高通量測序技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的臨床應(yīng)用

金敏

553000六盤水市婦幼保健院，貴州六盤水

出生缺陷又稱先天異常，包括無腦兒、脊柱裂、兔唇、先心病、唐氏綜合征等多種疾病，是影響新生兒健康狀況、導(dǎo)致家庭經(jīng)濟負(fù)擔(dān)加重的主要因素。加強產(chǎn)前檢查，可有效檢出上述疾病。有研究指出，高通量測序技術(shù)的應(yīng)用，對出生缺陷檢出率的提高具有重要意義。在本院2017年5月-2018年5月收治的孕婦中隨機選取產(chǎn)前篩查中唐氏篩查高風(fēng)險和臨界高風(fēng)險(開放性脊柱裂除外)孕婦300 例作為樣本，闡述了高通量測序技術(shù)的應(yīng)用方法，觀察了該技術(shù)的臨床效果。

資料與方法

選取產(chǎn)前篩查中唐氏篩查高風(fēng)險和臨界高風(fēng)險(開放性脊柱裂除外)孕婦300例，年齡20～34歲，孕周16～20周；所有孕婦均自愿參與本研究，且依從性良好，可定期接受隨訪。

方法：①采用三聯(lián)生化指標(biāo)進(jìn)行唐氏篩查，唐氏數(shù)據(jù)采用騰程軟件處理，21-三體高風(fēng)險截斷值為1/380，18-三體為1/350。②300 例孕婦均采用高通量測序技術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前檢查：和產(chǎn)前診斷中心合作，采用貝瑞華康基因檢測；抽取孕婦血漿，獲取血漿游離DNA，高通量測序結(jié)果。③高風(fēng)險者再進(jìn)行羊水穿刺染色體診斷，對結(jié)果進(jìn)行分析，判斷有無出生缺陷。④對低風(fēng)險者進(jìn)行隨訪妊娠結(jié)局，判斷有無出生缺陷。

統(tǒng)計學(xué)方法：計數(shù)資料以[n(%)]表示，采用χ2檢驗；計量資料以(±s)表示，采用t檢驗；P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

高通量測序結(jié)果：高通量測序結(jié)果提示高風(fēng)險者占4.33%(13/300)，T21陽性占4.0%(12/300)，T18陽 性 占0.33%(1/300)，未見T13陽性(0/300)。

患者驗證結(jié)果：高風(fēng)險患者中，真陽性占92.3%(12/13)，假陽性占7.7%(1/13)，已驗證者占100%(13/13)；T21陽性患者中，真陽性占92%(11/12)，假陽性占8%(1/12)，已驗證者占100%(12/12)；T18陽性患者中，真陽性占100%(1/1)，假陽性占0(0/1)，已驗證者占100%(1/1)；未發(fā)現(xiàn)T13陽性患者。其余287例低風(fēng)險孕婦經(jīng)過隨訪妊娠結(jié)局，未發(fā)現(xiàn)21-三體，18-三體患兒的出生，假陰性均為0%。

討 論

出生缺陷為影響新生兒健康狀況的關(guān)鍵因素，孕期檢出并及早給予干預(yù)，可有效提高新生兒的健康水平，減輕家庭經(jīng)濟負(fù)擔(dān)[1]。出生缺陷的常規(guī)診斷方法以羊水穿刺為主，臨床研究發(fā)現(xiàn)，采用羊水穿刺的方式診斷疾病，檢出率約為42.5%[2]。導(dǎo)致羊水穿刺檢出率低的原因，與以下因素有關(guān)：①健康知識匱乏：部分孕婦及家屬健康知識匱乏，認(rèn)為夫妻雙方身體健康，則無對出生缺陷進(jìn)行篩查和診斷的必要，故拒絕羊水穿刺，導(dǎo)致出生缺陷檢出率下降[3]。②擔(dān)心風(fēng)險：部分孕婦錯誤地認(rèn)為，羊水穿刺可增加流產(chǎn)的風(fēng)險，因此孕婦對該檢查技術(shù)往往伴有一定的恐懼情緒，導(dǎo)致唐氏綜合征等出生缺陷的檢出率下降[4]。

高通量測序技術(shù)(High-throughput sequencing)又稱下一代測序技術(shù)，可一次性對幾十乃至幾百萬DNA 分子序列進(jìn)行測定[5]。該技術(shù)的出現(xiàn)，使得基因領(lǐng)域的研究取得了革命性進(jìn)展。為提高出生缺陷的檢出率，本院將高通量測序技術(shù)應(yīng)用到了出生缺陷的診斷過程中，結(jié)果顯示，高通量測序結(jié)果提示高風(fēng)險者占4.33%，其中T21陽性占4.00%，T18陽性占0.33%，未見T13陽性。上述研究結(jié)果表明，采用高通量測序技術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前診斷，可有效檢出T21、T18及T13陽性患者。為判斷該技術(shù)診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，本院通過羊水穿刺和隨訪的方式，對診斷結(jié)果進(jìn)行了驗證，結(jié)果顯示，T21真陽性占92%，假陽性占8%；T18陽性患者中，真陽性占100%，假陽性占0%；低風(fēng)險患者隨訪妊娠結(jié)局，未發(fā)現(xiàn)21-三體，18-三體患兒的出生。上述研究結(jié)果表明，采用高通量測序技術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前篩查，檢出結(jié)果準(zhǔn)確性較高。與常規(guī)羊水穿刺技術(shù)相比，高通量測序技術(shù)具有如下優(yōu)勢：①檢出率高：本研究結(jié)果表明，將高通量測序技術(shù)應(yīng)用到產(chǎn)前診斷中，T21、T18及T13陽性的檢出率均較高，可見該技術(shù)具有一定的臨床應(yīng)用價值。②無痛苦：采用高通量測序技術(shù)進(jìn)行產(chǎn)前篩查，僅需獲取孕婦血漿即可，孕婦無痛苦，無恐懼情緒，接受度高。③成本低：與羊水穿刺相比，高通量測序技術(shù)測序成本較低，可減輕孕婦的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，有助于提高出生缺陷的檢出率，應(yīng)及早給予干預(yù)，提高新生兒的健康水平。④耗時短：高通量測序技術(shù)，測序時間較短，效率較高，孕婦可于短時間內(nèi)獲取檢測結(jié)果，無需長期等待。⑤作為唐氏篩查的補充手段，可避免95%以上的唐氏篩查高風(fēng)險和臨界高風(fēng)險假陽性患者進(jìn)行羊水穿刺和臍穿刺等有創(chuàng)性的產(chǎn)前診斷。結(jié)合以上優(yōu)勢可以看出，高通量測序技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用價值較高，值得推廣。

綜上所述，將高通量測序技術(shù)應(yīng)用到產(chǎn)前診斷中，能夠有效提高T21、T18及T13陽性檢出率，可以作為唐氏篩查的補充，節(jié)約成本、時間(與羊水穿刺相比較)，降低羊水穿刺帶來的風(fēng)險與出生缺陷的發(fā)生率。