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    原發(fā)性高血壓病人Th22細(xì)胞及其細(xì)胞因子的臨床意義

    2019-01-22 10:34:08
    關(guān)鍵詞:孵育外周血對(duì)象

    原發(fā)性高血壓(EH)是指無(wú)確切病因的以體循環(huán)動(dòng)脈壓升高為主要臨床表現(xiàn)的心血管綜合征[1-2]。既往研究認(rèn)為,EH是一種慢性低級(jí)別炎癥性疾病,免疫功能異常在EH發(fā)生、發(fā)展過(guò)程發(fā)揮重要作用[3],因此有關(guān)EH與免疫細(xì)胞、免疫分子的相關(guān)研究已成為當(dāng)前心血管病學(xué)研究的重要方向。本研究探討Th22細(xì)胞及其細(xì)胞因子在EH病人中表達(dá)的臨床意義,現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 研究對(duì)象 選取2013年1月—2016年10月我院收治的64例1級(jí)EH病人(A組)、70例2級(jí)EH病人(B組)、49例3級(jí)EH病人(C組)及同期體檢科體檢的50名健康對(duì)照者(D組)作為研究對(duì)象。A組、B組、C組研究對(duì)象納入標(biāo)準(zhǔn):符合EH診斷標(biāo)準(zhǔn)[4];最近6個(gè)月內(nèi)未服用降壓藥物、免疫抑制劑類(lèi)藥物。排除標(biāo)準(zhǔn):繼發(fā)性高血壓病人;合并免疫系統(tǒng)疾?。缓喜⒛X血管疾??;合并冠心病、心力衰竭等心臟疾病;合并重要臟器功能不全;合并惡性腫瘤。4組研究對(duì)象性別、年齡比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

    1.2 研究方法

    1.2.1 外周血Th22細(xì)胞檢測(cè) 采用美國(guó)BD公司FACSCalibur流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè),步驟如下:①抽取研究對(duì)象空腹靜脈血2 mL,肝素抗凝。②取500μL肝素抗凝血,依次加入氟波酯液12.5 μL、莫能霉素液0.35 μL、伊諾霉素液1.3 μL,混勻,37 ℃水浴6 h。③取一根流式細(xì)胞管,加入孵育后樣本300 μL、CD4單克隆抗體30 μL,混勻,室溫避光孵育10 min。④加入紅細(xì)胞裂解液3 mL,混勻,室溫避光孵育10 min。待紅細(xì)胞裂解完全后,采用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌細(xì)胞2次或3次,將PBS液吸凈。⑤加入破膜劑250 μL,混勻,室溫避光孵育25 min,采用PBS液洗滌1次或2次,將PBS液吸凈。⑥加入PBS液2 mL,混勻,備用。⑦取兩根流式細(xì)胞管,一根為試驗(yàn)管加入100 μL細(xì)胞液及5 μL 藻紅素(PE)標(biāo)記白介素-22(IL-22)抗體、異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記干擾素-γ(IFN-γ)抗體、PE標(biāo)記白介素-17(IL-17)抗體,另外一根作為對(duì)照管,加入細(xì)胞液100 μL及PE 5 μL標(biāo)記IL-22抗體、FITC標(biāo)記IFN-γ抗體、PE標(biāo)記IL-17抗體的同型對(duì)照抗體,混勻,室溫避光孵育30 min。⑧兩管中均加入PBS液2 mL,混勻,離心棄上清,加入1%多聚甲醛300 μL,4 ℃冰箱保存。⑨48 h內(nèi)檢測(cè)完畢,采用CD4設(shè)門(mén),CD4+ IFN-γ- IL-17- IL-22+ 細(xì)胞即為T(mén)h22細(xì)胞,采用軟件分析結(jié)果。

    1.2.2 外周血IL-22檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行檢測(cè),試劑盒由上??道噬锟萍加邢薰咎峁?,嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

    2 結(jié) 果

    2.1 4組研究對(duì)象外周血Th22細(xì)胞和IL-22水平比較 A組、B組、C組、D組外周血Th22細(xì)胞、IL-22水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Th22細(xì)胞:F=14.763,P=0.000;IL-22:F=30.074,P=0.000),D組外周血Th22細(xì)胞、IL-22水平顯著低于A組、B組、C組(Th22細(xì)胞:qA vs D=9.910,P=0.000;qB vs D=11.489,P=0.000;qC vs D=12.657,P=0.000;IL-22:qA vs D=29.870,P=0.000;qB vs D=25.100,P=0.000;qC vs D=24.595,P=0.000),A組外周血Th22細(xì)胞水平低于B組、C組(qA vs B=2.001,P=0.047;qA vs C=3.481,P=0.001),B組外周血Th22細(xì)胞水平低于C組(qB vs C=2.022,P=0.046),A組、B組、C組外周血IL-22水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(qA vs B=1.471,P=0.145;qA vs C=1.173,P=0.243;qB vs C=0.189,P=0.850)。詳見(jiàn)表1。

    表1 4組外周血Th22細(xì)胞和IL-22水平比較(±s)

    2.2 4組研究對(duì)象血壓水平比較 4組研究對(duì)象收縮壓及舒張壓從高到低依次為:C組>B組>A組>D組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

    表2 4組研究對(duì)象血壓水平比較(±s) mmHg

    2.3 EH病人外周血Th22細(xì)胞及IL-22與血壓相關(guān)性分析 EH病人外周血Th22細(xì)胞水平與收縮壓(SBP)呈正相關(guān)(r=0.407,P=0.033),與舒張壓(DBP)無(wú)相關(guān)性(r=0.219,P=0.155)。EH病人外周血IL-22水平與SBP(r=0.155,P=0.210)、DBP(r=0.190,P=0.286)均無(wú)相關(guān)性。

    3 討 論

    EH是目前臨床常見(jiàn)的心血管系統(tǒng)疾病之一,約占所有高血壓病人的95%以上[5]。EH發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確,盡管臨床已確認(rèn)其是一種多因素病因疾病,尤其是遺傳因素、環(huán)境因素交互作用在EH發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用,這兩個(gè)因素具體通過(guò)何種途徑促使血壓升高目前尚無(wú)完整統(tǒng)一認(rèn)識(shí)[6-7]。

    隨著研究深入,炎癥因素與EH的關(guān)系逐步得到重視。周言等[8]報(bào)道,EH病人血清人軟骨糖蛋白(YKL-40)水平顯著高于健康對(duì)照組,EH合并代謝綜合征(MS)病人血清YKL-40水平顯著高于EH未合并MS病人,EH病人血清YKL-40水平與其SBP、DBP、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)呈正相關(guān),由此可見(jiàn),炎癥因子YKL-40可能參與EH的病理生理過(guò)程,其在高血壓病人預(yù)后評(píng)估方面可能有一定的臨床價(jià)值。朱瑞英等[9]報(bào)道,EH病人血清C反應(yīng)蛋白(CRP)水平顯著高于健康對(duì)照組,進(jìn)一步多元Logistic回歸分析顯示,血清CRP水平是EH發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。由此可見(jiàn),EH發(fā)生發(fā)展與機(jī)體炎癥因素密切相關(guān)。Th22細(xì)胞是Eyerich等于2009年在CD4+T細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的一種新型效應(yīng)性T細(xì)胞,其與Th1、Th2、Th17細(xì)胞明顯不同,存在特有的分化和轉(zhuǎn)錄因子[10]。關(guān)于Th22細(xì)胞研究認(rèn)為,其典型特征是大量分泌IL-22而不分泌IFN-γ,不分泌或少量分泌IL-17,因此臨床對(duì)Th22細(xì)胞的相關(guān)研究常同時(shí)檢測(cè)外周血IL-22水平[11-12]。目前研究認(rèn)為,外周血Th22細(xì)胞及IL-22水平異常可見(jiàn)于多種疾病。戴小波等[13]報(bào)道,慢性乙型肝炎病人外周血Th22細(xì)胞、IL-22水平顯著低于健康對(duì)照組、乙肝病毒攜帶者、非病毒性肝炎病人,因此外周血Th22細(xì)胞數(shù)量減少或功能減退、IL-22水平降低可能是慢性乙型肝炎發(fā)病的重要因素。賀燕妮等[14]報(bào)道,斑禿病人外周血Th22、IL-22水平顯著高于健康對(duì)照組,重型斑禿病人、活動(dòng)期斑禿病人外周血Th22、IL-22水平顯著高于輕型斑禿病人、穩(wěn)定期斑禿病人,因此Th22及其細(xì)胞因子可能參與斑禿的發(fā)生、發(fā)展。可見(jiàn),Th22細(xì)胞及IL-22在慢性炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用。

    本研究結(jié)果顯示,EH病人外周血Th22細(xì)胞、IL-22水平均顯著高于健康對(duì)照組,且EH分級(jí)越高,外周血Th22細(xì)胞亦逐步升高,但不同分級(jí)EH病人外周血IL-22水平比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步相關(guān),分析顯示,EH病人外周血Th22細(xì)胞水平與SBP呈顯著正相關(guān)而與DBP無(wú)顯著相關(guān)性,其外周血IL-22水平則與SBP、DBP均無(wú)顯著相關(guān)性。本研究結(jié)果與楊子聰[15]報(bào)道不一致,其可能原因是兩者研究對(duì)象選擇、樣本量方面存在差異。

    綜上所述,外周血Th22細(xì)胞可能在EH發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮一定的作用,其具體作用機(jī)制尚未明確,有待臨床進(jìn)一步研究。

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