鼻咽癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴成年者；⑵經(jīng)手術(shù)病理確診為鼻咽癌者；⑶無其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者；排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴合并其他部位原發(fā)腫瘤者；⑵臨床資料不全者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入病例數(shù)100例，男75例，女25例，年齡 40～75 歲，平均 56.13±6.18 歲；鼻息肉組納入排除標(biāo)準(zhǔn)：年齡≥18周歲，平素體健，無其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者，共納入100例，男60例，女40例，年齡42～72歲，平均56.18±5.97歲。兩組患者的年齡和性別等一般資料比較無差別。

1.2 方法 所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法 (strep avidin-biotin complex，SABC法)染色，二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene，DAB)顯色。MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 評價指標(biāo) 觀察兩組患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)情況，比較不同特征鼻咽癌患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)的差異，分析影響鼻咽癌患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)的因素。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)錄入后，采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行分析。計數(shù)和計量資料分別采用例和均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。鼻咽癌和鼻息肉患者、不同特征鼻咽癌患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)的比較采用卡方檢驗進(jìn)行分析，采用Logistic回歸分析法分析影響鼻咽癌患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)的因素。P＜0.05：差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)情況的比較 鼻咽癌組患者的MACC1、p-IRE1蛋白陽性表達(dá)率高于鼻息肉組患者，MKK4蛋白陽性表達(dá)率低于鼻息肉組患者。見表1。

表1 兩組患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)情況的比較

2.2 不同特征鼻咽癌患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)的比較 臨床分期為Ⅲ期、分化程度為中、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者的MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白陽性表達(dá)率較高，不同年齡、性別患者的MKK4、MACC1、p-IRE1蛋白陽性表達(dá)率無差別。見表2。

2.3 影響鼻咽癌患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)的因素分析 將單因素分析有意義的因素作為自變量，以患者M(jìn)KK4、MACC1、p-IRE1蛋白表達(dá)情況作為因變量，進(jìn)行回歸分析。結(jié)果臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)入回歸方程。見表3。

3 討論

EB病毒感染能夠顯著促鼻粘膜上皮細(xì)胞的病變，增加鼻咽癌的發(fā)生風(fēng)險，特別是在合并有放射性射線接觸的患者中，鼻咽癌的發(fā)生風(fēng)險可進(jìn)一步的上升[6，7]?，F(xiàn)階段臨床上主要通過手術(shù)及放療治療鼻咽癌，但包括手術(shù)及術(shù)后放療治療后，鼻咽癌患者的臨床病情緩解率仍然較低，治療后的患者無進(jìn)展生存期仍然無明顯的改善[8，9]。而免疫靶向性治療，能夠在惡性腫瘤患者的輔助治療過程中發(fā)揮重要作用，本次研究對于鼻咽癌患者體內(nèi)的MKK4、MACC1、p-IRE1的表達(dá)分析研究，不僅能夠深入揭示鼻咽癌的發(fā)生機(jī)理，同時還能夠為鼻咽癌患者的免疫靶向性治療提高參考靶點(diǎn)。

MACC1能夠通過對于癌細(xì)胞生物學(xué)特征的影響，提高癌細(xì)胞的變形能力，促進(jìn)癌細(xì)胞對于臨近正常鼻粘膜組織的浸潤。MACC1的上升還能夠提高細(xì)胞間質(zhì)成分的分解，為癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供條件[10]；MKK4主要存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核周邊，其表達(dá)濃度的上升，能夠通過抑制癌細(xì)胞上游轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而降低癌細(xì)胞紡錘體的復(fù)制和分裂速度，抑制癌細(xì)胞的持續(xù)性自我擴(kuò)增。MKK4還能夠通過對于誘導(dǎo)凋亡因子的調(diào)控，提高癌細(xì)胞的分化成熟能力，提高高分化細(xì)胞的比例[11]；p-IRE1是磷酸化的需醇激酶，其能夠通過對于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)折疊錯誤的影響，導(dǎo)致癌細(xì)胞內(nèi)核轉(zhuǎn)錄基因NF-KB的激活，促進(jìn)癌細(xì)胞DNA的持續(xù)性自我增殖過程[12]。

表2 不同特征鼻咽癌患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)的比較

表3 影響鼻咽癌患者M(jìn)KK4蛋白、MACC1蛋白、p-IRE1蛋白表達(dá)的因素分析

免疫組化的結(jié)果提示，在鼻咽癌患者中，MACC1及p-IRE1的表達(dá)陽性率明顯的上升，高于良性鼻粘膜病變組織，差異較為明顯，而MKK4蛋白的表達(dá)陽性率明顯的下降，提示MKK4、MACC1、p-IRE1的異常表達(dá)均能夠影響到鼻咽癌的病情進(jìn)展過程。通過匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要與MKK4、MACC1、p-IRE1的下列幾個方面的機(jī)理作用有關(guān)[13，14]：⑴MACC1的表達(dá)上升能夠提高癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力，促進(jìn)癌細(xì)胞的擴(kuò)散，而p-IRE1的上升能夠提高NF-KB的激活程度，促進(jìn)下游核轉(zhuǎn)錄因子的顯著激活，從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖；⑵MKK4的表達(dá)缺失，導(dǎo)致癌細(xì)胞有分裂原蛋白激酶穩(wěn)定性下降，導(dǎo)致癌細(xì)胞周期紊亂的發(fā)生。樊建雨等[15]研究者也通過免疫組化方式探討了MACC1蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)在鼻咽癌患者中，MACC1蛋白的表達(dá)陽性率可平均上升30%以上，特別是在合并有明顯的高腫瘤負(fù)荷或者遠(yuǎn)期病死率較高的患者中，MACC1蛋白的表達(dá)陽性率可進(jìn)一步的上升。在探討相關(guān)指標(biāo)與鼻咽癌患者臨床病理特征的關(guān)系過程中發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期較晚或者癌細(xì)胞分化程度較差的患者中，MKK4的表達(dá)陽性率較低，而MACC1、p-IRE1的表達(dá)陽性率較高，提示了MKK4、MACC1、p-IRE1的表達(dá)與鼻咽癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)，這主要由于MKK4的表達(dá)缺失能夠提高細(xì)胞的分化成熟障礙，導(dǎo)致低分化和中低分化的形成，并提高了癌細(xì)胞的粘附能力；而MACC1、p-IRE1的上升，能夠提高癌細(xì)胞的侵襲能力，促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，增加了臨床分期，同時二者的表達(dá)還能夠提高癌細(xì)胞對于鎖骨部位淋巴結(jié)組織的粘附能力，促進(jìn)了癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。最后，危險因素分析也可見，臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響到MKK4、MACC1、p-IRE1的表達(dá)的重要風(fēng)險性因素，進(jìn)一步提示了相關(guān)指標(biāo)與鼻咽癌患者臨床病情的密切關(guān)系。

綜上所述，在鼻咽癌患者中，MKK4、MACC1、p-IRE1的表達(dá)與鼻咽癌患者的病情密切相關(guān)。后續(xù)臨床相關(guān)研究可以繼續(xù)探討MKK4、MACC1、p-IRE1的表達(dá)與鼻咽癌患者臨床預(yù)后的關(guān)系。