MicroRNA在治療禽類病毒性感染中的應(yīng)用

高永偉，叢曉楠，孫學(xué)軍，宋 琳，王 珊，洪 煬

（威海市環(huán)翠區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，威海 264200；2.威海市環(huán)翠區(qū)畜牧業(yè)發(fā)展中心，威海264200；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動(dòng)物寄生蟲學(xué)重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室，上海 200241 ）

我國(guó)家禽養(yǎng)殖量在世界排名十分靠前，但是近年來(lái)多發(fā)的禽類疾病已帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。禽類傳染性疾病占禽類疾病的75%，其他病毒性疾病，例如馬立克氏病、禽流感、傳染性法氏囊病、禽白血病、新城疫等，也具有嚴(yán)重危害性。

microRNA（miRNA）作為一類短小RNA，能夠在調(diào)控動(dòng)物機(jī)體免疫反應(yīng)和抗病毒的過(guò)程中起關(guān)鍵作用，在動(dòng)物胚胎、肌肉和生殖等的早期發(fā)育，細(xì)胞增殖、分化、凋亡以及免疫系統(tǒng)應(yīng)答等一系列過(guò)程中的作用已被廣泛證實(shí)，新的研究熱點(diǎn)轉(zhuǎn)變?yōu)閺膍iRNA調(diào)控機(jī)制入手探究病毒的致病機(jī)理。雞馬立克氏病毒等皰疹病毒已成為研究miRNA參與病毒疾病作用的重要模型[1]，禽類病毒與miRNA相互調(diào)控的作用機(jī)制也同樣受到關(guān)注[2]。本文對(duì)近年來(lái)主要禽源病毒和miRNA相互作用的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述，希望為后續(xù)的深入研究提供參考。

1 miRNA簡(jiǎn)介

miRNA是一類內(nèi)源性非編碼單鏈小RNA，長(zhǎng)約21個(gè)核苷酸并高度保守。1993年lee等首次發(fā)現(xiàn)秀麗新小桿線蟲（C. elegants）中的lin-4基因能夠編碼一組小RNA，其作用是抑制靶mRNA的翻譯過(guò)程，通過(guò)與其非翻譯區(qū)（3'UTR）互補(bǔ)配對(duì)實(shí)現(xiàn)[3]。將這一類非編碼的小RNA命名為miRNA。成熟的miRNA 通常都具有相似特征：在真核細(xì)胞生物中廣泛存在，且不具有蛋白質(zhì)的編碼功能；5'端含有 1 個(gè)磷酸基團(tuán)，而 3'端為羥基，這是其最顯著的標(biāo)志，也是其他長(zhǎng)度相同的功能 RNA 降解片段與miRNA的關(guān)鍵區(qū)分點(diǎn)；可與其上游或下游的序列通過(guò)不完全配對(duì)形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。

成熟的miRNA與相應(yīng)序列按照互補(bǔ)配對(duì)原則結(jié)合成雙螺旋結(jié)構(gòu)，隨后雙螺旋解旋成兩條單鏈，其中一條與RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合體（RNA-induced silencing complex，RISC）結(jié)合，形成能夠與目標(biāo)mRNA特異性結(jié)合的非對(duì)稱RISC復(fù)合物，通過(guò)引起靶mRNA的降解而實(shí)現(xiàn)調(diào)控。通常來(lái)說(shuō)，成熟的miRNA發(fā)揮調(diào)控作用，主要是依靠與靶mRNA 3'端非編碼區(qū)的部分堿基以完全或不完全互補(bǔ)配對(duì)的方式實(shí)現(xiàn)。miRNA依靠?jī)煞N不同的機(jī)制：靶基因表達(dá)的下調(diào)通過(guò)mRNA的剪切和翻譯抑制指導(dǎo)RISC 復(fù)合物而實(shí)現(xiàn)。目前普遍支持，miRNA沉默靶基因的機(jī)制取決于二者序列的互補(bǔ)程度。若靶mRNA與miRNA形成的堿基配對(duì)不嚴(yán)格，則mRNA的翻譯受到抑制，且不誘導(dǎo)mRNA的降解；若形成完全互補(bǔ)的堿基配對(duì)，miRNA則不再抑制翻譯，而是通過(guò)進(jìn)入RNAi途徑來(lái)調(diào)控靶mRNA的降解。多數(shù)植物miRNA與靶基因的結(jié)合是幾乎完全互補(bǔ)的，互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)不僅僅存在于3'非翻譯區(qū)，而是遍布整個(gè)mRNA。對(duì)動(dòng)物而言，更常見(jiàn)的是miRNA引導(dǎo)的mRNA翻譯抑制，反映出動(dòng)物體內(nèi)的miRNA與靶mRNA序列的互補(bǔ)程度多為不完全互補(bǔ)。一般認(rèn)為在病毒感染細(xì)胞的過(guò)程中，宿主細(xì)胞編碼miRNA與病毒的靶mRNA結(jié)合，滅活RNA病毒，發(fā)揮潛在的抗病毒作用。Ahanda等[4]發(fā)現(xiàn)病毒感染后某些miRNA表達(dá)的變化，與編碼蛋白mRNA的表達(dá)特征相一致，暗示miRNA可能通過(guò)免疫功能發(fā)揮其抗病毒作用。病毒寄生的生活方式，雖影響了其能力的進(jìn)化，但也使其具有調(diào)控宿主細(xì)胞環(huán)境的作用。病毒可以調(diào)控自身和宿主基因表達(dá)來(lái)優(yōu)化感染，其中包括編碼miRNA攻擊宿主細(xì)胞等方式。比如，在感染和復(fù)制的過(guò)程中，禽類皰疹病毒調(diào)控自身的miRNA表達(dá)，禽白血病病毒則改變宿主細(xì)胞的miRNA，以直接或間接的方式參與病毒的復(fù)制、增殖、感染與潛伏[5]。由此可見(jiàn)，雞miRNA在調(diào)控宿主和病毒間的相互作用中起著直接或間接的作用。

2 主要禽類病毒病的miRNA研究

2.1 馬立克氏病馬立克氏?。∕arek’s disease，MD）是一種由于感染皰疹病毒引起的，具有高度接觸傳染性的雞腫瘤性疾病。馬立克氏病病毒（Marek’s disease virus，MDV）具有外周神經(jīng)嗜性，MD的主要病理變化為淋巴組織增生和腫瘤形成。

MDV屬于皰疹病毒科、馬立克病毒屬，該屬包括有致瘤性的強(qiáng)毒分離株及其致弱毒株，MDV-1（Gallid Hepersvirus-2）；無(wú)致病性的毒株，MDV-2（Gallid Hepersvirus-3）；火雞皰疹病毒，MDV-3（MeHV-1）。其中只有 MDV-1 感染雞，其他兩種均不致病[6]。

截至目前，miRBase數(shù)據(jù)庫(kù)已記錄的病毒miRNAs有406個(gè)，其中皰疹病毒編碼的miRNAs392個(gè)，共有90個(gè)miRNAs由3種MDV編碼。2006年首次在MDV-1強(qiáng)毒株RB1B感染的雞胚成纖維（chicken embryo fibroldast，CEF）細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)MDV編碼的miRNAs[7]，目前MDV-1編碼的pre-miRNAs已經(jīng)鑒定出14個(gè)，形成3個(gè)明顯的miRNA簇。一個(gè)位于原癌基因meq附近，一個(gè)存在于潛伏相關(guān)轉(zhuǎn)錄物本（latency associated transcript，LAT）內(nèi)部，最后一個(gè)由mdv1-miR-M1、mdv1-miR-M11和mdv1-miR-M32構(gòu)成基因簇，位于前兩個(gè)基因簇之間。在MDV-1與MDV-2共感染的MSB-1細(xì)胞中共鑒定出17個(gè)pre-miRNAs[8]。后期又發(fā)現(xiàn)mdv2-miR-M32，現(xiàn)共鑒定出18個(gè)pre-miRNAs，但是MDV-2編碼的miRNAs功能尚不清楚。

MDV-1編碼miRNAs中以MDV-miR-M4的報(bào)道較多，該分子位于 Meq基因簇，并同源于宿主原癌基因miR-155[10]。在基因和蛋白水平均已被證實(shí)，MDV-miR-M4是MD腫瘤中表達(dá)水平最高的病毒miRNA[7]。如果RB1B毒株的MDV1-miR-M4突變，該毒株則不能將感染的T細(xì)胞轉(zhuǎn)化[11]，由此證明MDV的致瘤性與MDV1-miR-M4密切相關(guān)。另外，MDV1-miR-M4 可靶向與病毒形成有關(guān)的基因UL28 及 UL32，并參與調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞增殖、分化和特異性轉(zhuǎn)錄。

MDV1感染過(guò)程中高表達(dá)的MDV1-miR-M4-5p，是一種miR-155功能同源物。miR-155是一類已知的原癌基因，在腎癌[12]、白血病[13]、淋巴癌[14]等惡性腫瘤致癌過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。因此人們認(rèn)為MDV1-miR-M4-5p在MDV的致瘤過(guò)程中也應(yīng)該發(fā)揮著非常重要的作用。早期研究發(fā)現(xiàn)MDV1-miR-M4-5p在病毒感染后18 d即可被檢測(cè)到，并且貫穿整個(gè)感染過(guò)程[15]。研究發(fā)現(xiàn)單個(gè)MDV1-miR-M4 分子和超強(qiáng)（very virulent，vv）毒株GX0101 的整個(gè)Meq基因簇被敲除后，突變毒株的致瘤率從100%分別降低到18%和 4%[16]。

研究表明MDV編碼的miRNAs與病毒的潛伏、復(fù)制及腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而MDV感染所引起的腫瘤也可用疫苗加以預(yù)防，因此MDV可以作為在腫瘤調(diào)控、遺傳學(xué)及免疫學(xué)等領(lǐng)域研究miRNA功能的良好模型。

2.2 傳染性法氏囊病傳染性法氏囊?。╥nfectious bursal disease，IBD）作為一種攻擊雛雞免疫系統(tǒng)的重要疾病，由傳染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）引起，以損害法氏囊中的淋巴細(xì)胞，引起免疫抑制和增加對(duì)其他病原體的易感性為特征，被稱為“世界三大禽病”之一。IBDV屬于雙RNA病毒科、禽雙RNA病毒屬，包括血清Ⅰ型和Ⅱ型[17]。IBDV的整個(gè)基因組由A和B兩個(gè)部分組成，共表達(dá)5種聚蛋白，依次命名為VP1～5。其中VP2～5由A編碼，VP1則由B編碼。VP1具有多聚酶和加帽酶活性。VP2則是病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，其中還包含IBDV 的主要抗原決定簇，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。近年來(lái)鴨傳染性法氏囊病作為一種鴨的急性傳染病開始發(fā)生和流行[18]，而雞傳染性法氏囊病依舊廣泛發(fā)生和流行，因此出現(xiàn)IBDV不斷擴(kuò)散而導(dǎo)致的雞鴨之間的相互感染。同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)與IBD疫場(chǎng)密切接觸的麻雀、鴿子、云雀等也存在著IBDV感染[19]。王永山等[20]報(bào)道鴨、鵝、麻雀等禽類血清IBDV陽(yáng)性率分別為95.5%、9.4%、24%，說(shuō)明上述幾種禽類已經(jīng)成為IBDV攜帶者或傳染源，其中鴨最易感染。

禽類感染IBDV后，會(huì)出現(xiàn)急慢性炎性損傷、免疫抑制和細(xì)胞凋亡。感染1～3 d后，淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡、變性、裂解和壞死，細(xì)胞因子在感染的法氏囊中大量釋放，巨噬細(xì)胞增加。B淋巴細(xì)胞的急劇減少伴隨著劇烈的炎癥反應(yīng)，繼發(fā)免疫抑制，使機(jī)體對(duì)其他病原體的易感性增強(qiáng)。此外，IBDV還可以誘導(dǎo)多種細(xì)胞的凋亡和內(nèi)源性生化反應(yīng)，例如非洲綠猴腎（Vero）細(xì)胞、外周血淋巴（peripheral blood lymphocyte，PBL）、法氏囊淋巴細(xì)胞、雞胚成纖維細(xì)胞（chicken embryo fibroblast，CEF）等[20]。

目前通過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)差異的細(xì)胞內(nèi)源性miRNA來(lái)調(diào)控IBDV編碼的研究報(bào)道雖少，但人們已經(jīng)利用miRNA干擾病毒復(fù)制、激發(fā)干擾素介導(dǎo)的抗病毒活性，以及探索影響侵染病毒基因的表達(dá)的原理和基因重組技術(shù)來(lái)對(duì)抗IBDV感染[21]。

肖琛聞等[22]、全榮等[23]研究發(fā)現(xiàn)，IBDV感染的CEF細(xì)胞、B細(xì)胞中有多個(gè)內(nèi)源性miRNA表達(dá)發(fā)生顯著變化，且靶基因主要富集在細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程、代謝調(diào)節(jié)以及MAPK、Wnt等信號(hào)通路上，提示IBDV感染引起的宿主miRNAs表達(dá)情況改變，可能通過(guò)多條途徑參與病毒致病以及抗病毒過(guò)程實(shí)現(xiàn)。歐陽(yáng)偉等[24]研究發(fā)現(xiàn)重組慢病毒pri-gga-miRNA-21感染雞DF-1細(xì)胞，抑制IBDV復(fù)制的功能，是通過(guò)顯著抑制VP1基因翻譯實(shí)現(xiàn)的。雞熱休克蛋白90（chicken heat-shock protein 90，cHsp90）是IBDV的一個(gè)功能型組分，用以感染細(xì)胞受體[25]，因而具有-cHsp90α抗性的miRNA能夠靶向宿主細(xì)胞內(nèi)源蛋白基因，進(jìn)而抑制IBDV致病性[26]，擁有顯著的抗病毒效果。

由此可見(jiàn)，利用miRNA靶向宿主細(xì)胞，或依靠基因重組技術(shù)調(diào)控IBDV相關(guān)基因，能夠有效抑制IBDV的致病能力，為 IBDV的防治提供了研究思路與方向。

2.3 禽白血病禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）屬于反轉(zhuǎn)錄病毒科、α-反轉(zhuǎn)錄病毒屬，根據(jù)囊膜蛋白的差異將其分為A、B、C、D、E、J六個(gè)亞群。其中，A、B、J亞群是在雞群中引發(fā)腫瘤的主要外源性ALV。E亞群病毒普遍存在于雞群中，是無(wú)致瘤性的內(nèi)源性ALV，對(duì)雞群影響小。研究顯示，雞是ALV的自然宿主，目前還沒(méi)有禽白血病出現(xiàn)在鴨群中的報(bào)道。但ALV的核酸也廣泛出現(xiàn)在鴨群中，并呈現(xiàn)出與雞具有不同分子生態(tài)的白血病病毒核酸，多為內(nèi)源性E亞群，但鴨群中是否存在外源性白血病病毒仍然需要進(jìn)一步研究[27]。J亞群禽白血病是由J亞群禽白血病病毒（sub-group J Avian leukosis virus，ALV-J）引起的腫瘤性疾病，ALV-J屬于禽肉瘤病毒群（Avian sarcoma viruses，ASVs）、反轉(zhuǎn)錄病毒科（Retroviridae）、甲型反轉(zhuǎn)錄病毒屬（Alpharetrovirus）[28]。ALV-J感染是我國(guó)禽業(yè)生產(chǎn)中流行和爆發(fā)的常見(jiàn)疫病之一。骨髓細(xì)胞性白血病（myeloid leukosis，ML）或稱骨髓細(xì)胞瘤病（myeloey tomatosis）也由ALV-J引起。自2009年初以來(lái)，湖北、山東等省疑似病例頻發(fā)，雞群ALV感染率高達(dá)60%，死亡率高達(dá)50%以上，但尚未研制出防治效果好的疫苗。

生物信息學(xué)分析顯示，存在可以靶向5'UTR的4個(gè)候選miRNAs分子，在特異miRNA抑制子分別抑制候選miRNAs分子時(shí)，發(fā)現(xiàn)psi-5'UTR被抑制的活性可以在抑制gga-miR-1650時(shí)被顯著還原（P=0.0014），但gga-miR-1650的過(guò)表達(dá)則使psi-5'UTR的活性受到顯著抑制。研究發(fā)現(xiàn)，在ggamiR-1650與5'UTR的結(jié)合過(guò)程中發(fā)揮作用的包括gga-miR-1650的種子區(qū)和非種子區(qū)，gga-miR-1650的過(guò)表達(dá)抑制了含有其靶點(diǎn)的ALV-J的復(fù)制。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)ALV-J毒株中保守存在gga-miR-1650的靶點(diǎn)序列，驗(yàn)證了ALV-J各流行毒株的復(fù)制可被gga-miR-1650抑制，研究結(jié)果為ALV-J的防控和凈化提供了基礎(chǔ)[29]。

ALV-J感染誘導(dǎo)宿主細(xì)胞內(nèi)源miRNA表達(dá)變化已經(jīng)成為ALV-J致瘤機(jī)制研究新思路。研究發(fā)現(xiàn)ALV-J感染雞的肝臟腫瘤細(xì)胞中，4個(gè)miRNA表達(dá)發(fā)生了顯著改變，生物信息學(xué)分析表明腫瘤形成的信號(hào)通路，如MAPK和Wnt信號(hào)通路，可能是這些差異表達(dá) miRNA參與的結(jié)果。研究人員在ALV-J感染的10周齡雞肝臟中發(fā)現(xiàn)了12個(gè)重要的miRNAs，這些miRNAs被鑒定與雞J亞群禽白血病腫瘤的形成相關(guān)，其中g(shù)ga-let-7b/7i、gga-miR-125b、ggamiR-221/222和gga-miR-375在J亞群禽白血病腫瘤形成過(guò)程中起抑癌基因的作用，gga-miR-1456、gga-miR-1790和gga-miR-2127起致癌基因的作用[22]。利用雙鏈RNA引起同源miRNA降解，從而導(dǎo)致基因表達(dá)沉默的現(xiàn)象，即RNA干擾，可以更好地減輕ALV-J的致病效應(yīng)[30]。

目前在ALV-J防治方向上，miRNA原理和重組技術(shù)研究有了較好的突破。研究人員構(gòu)建了靶向env基因保守序列并轉(zhuǎn)染DF-1細(xì)胞的miRNA重組真核表達(dá)載體，發(fā)現(xiàn)感染細(xì)胞的ALV-J受到了有效的抑制，提示miRNA重組技術(shù)可以作為新的治療方向[31]。

2.4 高致病性禽流感禽流感是由A型流感病毒引起的以呼吸系統(tǒng)癥狀或嚴(yán)重的全身性、出血性、敗血性癥狀為主要表現(xiàn)的急性和高度接觸性禽類傳染性疾病。自2004年首例禽流感在中國(guó)大陸暴發(fā)以來(lái)，禽流感疫情就成為我國(guó)家養(yǎng)禽類養(yǎng)殖的最大威脅。高致病性禽流感（highly pathogenic Avian influenza，HPAI）是由正粘病毒科、A型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）H5或H7高致病力亞型毒株（以H5N1和H7N1為代表）引起的，占我國(guó)禽流感疫情的90%以上[32]，發(fā)病率和死亡率都很高，被列為A類動(dòng)物疫情。HPAI最初以雞為主，并且過(guò)去已經(jīng)分離到多株對(duì)鴨致死率為零而對(duì)雞和火雞達(dá)100%的禽流感病毒。但從2000年開始，中國(guó)部分地區(qū)的鴨、鵝、鵪鶉等禽類出現(xiàn)了感染，表現(xiàn)為全身器官和組織的嚴(yán)重出血[33]。最近研究顯示，AIV可在雞和鴨群中相互傳遞，最重要的是鴨可長(zhǎng)期攜帶原始或發(fā)生了多次重組的AIV，這使得看似健康的鴨體內(nèi)隱藏有不斷變異的 H5N1 AIV，并越來(lái)越具有致命性[34]。

A型流感病毒在病毒復(fù)制和致病過(guò)程中發(fā)揮主要作用的是基因組編碼的PB1、PB1-F2和N40蛋白，靶向這幾種蛋白是HPAI的主要治療方法。研究人員篩選300個(gè)在雞肺臟中表達(dá)的miRNA發(fā)現(xiàn)，gamiR-133c、gga-miR-146c和gga-miR-1710 能夠靶向這3種蛋白基因，從而推測(cè)以上3種基因在HPAI的防治中存在參考應(yīng)用價(jià)值[35]。miRNA通過(guò)與靶標(biāo)基因不同程度的結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后以不同方式發(fā)揮負(fù)調(diào)控作用。轉(zhuǎn)錄因子在轉(zhuǎn)錄的不同階段，與miRNA共同調(diào)控以促進(jìn)或抑制基因的轉(zhuǎn)錄與翻譯過(guò)程。因此，miRNA和轉(zhuǎn)錄因子的共調(diào)控作用在探索HPAI的發(fā)生中十分重要，尤其是在疾病的預(yù)防和治療方面[36]。

研究發(fā)現(xiàn)蛋雞和肉雞在AIV感染后miRNA表達(dá)存在差異，感染組肉雞肺臟中具有更多的miRNA（108種miRNA）高表達(dá)，推測(cè)肉雞中可能存在不同的miRNA調(diào)控機(jī)制。李澤中等[37]應(yīng)用高通量測(cè)序技術(shù)和生物信息學(xué)方法，分別分析了感染鴨感染高致病性禽流感病毒（highly pathogenic Avian influenza virus，HPAIV）后的雞與鴨的脾臟、胸腺和法氏囊的miRNA。結(jié)果顯示，雞和鴨免疫器官的保守miRNA在表達(dá)水平上具有較大的組織特異性差異。鴨感染HPAIV后擁有低于雞的免疫器官差異表達(dá)的miRNA，感染雞與SPF鴨的脾臟和法氏囊的miRNA表達(dá)的相關(guān)程度較高，而胸腺的表達(dá)差異則較大，推測(cè)雞胸腺的功能在感染HPAIV后受到抑制。靶基因預(yù)測(cè)技術(shù)和miRNA表達(dá)分析的應(yīng)用，以及通過(guò)對(duì)鴨脾臟的數(shù)字基因表達(dá)譜的分析，構(gòu)建了雞、鴨miRNA的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，同時(shí)研究了免疫相關(guān)通路在鴨感染HPAIV時(shí)調(diào)控上的變化，上調(diào)的基因富集在JAK-STAT、WNT、RIG-like和Toll-like等通路。

研究AIV感染與miRNA間的調(diào)控關(guān)系，幫助理解AIV與miRNA在致病宿主細(xì)胞上的關(guān)系，為AIV防治新思路的開拓提供了重要的理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。

2.5 新城疫新城疫（newcastle disease，ND）是一種急性、高度接觸性禽類傳染病，由屬于副黏病毒科、副黏病毒亞科的新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起。NDV為單鏈負(fù)股RNA病毒，包括強(qiáng)毒株和弱毒株兩類。ND根據(jù)臨床發(fā)病特點(diǎn)分為典型和非典型兩種，被國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生組織列為A類動(dòng)物傳染病。自1926 年至今，世界上共發(fā)生過(guò)4次廣泛流行的NDV，且每次流行都有新的基因型出現(xiàn)，表明疫苗的選擇壓力可能會(huì)誘發(fā)NDV產(chǎn)生抗原變異[38]。ND主要危害野雞、珠雞、火雞、鴨、鵝、麻雀等禽類，可引起消化道和呼吸道的嚴(yán)重感染，并具有急性、高度致死性特征，甚至導(dǎo)致雞全群死亡[39]。ND的預(yù)防策略主要是通過(guò)疫苗接種，可基本保證避免大規(guī)模流行的發(fā)生，但隨著非典型新城疫的出現(xiàn)和疫苗接種強(qiáng)度和密度的增加，出現(xiàn)了以地區(qū)散發(fā)性和非典型性為特征的新的流行特點(diǎn)[40]，使得免疫失敗常常發(fā)生，急需研究出新的防治手段。

雙鏈RNA誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄后基因特異性沉默機(jī)制可針對(duì)生物體對(duì)抗外來(lái)基因入侵進(jìn)行保護(hù)，廣泛存在于從低等原核生物到植物、真菌、無(wú)脊椎動(dòng)物的雙鏈RNA中。選擇Psi-L3、Psi-L7和Psi-N2三個(gè)對(duì)NDV抑制作用比較好的靶位點(diǎn)，依據(jù)Invitrogen公司提供的miRNA設(shè)計(jì)原則，設(shè)計(jì)合成了3對(duì)克隆到pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR載體上的寡聚核苷酸,且均含有miRNA序列，同時(shí)以此為基礎(chǔ)構(gòu)建miRNA串聯(lián)表達(dá)質(zhì)粒P-N2-L7-L3。研究結(jié)果表明串聯(lián)表達(dá)的miRNA能協(xié)同抑制NDV的復(fù)制[41]。

滿朝來(lái)等[8]發(fā)現(xiàn)利用NDV La Sota弱毒株疫苗免疫7日齡海蘭褐雛雞14 d后，pri-miR-181b1的表達(dá)活性在除雛雞法氏囊以外的免疫組織中均未上調(diào)，同時(shí)miR-181b1已被證實(shí)在NK細(xì)胞（natural killer cell）發(fā)育和功能活性上起促進(jìn)作用[41]，因此推測(cè)新城疫弱毒株疫苗參與免疫應(yīng)答的機(jī)制，可能與誘導(dǎo)免疫相關(guān)的miRNA有關(guān)聯(lián)。

研究NDV感染與miRNA串聯(lián)表達(dá)的調(diào)控關(guān)系，可為在疫苗失效條件下為NDV防治提供新的思路。

3 小結(jié)與展望

非編碼RNA的研究近年越來(lái)越受到重視，同時(shí)也取得了較大進(jìn)展。雞因?yàn)槠浜?jiǎn)單的基因背景和便于操作等優(yōu)勢(shì)成為現(xiàn)代分子生物學(xué)研究的重要模式動(dòng)物之一。當(dāng)前已被廣泛研究的主要是禽類皰疹病毒，它可通過(guò)感染宿主細(xì)胞來(lái)改變miRNA的表達(dá)活性，主要包括細(xì)胞內(nèi)源miRNA、編碼基因或病毒編碼miRNA。其他病毒如何影響miRNA還不甚了解，具體的致病機(jī)制和治療預(yù)防仍需要深入研究。相信“禽類病毒-miRNA-細(xì)胞”這一機(jī)制模型將會(huì)給人們帶來(lái)更多福音。