石草鞋化學(xué)成分的研究（Ⅱ）

王治陽(yáng)，葉同生，唐素勤

（河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院，河南 鄭州450003）

石草鞋Hoya lyiLevl.為蘿藦科植物球蘭屬香花球蘭Hoya lyiLevl.［H.yuen-nanensisHand.-Mazz］的全草［1］，廣泛分布于河南、云南、四川、青海等地。其主要含有黃酮類(lèi)、蒽醌、香豆素和有機(jī)酸類(lèi)。具有祛風(fēng)散寒、化瘀通絡(luò)、活血止痛的功效，用于風(fēng)寒痹癥、跌打損傷、胸前飽脹等?！端拇ǔＳ弥胁菟帯罚骸靶廖⑺幔瑴?。除風(fēng)濕，消食積，散瘀血。治腳強(qiáng)痛，胸前飽脹，跌打損傷。”現(xiàn)代藥理作用表明其具有顯著地抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、降低血管通透性、抗衰老等作用［2-3］。

課題組曾對(duì)石草鞋全草進(jìn)行分離鑒定出27個(gè)單體化合物［4-5］。為了進(jìn)一步闡明其有效成分，促進(jìn)其資源的開(kāi)發(fā)，本研究對(duì)其進(jìn)一步分離、純化、鑒定出12個(gè)化合物，所有化合物均為首次從該植物中分離得到，其中化合物1、7～8、12為首次從該屬植物中分離得到。

1 材料

5973N 型質(zhì)譜儀（高真空，美國(guó)Agilent 公司）；Bruker AC-300P 型超導(dǎo)核磁共振譜（TMS 內(nèi)標(biāo)，瑞士Bruker 公司）；ZND83-1型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀（未校正，上海亞榮儀器廠）；柱色譜、薄層色譜硅膠（100～200，300～400目，青島海洋化工廠）；SephadeX LH-20（瑞典Pharmacia 公司）；ZF-20D 型暗箱式紫外分析儀（鞏義予華儀器有限責(zé)任公司）所用試劑均為分析純。

石草鞋采自河南省鄭州市，經(jīng)河南中醫(yī)藥大學(xué)王民集教授鑒定為石草鞋Hoya lyiLevl.的全草。

2 提取與分離

稱(chēng)取石草鞋全草32.6 kg，用95%乙醇加熱回流提取3次，提取時(shí)間分別為2、1、1 h。經(jīng)過(guò)低壓濃縮處理后，得石草鞋提取物浸膏4.3 kg。上述浸膏在超聲下溶解于水中，依次采用石油醚、二氯甲烷、丙酮和正丁醇萃取，低壓濃縮處理后分別得石油醚、二氯甲烷、丙酮、正丁醇萃取物306.5、283.6 g、203.8、236.5 g。將所得二氯甲烷部分過(guò)硅膠色譜柱，以石油醚-丙酮（100 ∶0～80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80～0 ∶100）梯度洗脫，經(jīng)硅膠、Sephadex LH-20等反復(fù)分離、純化得化合物1（16 mg）、3（21 mg）、4（27 mg）、5（16 mg）、11（19 mg）、12（23 mg）。將丙酮萃取物二氯甲烷-甲醇（100 ∶0～80 ∶20～50 ∶50～20 ∶80～0 ∶100）梯度洗脫，過(guò)硅膠、Sephadex LH-20等反復(fù)分離、純化、結(jié)晶得化合物2（18 mg）、6（24 mg）、7（23 mg）、8（16 mg）、9（47 mg）、10（21 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針晶（丙酮），mp 149～150 ℃，ESI-MSm／z：153.4 ［M＋H］＋1，分子式C8H8O3。1HNMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.97（2H，d，J=7.8 Hz，H-2，6），6.59（2H，d，J=7.8 Hz，H-3，5），3.61（2H，s，H-7）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：119.7（C-1），134.5（C-2，6），108.5（C-3，5），148.7（C-4），40.2（C-7），174.2（-COOH）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］基本一致，故鑒定為對(duì)羥基苯乙酸。

化合物2：白色無(wú)定形粉末（丙酮），mp 198～201 ℃，ESI-MSm／z：168.7 ［M ＋H］＋，分 子式C8H8O4。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.53（1H，d，J=7.8 Hz，H-5），7.39（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6），7.03（1H，d，J=1.8 Hz，H-2），4.01（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：119.4（C-1），106（C-2），149.3（C-3），143.7（C-4），121.8（C-5），108.5（C-6），171.5（C-7），50.8（-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定為3，4-二羥基苯甲酸甲酯。

化合物3：白色針晶（丙酮），mp 225～228 ℃，ESI-MSm／z：163.1 ［M ＋ H］＋，分子式C9H6O3。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.91（1H，d，J=7.8 Hz，H-4），7.35（1H，d，J=7.8 Hz，H-5），7.03（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6），6.51（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），5.91（1H，d，J=7.8 Hz，H-3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：165.8（C-2），109.2（C-3），141.7（C-4），131.5（C-5），107.6（C-6），158.6（C-7），118.5（C-8），152.6（C-9），108.3（C-10）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］基本一致，故鑒定為7-羥基香豆素。

化合物4：白色結(jié)晶（丙酮），mp 167～149 ℃，ESI-MSm／z：229.3 ［M ＋Na］＋。1H-NMR（DMSOd6，500 MHz）δ：8.02（1H，d，J=7.8 Hz，H-4），6.71（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），6.37（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.24（1H，d，J=7.8 Hz，H-3），4.03（3H，s，7-OCH3），3.91（3H，s，5-OCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：158.6（C-2），108.4（C-3），141.2（C-4），158.6（C-4a），152.4（C-5），95.1（C-6），159.2（C-7），89.1（C-8），106.7（C-8a），59.4（7-OCH3），54.2（5-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為5，7-二甲氧基香豆素。

化合物5：無(wú)色粉末（丙酮），mp 143～145 ℃，分子式 C11H12O5，ESI-MSm／z：224.8 ［M ＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：11.73（1H，s，-OH），6.41（1H，d，J=1.8 Hz，H-6′），6.19（1H，d，J=1.8 Hz，H-4′），4.02（2H，s，2-CH2），3.81（3H，s，-OCH3），2.73（3H，s，2′-COCH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：169.4（C-1），158.3（C-3′），159.2（C-5′），135.4（C-1′），113.6（C-2′），109.8（C-6′），116.8（C-4′），51.4（1-OCH3），39.8（C-2），31.6（2′-COCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為2-乙酰基-3，5-二羥基-苯乙酸甲酯。

化合物6：無(wú)色粉末（丙酮），mp 133～135 ℃，分子式C9H10O2，ESI-MSm／z：151.2 ［M＋H］＋。1HNMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：11.84（1H，s，2-OH），7.53（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），6.92（1H，dd，J=1.8，7.8 Hz，H-4），6.74（1H，d，J=7.8 Hz，H-3），2.61（3H，s，1-COCH3），2.17（3H，s，5-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：123.6（C-1），158.5（C-2），121.4（C-3），134.6（C-4），123.9（C-5），129.8（C-6），25.8（1-COCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為2-羥基-5-甲基苯乙酮。

化合物7：棕色粉末（丙酮），mp 172～174 ℃，ESI-MSm／z：242.8 ［M＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：6.98（1H，d，J=7.8 Hz，H-3），6.51（1H，m，H-4），5.91（1H，m，H-5），4.03（1H，m，H-8），2.43～2.31（3H，m，H-6，9），1.96（1H，m，H-6），1.72（3H，s，H-11），1.58（1H，m，H-7），0.85（3H，d，J=11.3 Hz，H-12）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：169.3（C-10），191.7（C-1），139.5（C-5），132.4（C-3），119.6（C-4），123.6（C-2），69.2（C-8），40.3（C-9），37.1（C-7），34.9（C-6），11.3（C-12），10.9（C-11）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為glansreginic acid。

化合物8：黃色油狀物（丙酮），分子式C16H22O4，ESI-MSm／z：278.9 ［M ＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.69（2H，m，H-3，6），7.58（2H，m，H-4，5），4.03（2H，d，J=7.8 Hz，H-2′），2.48（1H，m，H-3′），1.03（6H，d，J=7.8 Hz，H-4′，5′）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：129.6（C-1），129.6（C-2），128.3（C-3），131.6（C-4），131.6（C-5），128.3（C-6），68.3（C-2′），30.2（C-3′），21.5（C-4′），21.5（C-5′），170.3（-COOH）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二異丁基酯。

化合物9：無(wú)色油狀物（丙酮），分子式C8H10O，EI-MSm／z：145.2 ［M＋Na］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.03（1H，s，H-6），6.81（2H，d，J=7.8 Hz，H-4），6.57（2H，d，J=7.8 Hz，H-3），4.81（1H，s，1-OH），3.29（3H，s，5-CH3），2.53（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：149.3（C-1），122.5（C-2），131.6（C-3），122.9（C-4），131.9（C-5），112.6（C-6），15.2（2-CH3），20.1（5-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為2，5-dimethylphenol。

化合物10：無(wú)色粉末（丙酮），分子式C11H18O3，ESI-MSm／z：199.1 ［M＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：4.61（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6），3.92（1H，brs，H-9b），3.74（1H，m，H-9a），2.61（1H，m，H-8b），2.49（1H，m，H-8a），1.97（1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-5b），1.68（3H，s，H-7，1.61（1H，t，J=7.8 Hz，H-5a），1.35（3H，s，H-10 ），1.08（3H，s，H-11）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：19.5（C-1），131.6（C-2），158.3（C-3），38.6（C-4），46.8（C-5），70.5（C-6），10.2（C-7），31.7（C-8），57.3（C-9），24.5（C-10），30.9（C-11）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為robinlin。

化合物11：無(wú)色針晶（丙酮），分子式C11H14O5，ESI-MSm／z：226.0 ［M＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：9.37（2H，brs，H-3，H-5），9.06（1H，brs，H-4），6.83（2H，s，H-2，H-6），4.17（2H，t，J=7.8 Hz，H-1′），2.03（2H，m，H-2′），1.57（2H，m，H-3′），1.03（3H，t，J=7.8 Hz，H-4′）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：118.9（C-1），115.9（C-2），153.6（C-3），141.7（C-4），153.6（C-5），115.9（C-6），170.2（C-7），64.7（C-1′），29.6（C-2′），18.7（C-3′），13.5（C-4′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為沒(méi)食子酸正丁酯。

化合物12：白色油狀物（丙酮），分子式C16H22O4，ESI-MSm／z：279.1 ［M ＋H］＋。1H-NMR（DMSO-d6，500 MHz）δ：7.68（2H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-3，6），7.54（2H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-4，5），3.48（4H，t，J=7.8 Hz，H-2′，2″），1.76（4H，dq，J=7.8，1.8 Hz，H-3′，3″），1.29（4H，m，H-4′，4″），0.91（6H，t，J=7.8 Hz，H-5′，5″）；13C-NMR（DMSO-d6，150 MHz）δ：128.4（C-1），128.4（C-2），128.6（C-3），130.6（C-4），130.6（C-5），128.6（C-6），64.3（C-2′），29.5（C-3′），21.8（C-4′），14.2（C-5′），64.3（2″），29.5（3″），21.8（4″），14.2（5″），171.3（-COO）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為鄰苯二甲酸二正丁酯。

4 討論

本研究從石草鞋中分離得到12個(gè)化合物，其中7個(gè)為蘿藦科植物中已報(bào)道的化合物，均是該科植物中分布較廣的特征性成分。國(guó)外學(xué)者研究表明化合物9 2，5-dimethylphenol 具有抗病毒、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫能等活性［15］?；衔?1 robinlin 具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗衰老、降低血管通透性的作用［16］。推測(cè)香豆素、有機(jī)酸和黃酮類(lèi)等成分可能是石草鞋的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。而深入的化學(xué)成分和藥理活性研究將有助于揭示其發(fā)揮臨床療效的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)理。