微生物檢驗關(guān)鍵程序及操作要點

孫夢鴿 陳湘

（上海市金山區(qū)眾仁老年護理醫(yī)院 上海 201501）

1 微生物檢驗關(guān)鍵程序

1.1 樣品采集

在微生物的樣品采集過程中， 應(yīng)當(dāng)保證全程無菌操作，防止由于外界因素造成的樣品污染。 同時，采集的樣品應(yīng)當(dāng)確保具有代表性和隨機性，并以檢驗?zāi)康摹⑻匦砸约皺z驗方法等科學(xué)確定采樣方案。采集的樣品需要詳細(xì)記錄其樣品名、來源、采集時間和地點、保存方法、采樣人員及批號等信息，并在完成后立即送往檢驗機構(gòu)。為了防止樣品性質(zhì)和微生物數(shù)量出現(xiàn)變化，必須采取相應(yīng)措施，保證樣品在運輸過程中沒有發(fā)生改變，從而保證樣品接近采集狀態(tài)。

1.2 待檢樣品的預(yù)處理

液體樣品的預(yù)處理，應(yīng)當(dāng)使用無菌吸管吸取一定量混合均勻的樣品，并通過無菌操作裝入內(nèi)有無菌稀釋液和適量玻璃珠的稀釋瓶中，用力振蕩混合均勻，或采用漩渦混勻器混勻[1]。

1.3 樣品的檢驗

進行樣品檢驗時，必須保證所使用的器具及環(huán)境是無菌的。選擇微生物的檢驗方法時，應(yīng)當(dāng)結(jié)合樣品種類、檢驗?zāi)康募跋嚓P(guān)要求科學(xué)選擇，以國家標(biāo)準(zhǔn)為首選，以不同樣品的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)為參考[2]。檢驗過程中，應(yīng)當(dāng)設(shè)立標(biāo)準(zhǔn)對照組進行質(zhì)量控制，若是使用微生物生化鑒定儀、PCR 儀等大型儀器，則需要科學(xué)制定一系列的調(diào)試、驗收、使用、記錄、維修和保養(yǎng)等管理制度，并定期進行儀器設(shè)備的校準(zhǔn)等工作，從而保證儀器設(shè)備的精準(zhǔn)性和靈敏性。

1.4 原始記錄及檢驗結(jié)果報告

微生物檢驗原始記錄是對檢驗相關(guān)內(nèi)容的數(shù)據(jù)信息和現(xiàn)象等內(nèi)容的全過程記錄。 原始記錄的內(nèi)容包括樣品名稱、編號；檢驗時間；檢驗的項目、方法及依據(jù)；檢驗的條件（儀器設(shè)備、溫度、濕度等）；檢驗步驟；檢驗結(jié)果；檢驗人及復(fù)核人簽字等。 應(yīng)當(dāng)保證原始記錄的填寫隨著檢驗過程進行，不能以轉(zhuǎn)抄的方式進行，保證原始記錄的可靠性。若是填寫原始記錄出現(xiàn)手誤，可以使用“杠改法”進行改正，即劃一條橫線覆蓋原數(shù)據(jù)，在旁邊標(biāo)明更正數(shù)據(jù)，再由更改人簽章[3]。 微生物檢驗過程結(jié)束后，應(yīng)當(dāng)由檢驗實驗室客觀、清晰地將檢驗結(jié)果上報，同時要保證檢驗報告符合格式規(guī)范，并保證數(shù)據(jù)結(jié)果無誤、使用詞匯確切、結(jié)果清楚明確等。

2 無菌操作注意事項

無菌是指保證檢驗環(huán)境中不存在維持生命活動的營養(yǎng)細(xì)胞的狀態(tài)， 是指為了防止微生物污染或誤入人體，而在超凈臺、無菌室使用無菌器具進行操作的技術(shù)。無菌操作是微生物檢驗中的重要理念，需要確保檢測設(shè)備及檢測場所無菌， 才能保證樣品不被污染，使檢驗結(jié)果安全可靠。無菌操作的展開需要注意以下事項：首先，無菌操作必須嚴(yán)格按照微生物檢驗相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行，一般樣品需要保證操作區(qū)域干凈，即在相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)的檢測實驗室、工作臺上進行；對于病原微生物的分離及檢驗等操作，則需要在二級生物實驗室進行。保證無菌室的清潔，需要定期對無菌室墻面、工作臺進行消毒，并在使用前用紫外線燈光照射30 min，定期計數(shù)實驗室沉降菌，并檢查微生物的繁殖情況[4]；另外，在進行無菌操作時，操作人員不得在無菌室談笑，并避免頻繁移動。在無菌室進行相關(guān)操作前， 需要檢測人員嚴(yán)格采用五步洗手法進行凈手操作， 并在緩沖間將工作服、 工作帽以及工作鞋換好，否則不得進入。 其次，檢驗人員打開微生物樣品時，要與其保持一定距離，盡可能地減少微生物樣品的暴露時間。在檢驗過程中，使用的器具必須保證消毒、無菌，取樣時檢驗人員的身體部位不能停留于樣品上方，已使用的樣品不能放回原處。微生物檢驗過程中，操作速度應(yīng)當(dāng)保持在一定范圍內(nèi)，不能過快，也不能過慢。 再次，在微生物檢驗樣品取出之前，需要使用酒精棉球?qū)ζ靠?、袋口擦拭消毒，接種液體培養(yǎng)物時防止菌液滴濺到其他器皿或工作臺上，防止發(fā)生污染[5]。若已經(jīng)滴濺到，也應(yīng)當(dāng)利用酒精進行滅菌，并使用消毒液進行擦拭。 使用過的玻片、 吸管等器具，在使用完成后都需要進行消毒。 最后，應(yīng)當(dāng)將無菌物品分類存放，并定期進行檢查和消毒，且不能與未滅菌的物品混合放置。

3 無菌操作技術(shù)分析

3.1 顯微鏡技術(shù)

微生物是難以直接用肉眼觀察的生物，需要使用顯微鏡進行微生物的觀察和檢驗等工作。 顯微鏡技術(shù)的應(yīng)用需要與染色、涂片等技術(shù)的結(jié)合。使用顯微鏡技術(shù)也需要在無菌環(huán)境下進行， 防止微生物玻片受到雜菌的污染，從而影響觀察結(jié)果。 因此，顯微鏡技術(shù)的應(yīng)用過程中，需要注意以下幾點：首先，平板培養(yǎng)物的觀察過程中不能進行開蓋觀察，只能開蓋檢查微生物檢驗結(jié)果；其次，在涂片操作過程中，需要使用移動架進行玻片的移動等操作，不能直接用手碰觸，防止出現(xiàn)細(xì)菌感染；最后，對于使用過的玻片，必須嚴(yán)格進行消毒。

3.2 純種分離技術(shù)

為了鑒定微生物種群，必須對其進行分離操作，從而獲得具體菌株的純培養(yǎng)物，該過程被稱為微生物分離和純化。一般情況下，可以根據(jù)微生物的生長特點，設(shè)計合適的培養(yǎng)基，使其在適宜的環(huán)境下進行生長和繁殖， 或者通過加入抑制其他生物生長的抑制因素，使其他雜菌被淘汰。 利用各種稀釋方法，最終達到形成單菌種培養(yǎng)基的目的。 形成單菌種培養(yǎng)基后，還需要完成后續(xù)的分離、純化和鑒定，才能保證形成純培養(yǎng)物。 純種分離技術(shù)主要包括平板劃線分離法、稀釋混合倒平板法、稀釋涂布平板法等，這些方法都具有操作簡單、分離效果良好的特點。

3.3 純種培養(yǎng)技術(shù)

為了實現(xiàn)微生物的純種培養(yǎng)，通常會采用接種環(huán)接種法實現(xiàn)微生物的菌種移接。 由于環(huán)境中存在各種各樣的雜菌，一旦打開微生物培養(yǎng)器皿，就很有可能導(dǎo)致培養(yǎng)微生物被污染[6]。 因此，菌種移接過程中必須保證其處于無菌環(huán)境， 且要使用清潔的無菌器具進行操作。微生物的純種培養(yǎng)過程中，一旦由于操作不規(guī)范造成污染，會失去微生物檢驗工作的意義，對后續(xù)工作也會產(chǎn)生不利影響。 因此，應(yīng)當(dāng)充分掌握各種無菌操作技術(shù)，并保證無菌的工作環(huán)境，才能更好地開展純種培養(yǎng)技術(shù)， 為微生物檢驗工作提供優(yōu)勢。

4 結(jié)語

綜上所述，在進行微生物檢驗工作中，必須保證各項操作符合規(guī)范， 保持工作環(huán)境及實驗器具的無菌性，從而有效提高檢驗結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。