microRNA在自身免疫及血管炎性疾病發(fā)病中的作用①

羅葉萍 楊作成

(中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院兒科，長沙 410013)

血管炎是指血管壁及血管周圍炎細(xì)胞浸潤，并伴有血管損傷，包括纖維素沉積、膠原纖維變性、內(nèi)皮細(xì)胞及肌細(xì)胞壞死，又稱脈管炎。1947年Li建議將血管炎分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類。原發(fā)性血管炎包括川崎病(Kawasaki disease,KD)等，繼發(fā)性血管炎包括繼發(fā)于結(jié)締組織病的血管炎如：系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus,SLE)、幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(Juvenile idiopathic arthritis,JIA)等[1]。多數(shù)血管炎的病因不清楚，發(fā)病機制尚未完全明了。在其免疫學(xué)和血管功能方面，從細(xì)胞和分子水平的研究已有了很大進(jìn)展。近年來許多研究發(fā)現(xiàn)微小RNA(microRNAs,miRNAs)在部分系統(tǒng)性血管炎的發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用，如SLE、 JIA、 KD和白塞病(Behcet disease,BD)。

miRNAs是一類保守的非編碼小分子RNA，可與mRNA分子3′非翻譯區(qū)(Untranslated regions,UTR)結(jié)合，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)多種蛋白質(zhì)的表達(dá)。在生理過程中，miRNAs參與細(xì)胞的分化、增殖、凋亡和內(nèi)穩(wěn)態(tài)等。在病理條件下，異常表達(dá)的miRNAs通過對基因的調(diào)控參與疾病的致病過程。盡管miRNAs只占人類基因組的3%，卻調(diào)控大約90%的基因[2]。包括與自身免疫和血管內(nèi)皮細(xì)胞功能相關(guān)的基因和信號通路等[3,4]。在過去十多年的研究中，大量的證據(jù)表明miRNAs網(wǎng)絡(luò)表達(dá)紊亂在自身免疫疾病如SLE等的發(fā)病機制中發(fā)揮了重要作用，但miRNAs在大部分系統(tǒng)性血管炎性疾病中的研究仍然處于初級階段，許多miRNA分子的靶基因及其分子作用機制仍不清楚。為進(jìn)一步認(rèn)識miRNAs在自身免疫性疾病及血管炎性疾病發(fā)病中的作用，現(xiàn)對miRNAs參與其中的作用機制綜述如下。

1 miRNA與免疫耐受

miRNAs對機體免疫耐受的形成發(fā)揮著重要作用。在免疫細(xì)胞自身免疫耐受形成過程中，miRNAs參與了與自身免疫相關(guān)的基因和信號通路的調(diào)節(jié)。其中，磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)是miRNA調(diào)控自身免疫的重要信號通路[5]。在B淋巴細(xì)胞的發(fā)育過程中,miRNA-17～92族發(fā)揮了重要作用[6]。研究發(fā)現(xiàn)miRNA-17～92族對B細(xì)胞的作用可通過調(diào)節(jié)PI3K信號通路及其下游多個基因，如促凋亡分子BIM基因[5]。miRNA-17～92族還可靶向PI3K信號通路的負(fù)調(diào)節(jié)因子PTEN基因。抑制B細(xì)胞中miRNA-17～92族的表達(dá)，可使BIM和PTEN蛋白上調(diào)，促進(jìn)B細(xì)胞的凋亡。相反，B細(xì)胞中miRNA-17～92簇表達(dá)上調(diào)時，抑制B細(xì)胞凋亡，使外周自身反應(yīng)性B淋巴細(xì)胞增多，導(dǎo)致自身免疫的發(fā)生[7]。Palacios等[8]發(fā)現(xiàn)在慢性淋巴細(xì)胞白血病(Chronic lymphocytic leukemia,CLL)的部分成熟B細(xì)胞中miRNA-22表達(dá)上調(diào)，使PTEN的表達(dá)降低，PI3K信號通路激活。最近，在白血病相關(guān)的部分研究中還發(fā)現(xiàn)，miRNAs可通過間接調(diào)節(jié)PI3K信號通路調(diào)節(jié)B細(xì)胞抗原受體(B-cell receptor,BCR)，導(dǎo)致自身免疫的發(fā)生。Mraz等[9]研究發(fā)現(xiàn)在CLL細(xì)胞中，miR-150表達(dá)下調(diào)。其作用機制為miR-150可靶向GAB1和FOXP1基因mRNA的3′UTR。銜接蛋白GAB1通過PI3K途徑增強B細(xì)胞的BCR信號，影響免疫耐受的形成[10]。MiRNAs還可通過PI3K信號通路影響T細(xì)胞免疫耐受形成。Henao-Mejia等[11]。研究發(fā)現(xiàn)miR-181缺乏小鼠的胸腺和外周缺乏成熟的自然殺傷T細(xì)胞(Nature kill T cell,NKT)。其機制為miR-181通過調(diào)節(jié)PTEN磷酸酶控制PI3K信號。Treg細(xì)胞介導(dǎo)的外周免疫耐受在阻止自身免疫的發(fā)生中發(fā)揮重要作用。PI3K信號通路異?？捎绊慍D4+T細(xì)胞分化為輔助T(T-helper,Th)細(xì)胞和Treg細(xì)胞[5]。在Treg中激活PI3K信號可阻止Foxp3的表達(dá)[12]。以上研究表明，不同miRNAs可通過PI3K途徑對免疫耐受形成的多個環(huán)節(jié)進(jìn)行調(diào)節(jié)，影響機體免疫耐受的形成。另外，miRNAs還可通過對mTOR、Notch等其他信號通路的調(diào)節(jié)參與免疫耐受。Dicer缺陷型CD4+T細(xì)胞中mTOR信號活性增加，TCR信號的閾值降低，miRNA調(diào)節(jié)T細(xì)胞中mTOR通路組分的表達(dá)，且這種調(diào)節(jié)是調(diào)節(jié)mTOR信號活性的關(guān)鍵[13]。miRAN-150通過靶向Notch受體家族的成員Notch3，在調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞的發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用[14]。

2 miRNA在自身免疫及血管炎性疾病B細(xì)胞功能紊亂中的作用機制

在SLE中，循環(huán)免疫復(fù)合物在血管壁沉積和原位免疫復(fù)合物形成可導(dǎo)致血管炎癥。過度活化的B淋巴細(xì)胞可使自身抗體生成增多。miRNAs引起B(yǎng)細(xì)胞功能紊亂參與SLE的致炎過程。SLE患者的B細(xì)胞中miRNA-1246下調(diào)和miRNA-30a過表達(dá)可使B細(xì)胞過度活化。Luo等[15]發(fā)現(xiàn)miRNA-1246靶向早期B細(xì)胞因子(Early B cell factor,EBF)1 可抑制其表達(dá)。相反，在正常B細(xì)胞中抑制miRNA-1246的表達(dá)可使EBF1表達(dá)上調(diào)，使B細(xì)胞表面的共刺激分子CD40、CD80和CD86增加，增加B細(xì)胞的活化?；罨腂細(xì)胞還可通過激活A(yù)KT-p53信號通路降低miR-1246的表達(dá)，反過來促進(jìn)B細(xì)胞活化。SLE患者B細(xì)胞中miRNA-30a的上調(diào)可直接抑制靶基因Lyn的表達(dá)，促進(jìn)B細(xì)胞增殖和IgG抗體產(chǎn)生，參與SLE的致病過程[16]。Wu等[17]研究發(fā)現(xiàn)在SLE患者的B淋巴細(xì)胞中，miR-7、 miR-21、miR-22表達(dá)上調(diào)，它們可使PTEN的表達(dá)降低，促使B細(xì)胞過度活化，其具體的機制尚不清楚，但與健康對照組相比PTEN在SLE患者B細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，且其表達(dá)水平與SLE疾病活動度呈負(fù)相關(guān)。

3 miRNA在自身免疫及血管炎性疾病T細(xì)胞功能紊亂中的作用機制

在自身免疫血管炎性疾病中，對miRNAs介導(dǎo)的免疫功能紊亂的研究大部分在T細(xì)胞中。 在SLE中，miRNAs可參與CD4+T細(xì)胞表觀遺傳學(xué)的修飾和T細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)。CD4+CD25+FoxP3+Treg細(xì)胞在調(diào)節(jié)機體正常免疫功能中起關(guān)鍵作用[18]。miRNAs可直接作用于Foxp3 mRNA的3′UTR、相關(guān)信號通路或基因間接影響Foxp3的表達(dá)，從而使Treg減少，在SLE和KD的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。miRNAs還可影響Th細(xì)胞的分化參與SLE、JIA和BD的致病過程。

3.1miRNAs在SLE表觀遺傳學(xué)中的作用 SLE患者CD4+T細(xì)胞中 DNA甲基化廣泛降低，可導(dǎo)致自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞克隆。miRNAs可通過不同的方式下調(diào)T細(xì)胞DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)的表達(dá)降低DNA甲基化。 miRNA-126與DNMT1 mRNA的3′UTR結(jié)合、miR-148a調(diào)節(jié)DNMT1的編碼區(qū)，二者均可直接降低DNMT1的表達(dá)[19,20]。miRNA-21通過靶向自身免疫相關(guān)基因RASGRP1，調(diào)節(jié)DNMT1上游的Ras-MAPK信號通路[20]，miR-29b通過抑制DNMT1的反式激活因子Sp1[21]，二者通過不同的調(diào)節(jié)方式間接下調(diào)DNMT1的表達(dá)，最終降低DNA的甲基化。

3.2miRNAs在SLE患者T細(xì)胞中的作用 T細(xì)胞增殖、CD40L和ICOS蛋白表達(dá)升高、IL-4、IL-10和IL-21蛋白表達(dá)增加為T細(xì)胞活化表型。miRNA-142-3p/5p的表達(dá)下調(diào)或miR-21的過表達(dá)在SLE患者的CD4+T細(xì)胞中均可使T細(xì)胞過度活化，并使B細(xì)胞產(chǎn)生的IgG抗體增多。MiRNA-142-3p/5p表達(dá)下調(diào)可使相應(yīng)靶基因CD48、SAP的mRNA水平升高，而miR-21的過表達(dá)，則抑制靶基因PPCD4的表達(dá)[22,23]。PPCD4是IL-10的抑制劑。因此，miR-21對PPCD4的抑制可促進(jìn)T細(xì)胞IL-10分泌增多[24]。miR-410通過與信號傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子(Signal transducer and activator of transcription,STAT)3 的mRNA的3′UTR結(jié)合STAT3的表達(dá)，降低IL-10的分泌。在SLE患者CD3+T細(xì)胞中miR-410表達(dá)下調(diào)通過增加STAT3活化，使IL-10分泌增多，增加T細(xì)胞活化[25]。 另外，Th17細(xì)胞在維持自身免疫中發(fā)揮重要作用，Liu等[26]發(fā)現(xiàn)在SLE患者外周血單核細(xì)胞中(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)miR-873表達(dá)上調(diào)。其主要作用機制是miR-873通過抑制靶基因叉頭框(Forkhead box,Foxo)1的表達(dá)促進(jìn)Th17細(xì)胞的分化。在SLE患者Treg中，Sun等[27]發(fā)現(xiàn)miR-326顯著上調(diào)，且與Ets-1(E-Twenty-six-1)的mRNA呈負(fù)相關(guān)。MiR-326可與Ets-1 mRNA的3′UTR結(jié)合抑制其的表達(dá)。且在SLE患者Ets-1缺乏可降低CD4+CD25+Tregs中的Foxp3 mRNA。FoxP3是Treg細(xì)胞生成和發(fā)揮功能的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子之一。說明SLE患者miR-326表達(dá)上調(diào)可能抑制Ets-1的表達(dá)，從而抑制CD4+CD25+Tregs的功能。

3.3miRNAs在JIA患者T細(xì)胞中的作用 sJIA患者體內(nèi)的Th17/Treg細(xì)胞失衡，Th17細(xì)胞比率升高，Treg細(xì)胞比率降低。JAK/STAT信號通路參與sJIA的發(fā)病過程。IL-6與JAK受體結(jié)合使STAT3磷酸化，誘導(dǎo)下游炎癥相關(guān)基因表達(dá)[28]?；罨腟TAT3還可促進(jìn)Th17細(xì)胞分化，刺激炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-1和IL-6產(chǎn)生[29]。Li等[30]通過RT-qPCR檢測，發(fā)現(xiàn)sJIA患者外周血單核細(xì)胞(PBMCs)中miR-19a和miR-21表達(dá)下調(diào)，而與JAK/STAT3信號通路相關(guān)的STAT3、細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制因子(Suppressor of cytokine signaling,SOCS)3、TNF-α、IL-6增加。研究表明miR-21與T細(xì)胞的成熟和分化有關(guān)，不僅在調(diào)節(jié)Th1和Th2的相互作用中發(fā)揮重要作用[31],在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者中miR-21表達(dá)下調(diào)可使STAT3活化，使Th17/Treg細(xì)胞失衡[32]。

3.4miRNAs在川崎病患者Treg細(xì)胞中的作用 FoxP3在川崎病急性期的Treg細(xì)胞中降低。Ni等[33]發(fā)現(xiàn)miR-155和miR-21在川崎病急性期的Treg中表達(dá)上調(diào)，而miR-31表達(dá)下調(diào)。同時，急性期患者血漿中IL-6、pSTAT3和SOCS1的水平升高，pSTAT5的水平降低。研究結(jié)果表明Treg細(xì)胞中miRNA-155表達(dá)上調(diào)可降低SOCS1的表達(dá)，增加STAT5的磷酸化[34]。磷酸化的STAT-5與FoxP3基因的啟動子結(jié)合增加FoxP3的轉(zhuǎn)錄，使FoxP3的水平升高[35]。因此，川崎病患者急性期Treg中miR-155的下調(diào)可能通過影響SOCS1/STAT5信號通路導(dǎo)致FoxP3+Treg減少。miR-31可直接與FoxP3 mRNA 3′UTR結(jié)合抑制FoxP3的翻譯[36]。以上研究結(jié)果表明川崎病急性期Treg的減少可能與miR-155/SOCS1信號通路的異常和miR-31的過表達(dá)有關(guān)。

3.5miRNAs在BD患者T細(xì)胞中的作用 在BD伴有急性葡萄膜炎的急性期患者中，Notch信號通路被激活，STAT3磷酸化水平增加。STAT3磷酸化可增強Th17細(xì)胞應(yīng)答。在BD患者急性期中CD4+T細(xì)胞miR-23b表達(dá)下調(diào)，miR-23b與Notch信號通路的激活和Th1/Th17細(xì)胞增加有關(guān)[37]。

4 miRNA在自身免疫及血管炎性疾病細(xì)胞因子分泌中的作用機制

細(xì)胞因子在調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答的類型和程度中發(fā)揮重要作用[38]，可作為部分自身免疫性血管炎性疾病早期診斷的生物標(biāo)志物，如：SLE和BD等。研究表明miRNA的異常表達(dá)可影響細(xì)胞因子或趨化因子的分泌，在免疫功能紊亂中發(fā)揮重要作用，可能與SLE、sJIA和BD的發(fā)病機制相關(guān)。miRNAs在川崎病中對細(xì)胞因子的影響尚未報道。

4.1miRNAs在SLE患者細(xì)胞因子和趨化因子分泌中的作用 IL-2降低可導(dǎo)致T細(xì)胞喪失對自身抗原的免疫耐受產(chǎn)生自身免疫。IL-2分泌減少可降低Tregs的含量、激活誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡(Activation-induced cell death,AICD)和細(xì)胞毒活性，從而影響T細(xì)胞的功能。在SLE中MiR-200a表達(dá)下調(diào)可能增加ZEB1-CtBP2復(fù)合物與IL-2的NRE-A結(jié)合，抑制IL-2的產(chǎn)生miR-200a可降低IL-2的分泌。其機制可能是miR-200a降低E-box同源結(jié)合框(E-box binding homeobox,ZEB)1、ZEB2和C端結(jié)合蛋白(C-terminal binding protein,CtBP)2與IL-2沉默子A(Negative regulatory element-A,NRE-A)結(jié)合。在紅斑狼瘡小鼠(MRL/lpr)的CD4+T細(xì)胞中miR-200a表達(dá)下調(diào)，促進(jìn)ZEB1-CtBP2復(fù)合物與IL-2的NRE-A結(jié)合降低IL-2的分泌。而在T淋巴細(xì)胞系中過表達(dá)miR-200a可出現(xiàn)相反的結(jié)果[39]。Amr等[40]發(fā)現(xiàn)，在SLE患者血清中，miR-31表達(dá)下調(diào)與IL-2的水平呈正相關(guān)，而miR-21表達(dá)上調(diào)與IL-2呈負(fù)相關(guān)。隨后的研究發(fā)現(xiàn)miRNA-31在SLE患者T細(xì)胞中表達(dá)降低，在T細(xì)胞中RhoA可通過調(diào)節(jié)活化T細(xì)胞核因子(Nuclear factor of activated T cells,NFAT)而抑制IL-2的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)一步研究表明miRNA-31通過抑制其靶基因Rho A增加IL-2啟動子的活性[41]。CCL5趨化因子也稱受激活調(diào)節(jié)正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子(Regulated on activation normal T cell expressed and secreted，RANTES)，能募集白細(xì)胞在炎癥部位聚集，在SLE的發(fā)病機制中發(fā)揮重要的作用。miRNA-125a可直接靶向Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子(Kruppel-like factor,KLF)13基因降低RANTES的表達(dá)水平。在SLE患者的T細(xì)胞中miRNA-125a表達(dá)下調(diào)，使RANTES的表達(dá)增加[42]。

4.2miRNAs在sJIA患者細(xì)胞因子分泌中的作用 IL-6在sJIA患者急性期循環(huán)血白細(xì)胞中表達(dá)顯著升高，且IL-6的拮抗劑托珠單抗對sJIA患者的治療有效[43]。Sun等[44]通過基因芯片分析和RT-qPCR驗證發(fā)現(xiàn)miR-26a在sJIA患者血清中表達(dá)上調(diào)，且與IL-6的水平呈正相關(guān)，表明miRNA-26a可調(diào)節(jié)與sJIA患者先天性免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞因子IL-6的水平。另外，miR-19a的表達(dá)下調(diào)也可導(dǎo)致TNF-α和IL-6的分泌增加，且與miR-19a抑制SOCS3使JAK/STAT信號通路的信號傳導(dǎo)增強有關(guān)[30]。

4.3miRNAs在BD患者細(xì)胞因子分泌中的作用 BD外周血單核細(xì)胞產(chǎn)生的TNF-α、IL-6增多。Woo等[45]通過基因芯片和qPCR發(fā)現(xiàn)miR-638、miR-4488在BD患者巨噬細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)，而miR-3591-3p表達(dá)上調(diào)。而且在THP-1細(xì)胞中同時過表達(dá)miR-3591-3p和抑制miR-638、miR-4488，可使IL-6 mRNA增加，因此這些miRNAs可能與白塞病IL-6的分泌有關(guān)。其具體作用機制有待進(jìn)一步研究。

5 miRNA在自身免疫及血管炎性疾病先天免疫細(xì)胞功能紊亂中的作用機制

5.1miRNAs在SLE患者先天性免疫應(yīng)答中的作用 樹突狀細(xì)胞是先天性免疫應(yīng)答的重要組成部分[46]。pDCs激活后伴隨著大量I型干擾素(Interferon,IFN)的產(chǎn)生，在SLE的發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用[47]。在新西蘭黑/白F1雜種(New Zealand Black/White F1 hybrid,NZB/WF 1)狼瘡小鼠模型骨髓來源的pDCs中，TLR7促進(jìn)miR-155-Ship1信號通路的活化并增加pDCs表面CD40分子的表達(dá)[48]。干擾素調(diào)節(jié)因子(Interferon regulatory factor 5,IRF5)和STAT1是I型IFN信號通路的重要組成成分。Tang等[49]發(fā)現(xiàn)MiR-146a作為I型IFN信號通路的負(fù)調(diào)節(jié)因子，與SLE疾病的活動度呈負(fù)相關(guān),并可分別靶向IRF5和STAT1基因的3′UTR在轉(zhuǎn)錄后水平抑制其表達(dá)。miRNA-146a還可通過靶向腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(Tumor necrosis factor receptor associated factor 6,TRAF6)和白介素I受體相關(guān)激酶1(IL-1 receptor-associated kinase 1,IRAK1)負(fù)調(diào)控固有免疫應(yīng)答[50]。Smith等[51]發(fā)現(xiàn)在SLE患者單核細(xì)胞中miRNA-302d表達(dá)下調(diào)可增加干擾素誘導(dǎo)基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)的表達(dá)，如：MX1和OSA1。干擾素調(diào)節(jié)因子(Interferon regulatory factor,IRF)-9是miRNA-302d的靶基因，miRNA-302d表達(dá)下調(diào)通過增加IRF9的水平而增加ISGs表達(dá)。

5.2miRNAs參與調(diào)節(jié)sJIA巨噬細(xì)胞極化過程 在全身性幼年特發(fā)性關(guān)節(jié)炎(systematic juvenile idiopathic arthritis,sJIA)患者急性期發(fā)揮促炎作用的M1型巨噬細(xì)胞和發(fā)揮抗炎作用的M2型巨噬細(xì)胞出現(xiàn)表型轉(zhuǎn)換。研究表明miRNA-146a和miRNA-125a-5p在sJIA患者急性期單核細(xì)胞中顯著高。Li等[52]在THP1巨噬細(xì)胞中過表達(dá)miRNA-146a發(fā)現(xiàn)其抑制M1型極化，促進(jìn)M2型極化，并通過雙熒光素酶報告基因檢測進(jìn)一步證實INHBA為miRNA-146a的靶基因。Schulert等[53]在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，miR-125a-5p的過表達(dá)促進(jìn)THP1巨噬細(xì)胞M2型極化，表現(xiàn)出M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)記的CCL1、IL-1、CD136基因表達(dá)。目前的研究說明miRNA-146a和miRNA-125a-5p在體外實驗中參與巨噬細(xì)胞極化，但在sJIA患者中的作用機制有待更進(jìn)一步的研究。

6 microNRA在自身免疫及血管炎性疾病血管功能紊亂中的作用機制

6.1miRNAs在SLE相關(guān)的血管損傷中的作用 SLE是內(nèi)皮功能障礙的已知危險因素。IFN-α負(fù)調(diào)節(jié)內(nèi)皮一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)3的mRNA，從而降低一氧化氮合酶(eNOS)的表達(dá)和NO的產(chǎn)生，在與血管擴張受損有關(guān)的血管異常中起一定作用。miRNA-155參與INF-α對NOS3 mRNA的負(fù)調(diào)節(jié)過程，在缺乏miR-155時，INF-α對NOS3的抑制作用被解除[54]。因此miRNA在SLE中對內(nèi)皮細(xì)胞的功能起重要作用。另外，抗磷脂(Antiphospholipid,APL)-IgG抗體或者抗雙鏈DNA-IgG抗體均可抑制內(nèi)皮細(xì)胞中miRNAs(miR-124a,miR-125a,miR-222,miR-125b,miR-146a,miR-155)的表達(dá)，同時調(diào)節(jié)與ECs功能紊亂相關(guān)的分子標(biāo)志物即MCP-1、TF和VCAM-1分子表達(dá)上調(diào)，而eNOS分子表達(dá)下調(diào)，表明miRNAs與SLE血管功能紊亂相關(guān)[3]。

6.2miRNAs在川崎病血管損傷中的作用 血管損傷是KD發(fā)病和死亡的主要原因，雖然川崎病誘導(dǎo)血管損傷的原因和分子機制目前尚不清楚，但KD受損的血管壁的主要細(xì)胞事件和組織病理學(xué)變化已經(jīng)清楚，即川崎病可引起血管性內(nèi)皮(Endothelial cells,ECs)損傷，受損的ECs可導(dǎo)致血管血栓形成，并使許多血液炎癥介質(zhì)進(jìn)入血管平滑肌細(xì)胞(Vascular smooth muscle cells,VSMCs)，使ECs和VSMCs凋亡和細(xì)胞外基質(zhì)的產(chǎn)生減少，最終導(dǎo)致動脈瘤的形成。血清中的miR-223不僅可以進(jìn)入ECs,而且對ECs具有抗增殖和促凋亡作用，并與其在VSMC中的細(xì)胞功能一致[55]。內(nèi)皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Endothelial-mesenchymal transition,EndoMT)涉及急性KD患者冠狀動脈壁肌成纖維樣細(xì)胞介導(dǎo)的損傷。川崎病患兒的血清抑制內(nèi)皮細(xì)胞中的KLF4/miR-483軸，導(dǎo)致結(jié)締組織生長因子(Connective tissue growth factor,CTGF)增加誘導(dǎo)EndoMT[56]。miRNAs介導(dǎo)的ECs凋亡可能參與KD血管損傷。Li等[57]發(fā)現(xiàn)miRNA-125a-5p在KD患者血清中表達(dá)上調(diào)，并在體外實驗中驗證了miRNA-125a-5p可誘導(dǎo)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)凋亡通過靶向MKK7調(diào)節(jié)Bax/Bcl2信號通路。Wu等[58]發(fā)現(xiàn)川崎病患者血清中的miRNA-186在誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用，通過靶向SMAD6 基因激活MAPK信號通路。

7 miRNA在自身免疫性血管炎性疾病診斷中的價值

研究表明，miRNAs分子可作為自身免疫及血管炎性疾病診斷的潛在生物標(biāo)志物。免疫細(xì)胞或循環(huán)miRNAs表達(dá)譜可為自身免疫及血管炎性疾病的發(fā)病機制、臨床診斷、預(yù)后及新的治療方案提供線索。miRNAs在自身免疫及血管炎性疾病的研究尚處于初級階段，且不同人種、疾病的不同階段及實驗方法的不同研究可能使miRNAs存在差異。所以，miRNAs的臨床應(yīng)用尚不成熟。

7.1miRNAs是SLE診斷的潛在生物標(biāo)志物 Kim等[59]在韓國人群中發(fā)現(xiàn)，血漿hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-223-3p在SLE患者血漿中顯著上調(diào)。且hsa-miR-223-3p與口腔潰瘍和狼瘡抗凝物顯著相關(guān)。說明hsa-miR-30e-5p，hsa-miR-92a-3p和hsa-miR-223-3p可能是SLE診斷或臨床表現(xiàn)的新的潛在生物標(biāo)志物。

7.2miRNAs是JIA早期診斷的潛在生物標(biāo)志物 在JIA患者中存在許多差異表達(dá)的miRNAs，是JIA早期診斷的潛在生物標(biāo)志物。Ma等[60]通過RT-qPCR檢測發(fā)現(xiàn)與健康對照組相比，JIA患者血清中miR-16、miR-146a、miR-223表達(dá)升高，而miR-132降低。Kamiya等[61]進(jìn)一步將JIA的生物標(biāo)志物血沉(Erythrocyte sedimentation rate，ESR)和基質(zhì)金屬蛋白酶3(Matrixmetalloproteinase-3,MMP-3)與microRNAs進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)在全身型和多關(guān)節(jié)型JIA患者中，miR-223和miR-16的水平分別與ESR和MMP-3呈正相關(guān)，在多關(guān)節(jié)型JIA患者中miR-146a和miR-223的水平與MMP3呈正相關(guān)，表明miR-223可能是JIA的潛在生物標(biāo)志物，但具體的作用機制需更進(jìn)一步的研究。

7.3miRNAs是KD診斷的潛在生物標(biāo)志物 Yun等[62]發(fā)現(xiàn)microRNA-200c和microRNA-371-5p在急性川崎病患兒血清中表達(dá)上調(diào)，可作為KD診斷的潛在生物標(biāo)志物，通過生物信息學(xué)工具(TargetScan)分析其靶基因，其聚集的信號通路主要與炎癥反應(yīng)相關(guān)。

8 小結(jié)與展望

自發(fā)現(xiàn)miRNAs以來，其對先天性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的精密調(diào)節(jié)受到了廣泛的關(guān)注。在自身免疫及血管炎性疾病的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。microRNAs參與調(diào)節(jié)各種免疫細(xì)胞如：B細(xì)胞、T細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等的功能、細(xì)胞因子和趨化因子的分泌、血管功能紊亂的調(diào)節(jié)等。至今，miRNAs在大部分自身免疫性血管炎性疾病中的研究仍處于初級階段。多種自身免疫及血管炎性疾病中存在許多差異表達(dá)的miRNAs分子，但部分miRNA的作用機制仍不清楚。隨著新的生物信息學(xué)分析工具出現(xiàn)、高通量基因測序方法等的應(yīng)用，越來越多miRNAs的靶基因及其分子作用機制將被揭示。探索miRNAs在自身免疫性血管炎性疾病發(fā)生、發(fā)展過程中的異常表達(dá)，可在分子水平上增加對該疾病的認(rèn)識，為進(jìn)一步探索疾病的發(fā)病機制提供線索。