血清TPS、B7H4水平與結直腸癌患者腫瘤發(fā)生發(fā)展的關系

李艷玲，莊競，馮偉宇，王娜

(鄭州大學附屬腫瘤醫(yī)院、河南省腫瘤醫(yī)院，河南 鄭州 450003)

結直腸癌的發(fā)生，主要考慮與長期的腸道黏膜上皮細胞病理性異常增生有關[1]。臨床上隨訪觀察發(fā)現(xiàn)，結直腸癌導致的患者病死率的上升較為顯著，患者的5年生存率可不足45%[2]。在探討結直腸癌發(fā)生的基礎性機制中，可以發(fā)現(xiàn)蛋白或者腫瘤相關因子的改變，能夠影響到結直腸上皮細胞的異常增生、凋亡抑制或者病理性核異型性。其中組織多肽特異性抗原（TPS）的表達能夠反應多種腫瘤細胞的異常增生過程，在癌細胞核DNA持續(xù)性復制的過程中，部分凋亡的癌細胞可以顯著促進TPS的分泌[3]；負性共刺激分子（B7H4）是共刺激家族相關因子，其能夠提高癌細胞上游癌基因的轉錄活性，提高癌細胞的粘附和浸潤能力，并能夠加劇癌對于基底膜組織的突破和轉移的能力[4]。部分研究者探討了TPS、B7H4在其他消化系統(tǒng)腫瘤患者中的表達情況，認為TPS、B7H4的表達上升與胃癌或者肝癌的發(fā)生具有一定的關聯(lián)[5，6]，但在結直腸癌患者中的探討不足。為了深入揭示TPS、B7H4的表達與結直腸癌的關系，從而為臨床上結直腸癌的診療提供一定的理論方面的參考，本次研究選取2016年1月至2017年8月我院確診的結直腸癌患者100例，探討了血清中TPS、B7H4蛋白的表達情況，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年1月至2017年8月我院確診的結直腸癌患者100例（腫瘤組）、同期健康體檢對象100例（對照組）。腫瘤組，年齡33～72歲，平均 57.5±10.6歲，男 55例、女 45例，TNM分期：Ⅰ期21例、Ⅱ期40例、Ⅲ期30例、Ⅳ期9例；發(fā)生淋巴結轉移52例；高分化30例、中分化38例、低分化32例；發(fā)生遠處轉移23例。對照組，年齡 35～75歲，平均 55.5±13.2歲，男 50例、女 50例。兩組研究對象的年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

納入標準：⑴結腸癌、直腸癌患者的診斷以腸鏡取活組織病理學檢查作為金標準；⑵對照組為健康體檢志愿者；⑶納入研究對象的年齡范圍在75歲以內；⑷本研究取得醫(yī)學倫理委員會的批準、研究對象的知情同意。

排除標準：⑴已經接受了手術治療；⑵轉移性結直腸癌；⑶既往具有放化療病史；⑷甲狀腺功能疾??；⑸類風濕、強直性脊柱炎、結締組織疾病。

1.2 指標檢測方法 采集患者入院后24h內或者治療后6～8h內的肘部靜脈血4ml，1500r/min離心15min，收集上清液，在每個聚苯乙烯板中加入上述液體0.1ml，4℃過夜孵育，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次，每次3min，在每個聚苯乙烯板孔中加入TPS、B7H4蛋白抗體（1：800購自南京伯斯金生物公司），37℃孵育30min，加入磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌3次，每次3min，每孔中加入TMB溶液底物0.1ml，37℃20min， 加入2M硫酸0.05ml終止反應，采用DG5033A酶標儀（南京華東電子科技公司）進行OD值檢測。

2 結果

2.1 兩組研究對象的血清TPS、B7H4水平比較腫瘤組患者的TPS、B7H4水平顯著的高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；見表 1。

表1 兩組研究對象的血清TPS、B7H4水平比較（）

表1 兩組研究對象的血清TPS、B7H4水平比較（）

組別腫瘤組對照組t值P值n TPS（U/L） B7H4（μg/L）100 100 149.7±32.8 70.2±19.5 20.834 0.000 57.8±17.0 30.1±9.0 14.401 0.000

2.2 不同病理學特征的結直腸癌患者的血清TPS、B7H4水平比較 在不同TNM分期、不同分化程度的結直腸癌患者血清TPS水平比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；見表 2。

表2 不同病理學特征的結直腸癌患者的血清TPS水平比較（）

表2 不同病理學特征的結直腸癌患者的血清TPS水平比較（）

因素 n TNM分期Ⅰ期+Ⅱ期Ⅲ期+Ⅳ期淋巴結轉移TPS（U/L） t值 P 值-6.9340.000 61 39 130.6±31.7 173.5±27.6 1.3890.168是 否52 48 152.2±30.0 143.6±31.9分化程度高+中低分化遠處轉移-7.3440.000 68 32 134.7±30.8 182.6±29.6 1.4980.137是 否23 77 156.8±24.7 146.2±31.1

在不同TNM分期、是否發(fā)生淋巴結轉移、是否發(fā)生遠處轉移的結直腸癌患者血清B7H4水平比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；見表 3。

表3 不同病理學特征的結直腸癌患者的血清B7H4水平比較（）

表3 不同病理學特征的結直腸癌患者的血清B7H4水平比較（）

因素 n TNM分期Ⅰ期+Ⅱ期Ⅲ期+Ⅳ期淋巴結轉移B7H4（μg/L） t值 P 值-5.5430.000 61 39 50.6±16.3 68.4±14.6 5.1790.000是 否52 48 65.2±16.3 48.5±15.9分化程度高+中低分化遠處轉移-1.2430.217 68 32 56.2±15.5 60.4±16.3 5.5480.000是 否23 77 73.2±14.9 51.8±16.6

3 討論

炎癥性因子的刺激、遺傳性基因的突變或者自身核DNA基因的錯配修復能力的下降，均能夠提高結直腸癌的發(fā)生率。臨床上結直腸癌的發(fā)生能夠導致患者惡病質、高腫瘤負荷臨床癥狀的出現(xiàn)，導致腫瘤患者短期內病死率的提升[7]?，F(xiàn)階段主要通過癌胚抗原或者CA125等指標評估結直腸癌的發(fā)病風險，雖然相關血清學指標能夠在結直腸癌的發(fā)病診斷過程中發(fā)揮作用，但單獨依靠癌胚抗原或者CA125診斷的局限性較為明顯[8，9]。而本次研究對于結直腸癌患者血清中TPS、B7H4的表達分析探討，一方面可以為揭示結直腸癌的病情進展提供理論方面的參考，同時還能夠為結直腸癌患者的血清學診斷提供新的研究性指標。

腫瘤信號通路蛋白或者相關分子的改變，是促進結直腸癌惡性腫瘤進展的重要因素。TPS主要表達與消化道上皮、呼吸道上皮或者生殖道上皮組織，其結構上包含了435個氨基酸結構，能夠通過結合癌細胞內的NF-KB信號通路，進而促進癌細胞的持續(xù)性自我擴增。相關研究還認為，TPS的表達能夠提高腫瘤干細胞的特性，提高腫瘤干細胞對于增殖的維持作用[10]；B7H4是共刺激相關分子，其能夠通過改變癌細胞的生物學特征，提高黏膜上皮細胞對于臨近正常組織的累及和浸潤能力，從而提高了早期腫瘤的發(fā)生速度，促進了腫瘤患者中晚期的病情進展[11]。部分研究者探討了TPS或者B7H4在直腸癌患者中的表達情況，認為二者的高表達與直腸癌的發(fā)生具有一定的關系[12]，但缺乏對于TPS、B7H4的表達與直腸癌患者臨床病理特征的分析。

本次研究發(fā)現(xiàn)在結直腸癌患者血清中，TPS、B7H4蛋白的表達濃度均明顯上升，高于同期健康體檢組人群，差異具有統(tǒng)計學意義，提示了TPS、B7H4蛋白的高表達均能夠影響到結直腸癌的發(fā)生發(fā)展，分析其基礎方面的原因，則主要考慮由于TPS、B7H4的表達上升，能夠影響到癌細胞內多種腫瘤信號通路如AKT的激活，提高了腫瘤細胞的持續(xù)性異常分化和凋亡抑制，進而促進了相關消化道惡性腫瘤的發(fā)生。部分研究者[5]在探討相關蛋白的表達過程中也發(fā)現(xiàn)，TPS在直腸癌患者中的表達濃度可平均上升30%以上，同時在合并有明顯的惡病質的患者中，TPS蛋白的表達濃度可持續(xù)上升。在探討TPS、B7H4蛋白的表達與結直腸癌患者臨床病理特征的關系過程中發(fā)現(xiàn)，在臨床分期較晚或者結直腸癌細胞分化程度較差的患者中，TPS蛋白的表達濃度可進一步的上升，其表達濃度明顯高于臨床病理特征較低組，統(tǒng)計學差異顯著，提示了TPS蛋白的表達與結直腸癌患者的病情密切相關。分析其基礎方面的原因，不同的文獻收集匯總后主要考慮與下列因素有關[13-15]：⑴TPS的表達上升能夠提高結直腸癌上皮細胞的浸潤深度，促進了癌細胞對于臨近正常腸道組織的浸潤，從而促進了臨床分期的進展；⑵TPS蛋白的表達能夠導致結直腸上皮黏膜細胞的分化調控障礙，進而導致低分化的發(fā)生。在探討B(tài)7H4的表達與結直腸癌患者病情關系過程中發(fā)現(xiàn)，發(fā)生了遠處轉移、臨床分期較晚或者發(fā)生了淋巴結轉移的患者中，血清B7H4水平比較高，提示了B7H4的表達與患者的病情同樣密切相關，這主要由于B7H4的表達能夠導致癌細胞分化障礙的過程，影響到癌細胞對于盆腔淋巴結的粘附能力。臨床上可以通過隨訪檢測B7H4或者TPS的表達，進而評估結直腸癌患者的臨床病理特征進展程度。

綜上所述，在結直腸癌患者中，TPS、B7H4蛋白的表達均明顯上升，同時TPS、B7H4蛋白的表達與結直腸癌患者的臨床病理特征密切相關。本次研究未能探討TPS、B7H4蛋白的表達與結直腸癌患者的臨床預后的關系，存在一定的不足。