外周血T淋巴細胞亞群和維生素D水平與嬰幼兒反復喘息及哮喘預測指數(shù)的關(guān)系研究

田軍，高志剛，沈佩芳，俞漣芳，潘開宇，許凌帆

（杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院（杭州師范大學附屬蕭山第一醫(yī)院），浙江 杭州 311200）

嬰幼兒反復性咳喘常見于5歲以下兒童，是較為常見的呼吸系統(tǒng)疾病，如果治療不及時，容易對嬰幼兒的身心健康以及生長發(fā)育造成嚴重影響，同時，給社會和家庭帶來嚴重的經(jīng)濟和精神負擔[1]。流行病學統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)[2]，目前，兒童哮喘發(fā)病率呈現(xiàn)驚人的增長幅度，50%的兒童哮喘在嬰幼兒期發(fā)作，有研究報道指出[3]，3歲以下嬰幼兒的急性哮喘得到有效控制，可顯著降低成年哮喘的發(fā)病情況。兒童持續(xù)性哮喘疾病的發(fā)作主要是由于大量炎癥因子以及巨噬細胞的持續(xù)作用，引起氣道高反應性，由于此病具有較強非特異性，所以，經(jīng)常造成患兒的抗治療性，最終導致持續(xù)性咳喘發(fā)生。哮喘的發(fā)病與患者的細胞免疫狀態(tài)密切相關(guān)[4]，血液25羥基維生素D3、免疫球蛋白以及外周血T淋巴細胞亞群與嬰幼兒反復性咳喘有明顯關(guān)系，咳喘預測指數(shù)是臨床中用來有效預測3歲以內(nèi)兒童持續(xù)性哮喘的有效指標，本文通過對本院反復性咳喘患兒血清25羥基維生素D3、免疫球蛋白以及外周血T淋巴細胞亞群與哮喘預測指數(shù)的相關(guān)性分析，為臨床治療提供科學依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 本研究對象為2015年6月至2017年6月期間本院收治的120例反復性咳喘患者作為研究對象，其中男者59例，女61例，年齡6個月～3歲，平均年齡為（1.92±1.07）歲，平均體質(zhì)量（11.89±2.01）kg，根據(jù)患者的臨床癥狀，依據(jù)反復咳喘診斷標準，將患者分為哮喘預測指數(shù)（asthma predictive index，API）陽性組患者和陰性組患者，其中API陽性組患者57例，API陰性組患者63例，兩組患者的年齡、體質(zhì)量、性別之間的差異無統(tǒng)計學意義，見表1。兩組患者家屬均以簽署了知情同意書，同時本研究通過醫(yī)院倫理學會論證通過。

表1 基線資料Table 1 The baseline information

1.2 納入及排除標準 納入標準：①所有患者均為3歲以下兒童；②所有患者的臨床表現(xiàn)均為反復性咳喘；③所有患者家屬均簽署知情同意書。排除標準：①患者近一個月內(nèi)使用糖皮質(zhì)激素；②先天氣道性疾病導致的高反應性；③患者肺部發(fā)育不良或胸廓畸形導致的咳喘；④惡性呼吸道腫瘤疾病患者。

API陽性判定標準[5]：患者在一年內(nèi)咳喘次數(shù)超過4次，且對患者的病史進行詢問，患者存在1個主要危險因素或者2個次要危險因素。其中，患者主要危險因素包括：①患者直系親屬存在哮喘病史；②患者有明確的特異性皮炎診斷；③明確的呼吸道過敏物質(zhì)。次要危險因素包含：①患者的喘息由過敏性變應原導致；②患者的外周血嗜酸性粒細胞比例大于4%；③患者的喘息與感冒等疾病無關(guān)。

1.3 研究方法 對所有患者進行回顧性調(diào)查，調(diào)查內(nèi)容主要包括家族咳喘史、既往咳喘史、變應原過敏原接觸史、外周血嗜酸性粒細胞比例、潮氣量參數(shù)等，分析患者的API情況。1.4 觀察指標

1.4.1 外周血T細胞亞群與API相關(guān)性分析 分別對API陽性和API陰性組患者進行空腹采血4 ml，將所得樣品在離心（5 000 r/min，20 min）后，對患者樣品進行貝克曼Cyto-FLEX流式細胞儀檢測其CD3+、CD4+及CD8+細胞水平。

1.4.2 血清維生素D水平、血清免疫球蛋白E（IgE）、嗜酸性粒細胞比率（EOS%）與API相關(guān)性分析 分別對API陽性和API陰性組患者進行空腹采血4 ml，將所得樣品在離心（5 000 r/min，20 min）后，對患者樣品進行電化學光法對患者血清25-羥維生素D、IgE、EOS%進行檢測。分析25（OH）D、IgE、EOS%與API相關(guān)性。

1.4.3 潮氣量參數(shù)與API相關(guān)性分析 使用肺功能儀器（德國JEAGER,masterlab pead systerm）對兩組患者的潮氣量參數(shù)進行測定。設(shè)定參數(shù)為：流量參數(shù)0～20 L，感受力總阻力在50 Pa以下，死腔容積為100 ml，分別對兩組患者進行100次測定，將測定中部的20個數(shù)據(jù)作為研究對象。分別對患者的最大呼氣流速時間（TPEF）、總呼氣時間（TE）、最大呼氣量（VPEF）、總呼氣量（VE）、吸氣時間（T1）、呼氣時間（TE）、潮氣量（VT）、呼吸頻率（BF）、每分鐘通氣量（MV）進行對比。

1.4.4 API多因素logistic回歸分析 分別對兩組以上危險因素進行多因素logistic回歸分析，得到影響API患者的主要危險因素。

1.5 統(tǒng)計學方法 所有數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行分析,計量資料的采用“±s”表示,統(tǒng)計分析采用t檢驗，患者的多因素分析采用Logistic回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血T細胞亞群與API相關(guān)性分析 通過對兩組患者的T細胞亞群進行分析，API陽性組患者的CD3+（%）、CD4+（%）、CD8+（%）、CD4+/CD8+水平明顯低于API陰性組，API陽性組患者CD19+（%）水平明顯高于API陰性組，兩組患者之間的差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表2。

表2 外周血T細胞亞群與API相關(guān)性分析Table 2 Analysis of the correlation between T cell subsets in peripheral blood andAPI

2.2 血清維生素D水平、IgE、EOS%與API相關(guān)性分析 通過分析，API陽性組患者的IgE、EOS%水平明顯高于API陰性組患者，API陽性組患者的25（OH）D3水平明顯低于API陰性組患者，兩組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），見表3。

表3 血清維生素D水平、血清免疫球蛋白E（IgE）、嗜酸性粒細胞比率（EOS%）與API相關(guān)性分析Table 3 Correlation analysis between serum vitamin D level,serum immunoglobulin E(IgE),eosinophil ratio(EOS%)andAPI

2.3 潮氣量參數(shù)與API相關(guān)性分析 通過分析，API陽性組患者的TPEF/TE、VPEF/VE、T1水平明顯低于API陰性組患者，API陽性組患者的BF、MV水平明顯高于API陰性組患者，兩組患者之間的差異存在統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。兩組患者TE、VT差異無統(tǒng)計學意義，見表4。

2.4 API多因素logistic回歸分析 通過對患者的API多因素logistic回歸分析，CD4+/CD8+過低、CD19+（%）過高、25（OH）D3過低、IgE過高、EOS%過高、TPEF/TE（%）過低、VPEF/VE（%）過低為影響患者API陽性率的主要危險因素，見表5。

3 討論

臨床上，嬰幼兒反復性咳喘是兒科常見的呼吸道疾病，小兒支氣管哮喘診斷指南中，推薦使用哮喘預測指數(shù)，即API作為咳喘發(fā)作的預測性指標[6]，但是，在實際工作中，API指數(shù)僅僅是定性資料，雖然在一定程度上可以對患者的咳喘情況進行預測分析，但是缺乏客觀性的量化指標支持，所以，此指標在臨床實際工作中的應用常常受到一定的制約[7]。本文通過對反復性咳喘患者的血清維生素D水平、潮氣量相關(guān)參數(shù)、外周血T淋巴細胞分布等情況展開相關(guān)性分析，旨在為臨床反復性咳喘疾病預測提供科學數(shù)據(jù)支持。

表4 潮氣量參數(shù)與API相關(guān)性分析Table 4 Correlation analysis of tidal volume parameters andAPI

表5 API多因素logistic回歸分析Table 5 Multiple factor Logistic regression analysis ofAPI

本研究中，API陽性組患者的CD3+（%）、CD4+（%）、CD8+（%）、CD4+/CD8+水平明顯低于API陰性組，API陽性組患者CD19+（%）水平明顯高于API陰性組，分析認為，兒童咳喘性疾病的主要病因是由自身免疫性反應造成的氣道肥大細胞、T淋巴細胞以及嗜酸性細胞的大量分泌，造成患者的的高氣道反應，進而造成患者的咳喘等臨床癥狀[8]?；颊叩目却膊“l(fā)作的根源在于過敏性氣道炎性反應，在氣道炎性反應的發(fā)展過程中，氣道上皮細胞由于免疫反應造成損傷而脫落、壞死，進而造成患者氣道基膜下膠原物質(zhì)沉積，杯狀細胞和平滑細胞增生肥厚，進而發(fā)展為氣道結(jié)構(gòu)的不可逆結(jié)構(gòu)改變[9]，所以，患者在早期咳喘現(xiàn)象得不到有效控制，其成年后的哮喘發(fā)作于治療將變得更加困難[10]。而從患者的免疫情況分析，隨著患者細胞的脫落以及祈禱的不可逆性改變，患者的自身免疫性反應加劇，CD3+（%）、CD4+（%）、CD8+（%）、CD4+/CD8+水平明顯降低，CD19+水平明顯升高，隨著以上外周血T淋巴細胞水平的紊亂加劇，患者咳喘現(xiàn)象也隨之加劇，患者最終發(fā)展為API陽性[11]。從多因素logistic結(jié)果分析，外周血CD3+（%）、CD4+（%）、CD8+（%）、CD4+/CD8+、CD19+水平的明顯變化，可作為患者API進展的關(guān)鍵影響因素。王進雅等[12]在T淋巴細胞亞群在反復性咳喘患者的分析中，提到，T淋巴細胞亞群水平的紊亂以及失衡對于API陽性患者具有明顯促進作用，與本文研究結(jié)果相互印證。

API陽性組患者的25（OH）D3水平明顯低于API陰性組患者，分析認為，維生素D作為神經(jīng)內(nèi)分泌免疫調(diào)節(jié)激素，在吞噬細胞成熟階段具有重要調(diào)節(jié)作用，通過與細胞內(nèi)源性維生素D受體相結(jié)合，調(diào)節(jié)吞噬細胞的分化[13]。同時，維生素D對于患者上呼吸道黏膜細胞的結(jié)構(gòu)和功能的完整性具有積極的作用，通過增強患者上呼吸道的免疫調(diào)節(jié)功能，減少炎癥反應對患者上呼吸道的內(nèi)皮細胞損傷，進而減輕患者氣道的氣道高反應性，降低患者的咳喘反應。從多因素logistic結(jié)果分析，血清維生素D水平與患者的API陽性情況呈現(xiàn)負相關(guān)，徐艷娜等[13]在對嬰幼兒咳喘疾病與維生素D的相關(guān)性分析中認為，維生素D主要通過影響患者的總免疫球蛋白含量，進而影響疾病進展，與本研究結(jié)果一致。

在對患者的呼吸潮氣量分析中，患者的API陽性組患者的TPEF/TE、VPEF/VE水平明顯低于API陰性組患者，多因素logistic結(jié)果分析顯示，TPEF/TE（%）過低、VPEF/VE（%）過低為影響患者API陽性率的主要危險因素，分析認為，在本次研究中，對患者的潮氣量參數(shù)的分析中，主要采用患者在安靜舒適的呼吸情況進行對比，TPEF/TE、VPEF/VE主要反映患者的支氣管痙攣狀況[14]，與患者的小氣道反應密切相關(guān)，對于咳喘患兒而言，由于患者的生理情況相似，都處于生命周期最為旺盛階段，肺功能的正常與否，對于患者而言，其影響力較為微弱，而對于患者的小氣道反應而言，由于在API陽性患者中，絕大多數(shù)患者的氣道發(fā)生不可逆性改變，同時，由于免疫炎癥反應，氣道內(nèi)大量附著粘性液體，患者的小氣道阻力明顯上升[15]，隨之TPEF/TE、VPEF/VE、T1水平明顯降低。李偉生等[16]在反復性咳喘患者的潮氣量參數(shù)進行分析時指出，TPEF/TE、VPEF/VE與患者的API指數(shù)呈現(xiàn)負相關(guān)，與本研究結(jié)果相互印證。

綜上所述，API陽性患者T淋巴細胞亞群紊亂失調(diào)，血清維生素D降低、潮氣量參數(shù)中TPEF/TE、VPEF/VE水平明顯下降，在反復性咳喘患者診斷中可明顯彌補API指數(shù)定性分析的缺點，通過定量分析，確定患者的診斷以及治療效果，值得臨床治療中關(guān)注。