羅伊氏乳桿菌對(duì)組胺引起黃顙魚(yú)肝腸損傷修復(fù)效果評(píng)價(jià)

成艷波 李 薇 韓木蘭 許國(guó)煥 謝黎煒 印遇龍 梁建慶

(1. 廣東省微生物研究所廣東省部共建華南應(yīng)用微生物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實(shí)驗(yàn)室, 廣州 510070;2. 廣東碧德生物科技有限公司, 廣州 510663; 3. 中國(guó)科學(xué)院亞熱帶農(nóng)業(yè)生態(tài)研究所, 長(zhǎng)沙 410125)

組胺作為常見(jiàn)的一種生物胺, 廣泛存在于生物體內(nèi), 其作為一種重要的調(diào)控因子, 在機(jī)體生理功能調(diào)節(jié)中扮演著重要角色[1,2], 然而養(yǎng)殖動(dòng)物攝入過(guò)高濃度的組胺往往會(huì)出現(xiàn)中毒癥狀[3]。已有研究報(bào)道, 組胺會(huì)引起水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)性能下降[4,5], 組織器官出現(xiàn)炎癥反應(yīng)、病理?yè)p傷[6—9]及體色變異[7]等。課題組前期研究發(fā)現(xiàn), 攝食含組胺飼料(1000 mg/kg)的黃顙魚(yú), 腦組織促腎上腺皮質(zhì)激素和黑素皮質(zhì)素受體基因表達(dá)量下降、表皮酪氨酸酶活力和黑色素含量降低, 最終導(dǎo)致體色白(體)化[10]; 同時(shí)伴隨有胃、肝臟和腸道發(fā)生病理?yè)p傷, 如胃部腫脹,肝臟炎癥細(xì)胞增多及腸道皺襞數(shù)量減少、長(zhǎng)度變短等[11]。然而, 中等濃度組胺對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能及組織健康是否有影響, 尚不清楚。羅伊氏乳桿菌是已報(bào)道的幾乎存在于所有脊椎動(dòng)物和哺乳動(dòng)物腸道內(nèi)的乳桿菌, 對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物生長(zhǎng)、免疫和腸道屏障功能有顯著的改善作用[12,13]。Ganesh等[14]報(bào)道, 羅伊氏乳桿菌可通過(guò)抑制甘油二酯激酶的磷酸化, 減輕組胺和組胺受體1結(jié)合介導(dǎo)的腸道炎癥反應(yīng), 被譽(yù)為“微生物抗組胺藥”。因此, 實(shí)驗(yàn)?zāi)M水產(chǎn)飼料中使用較多的中等魚(yú)粉的組胺含量, 研究中等濃度組胺對(duì)黃顙魚(yú)(Pelteobagrus fulvidraco)生長(zhǎng)及組織健康的影響, 同時(shí)對(duì)羅伊氏乳桿菌對(duì)飼料中組胺的脫毒效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料

實(shí)驗(yàn)以白魚(yú)粉(組胺含量147 mg/kg)和豆粕為主要蛋白源, 設(shè)計(jì)3組等氮飼料, 分別記為C、H和H+B。其中C為基礎(chǔ)飼料, H組飼料在基礎(chǔ)飼料配方中添加了400 mg/kg的外源組胺, 以模擬中等魚(yú)粉中組胺含量(GB/T 19164-2003); H+B組在基礎(chǔ)飼料配方中添加外源組胺的同時(shí)添加了羅伊氏乳桿菌,乳桿菌以菌懸液的形式添加(實(shí)測(cè)活菌數(shù)為108CFU/g), 添加量為20%, 即在1 kg混勻的飼料原料中添加200 g菌懸液。實(shí)驗(yàn)用飼料原料經(jīng)粉碎、過(guò)篩(40目)后, 制成直徑為3 mm的顆粒飼料(制粒機(jī), 型號(hào)KL120, 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院漁業(yè)機(jī)械儀器研究所)。空調(diào)房中風(fēng)干(23℃)后, -20℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 飼料中乳桿菌實(shí)測(cè)活菌數(shù)(成分分析保證值)為105CFU/g。詳細(xì)的飼料配方及其營(yíng)養(yǎng)組成見(jiàn)表 1。實(shí)驗(yàn)用羅伊氏乳桿菌菌株由廣東碧德生物科技有限公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)魚(yú)

實(shí)驗(yàn)用黃顙魚(yú)購(gòu)買(mǎi)自廣州魚(yú)豐水產(chǎn)養(yǎng)殖發(fā)展有限公司。幼魚(yú)入缸前用3% 的食鹽水(浸泡15min)進(jìn)行體表消毒。暫養(yǎng)2周后, 禁食1d, 用MS-222(80 mg/L)輕微麻醉后, 選取健康、體格均勻的幼魚(yú), 隨機(jī)分配到9個(gè)圓形玻璃纖維養(yǎng)殖缸中(直徑100 cm, 高75 cm; 缸內(nèi)壁為銀灰色), 每組飼料設(shè)置3個(gè)平行養(yǎng)殖缸, 放養(yǎng)密度為35尾/缸, 實(shí)驗(yàn)初始時(shí)魚(yú)體重為(14.23±0.65) g。

表 1 飼料配方及成分分析Tab. 1 Feed formulation and chemical composition

1.3 養(yǎng)殖管理與飼料投喂

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在廣東省微生物研究所室內(nèi)養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行, 采用靜水、非循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng), 養(yǎng)殖用水為曝氣后的自來(lái)水, 缸中有效水體約為缸體積的3/4。每隔3天進(jìn)行1次換水, 換水量為養(yǎng)殖缸體積的1/3。整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期水溫的變化范圍為23—30℃,水體pH變化范圍為6.8—7.6, 溶氧＞ 6.0 mg/L。實(shí)驗(yàn)采用人工光照(12h光照, 12h黑暗)。每組飼料投喂3個(gè)平行缸的實(shí)驗(yàn)魚(yú)。實(shí)驗(yàn)持續(xù)8周, 每天投喂2次(09:00和15:30), 日投喂量為每缸魚(yú)總重的3%。每次投喂前5min停水、停氣, 人工少量多次投喂, 以確保投到缸中飼料被完全攝食。投喂結(jié)束2h后用虹吸法對(duì)缸底進(jìn)行吸污。每2周進(jìn)行1次魚(yú)體稱(chēng)重,調(diào)整日投喂量。稱(chēng)重前1d禁食。

1.4 樣品采集與分析

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)正式開(kāi)始時(shí)取3×6條與實(shí)驗(yàn)魚(yú)規(guī)格接近魚(yú)樣, 過(guò)量麻醉致死后, -20℃密封保存, 用作初始魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)組成分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 禁食1d, 用MS-222對(duì)實(shí)驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行輕微麻醉, 每缸魚(yú)批量稱(chēng)重后, 取5尾魚(yú)測(cè)量體長(zhǎng)和稱(chēng)重, 尾靜脈抽血。采集的血液置于盛有冰塊的泡沫盒中, 待完全凝固后,4000×g離心10min(4℃)。制備得到的血清樣品于液氮中暫存, -80℃保存至分析。抽血后魚(yú)樣于冰盤(pán)上解剖后, 稱(chēng)量其肝臟、空腔重量。另取5條魚(yú)去除胃中內(nèi)容物后用作魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)組成分析。

魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)組成分析方法同飼料營(yíng)養(yǎng)組成分析,按照GB/T-5009系列方法進(jìn)行測(cè)定。魚(yú)粉及飼料中組胺含量采用分光光度法測(cè)定(GB/T 5009.45-2003/4.4)。血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、肝臟谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSH-ST)活力及肝臟丙二醛(MDA)含量等生化指標(biāo), 購(gòu)買(mǎi)南京建成生物工程研究所試劑盒, 使用Thermo全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀測(cè)定。采集的肝臟、腸道(腸道分段參見(jiàn)宋霖[15])及胃組織樣品, 置于波恩氏液中, 4℃固定12—24h。樣品經(jīng)酒精梯度脫水及石蠟包埋后切片, 切片厚度為4 μm。切片經(jīng)二甲苯脫蠟、蘇木精-伊紅染色及中性樹(shù)膠封片后, 光學(xué)顯微鏡下(型號(hào): OLYMPS CX31) 觀察, 采集圖像。

1.5 數(shù)據(jù)計(jì)算與統(tǒng)計(jì)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)魚(yú)體增重(Weight gain,WG)、特定生長(zhǎng)率(Specific growth rate,SGR)、飼料系數(shù)(Feed conversion ratio,FCR)、肝體比(Hepotasomatic index,HSI)、肥滿度(Condition Factor,CF)和蛋白質(zhì)效率(Protein efficiency ratio,PER)的計(jì)算公式分別為:

WG(%)=100×(FBW-IBW)/IBW

SGR(%/d)=100×[ln(FBW)-ln(IBW)]/t

FCR=FI/(FBW-IBW)

HSI(%)=100×WL/FBW

CF(100 g/cm3)=100×FBW/L3

PER(%)=100×(FBW-IBW)/(FI×FCP)

其中,FBW為實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)每尾魚(yú)的平均重量(g);IBW為實(shí)驗(yàn)初始時(shí)每尾魚(yú)的平均重量(g);FI為實(shí)驗(yàn)期間每尾魚(yú)的攝食量(g);t為實(shí)驗(yàn)天數(shù);L為實(shí)驗(yàn)魚(yú)的體長(zhǎng)(cm);WL為對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)魚(yú)肝臟重量(g),FCP為飼料中蛋白質(zhì)的百分含量(%)。

測(cè)得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD,n=3)表示。使用Origin 8.0進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)后, 采用Tukey對(duì)不同處理組組間差異進(jìn)行多重比較分析, 且在P＜0.05時(shí)認(rèn)為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 組胺及羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能和形態(tài)指標(biāo)的影響

表 2顯示不同飼料處理組黃顙魚(yú)幼魚(yú)WG、SGR、FCR和PER無(wú)顯著差異(P＞0.05), 各組增重率為157%—163%, 蛋白質(zhì)效率為2.1%—2.4%。各實(shí)驗(yàn)組黃顙魚(yú)的HSI和CF差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 組胺及羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)體組成的影響

各組實(shí)驗(yàn)魚(yú)魚(yú)體水分、粗蛋白、脂肪和灰分含量無(wú)顯著差異(表 3)(P＞0.05)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí), 魚(yú)體粗蛋白含量為140—143 g/(kg濕重), 脂肪含量為85—89 g/(kg濕重)。

表 2 組胺及羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能及形態(tài)指標(biāo)的影響Tab. 2 Effects of histamine and L. reuteri on growth performance and morphology indexes of P. fulvidraco

表 3 組胺及羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)組成的影響Tab. 3 The effect of histamine and L. reuteri on body composition of P. fulvidraco (g/kg)

2.3 組胺及羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)肝臟健康狀態(tài)的影響

組胺及羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)及谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活力的影響見(jiàn)圖 1。結(jié)果顯示, H組血清ALT活力值為20 U/L, 顯著高于C組血清ALT活力(5 U/L)(P＜0.05)。H+B組ALT活力(7 U/L)與C組無(wú)顯著差異(P＞0.05), 但顯著低于H組(P＜0.05)。各飼料處理組黃顙魚(yú)血清AST與ALT變化趨勢(shì)相同, 即H組血清AST活力(756 U/L)顯著高于C組(241 U/L)(P＜0.05), H+B組AST活力(253 U/L)與C組無(wú)顯著差異(P＞0.05), 但顯著低于H組(P＜0.05)。

組胺及羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)肝臟谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GSH-ST)活力及丙二醛(MDA)含量的影響見(jiàn)圖 2。結(jié)果顯示, H組肝臟GSH-ST活力值37.49 U/mg prot, 顯著高于C組肝臟GSH-ST活力(23.70 U/mg prot)(P＜0.05)。H+B組GSH-ST活力(25.48 U/mg prot)與C組無(wú)顯著差異(P＞0.05), 但顯著低于H組(P＜0.05)。H組肝臟MDA含量(1.95 nmol/mg prot)顯著高于C組(1.35 nmol/mg prot)(P＜0.05), H+B組MDA含量(1.45 nmol/mg prot)與C組無(wú)顯著差異(P＞0.05), 但顯著低于H組(P＜0.05)。

圖 1 血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶活力Fig. 1 The activity of plasma ALT and AST

圖 2 肝臟谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶活力及丙二醛含量Fig. 2 The activity of liver GSH-ST and the content of liver MDA

圖 3為HE染色后黃顙魚(yú)肝臟組織的顯微結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示, C組肝臟細(xì)胞輪廓清晰, 細(xì)胞核(細(xì)實(shí)線箭頭)清晰可見(jiàn); H組肝臟中有較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(紅色箭頭)和少量肝細(xì)胞壞死(藍(lán)色箭頭); H+B組肝臟組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整, 無(wú)明顯異狀。

2.4 組胺及羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)腸道健康的影響

圖 4為HE染色后黃顙魚(yú)腸道組織的顯微結(jié)構(gòu)。觀察顯示, C組中腸腸道皺襞排列緊密(圖 4C-1),細(xì)胞組織結(jié)構(gòu)正常, 上皮細(xì)胞排列整齊, 微絨毛層相對(duì)齊整, 杯狀細(xì)胞大小相對(duì)均一(圖 4C-2); H組中腸腸道皺襞數(shù)目較對(duì)照組顯著減少, 皺襞長(zhǎng)度明顯變短(圖 4H-1), 水腫嚴(yán)重, 但腸皺襞尚未形成脫落(圖 4H-2, 黑色箭頭); H+B組腸道皺襞數(shù)目及皺襞長(zhǎng)度有明顯恢復(fù)(圖 4H+B-1), 且無(wú)明顯水腫現(xiàn)象發(fā)生(圖 4H+B-2)。

2.5 組胺及羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)胃健康的影響

圖 3 肝臟組織的顯微結(jié)構(gòu)Fig. 3 Microstructure of liver

圖 4 中腸組織顯微結(jié)構(gòu)Fig. 4 Microstructure of mid-intestine

圖 5 胃組織顯微結(jié)構(gòu)Fig. 5 Microstructure of stomach

圖 5為HE染色后黃顙魚(yú)胃組織橫切后的顯微結(jié)構(gòu), 由漿膜、肌層、黏膜下層及黏膜層組成。不同于腸道, 胃黏膜皺襞頂端較為平緩, 且黏膜層中無(wú)杯狀細(xì)胞分布。結(jié)果顯示, H組和H+B組胃組織結(jié)構(gòu)較C組, 皺襞形態(tài)、數(shù)量及長(zhǎng)度無(wú)明顯差異(圖5C-1、H-1和H+B-1); 胃皺襞上皮細(xì)胞排列緊密, 胃腺腺泡輪廓清晰, 可見(jiàn)細(xì)胞核散布其中(圖 5C-2、H-2和H+B-2), 無(wú)明顯病理?yè)p傷。

3 討論

3.1 中等濃度組胺對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能及肝腸健康的影響

組胺作為生理毒性最強(qiáng)的一種生物胺, 是組氨酸在微生物作用下脫羧產(chǎn)生的一種毒素, 其含量高低是評(píng)價(jià)魚(yú)粉新鮮度的指標(biāo)之一, 也是魚(yú)粉質(zhì)量等級(jí)評(píng)定的重要參照標(biāo)準(zhǔn)[16]。目前業(yè)內(nèi)研究工作者多采用在配方中添加腐敗魚(yú)粉或外源組胺2種方式,研究組胺對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)及健康狀況的影響。然而, 腐敗魚(yú)粉組分復(fù)雜, 除組胺外, 還含有毒素和尸胺、酪胺等生物胺。以腐敗魚(yú)粉為蛋白源時(shí), 魚(yú)粉中毒素對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的影響[9]及其他物質(zhì)對(duì)組胺的作用(如魚(yú)粉中的組胺增強(qiáng)子)[17—20], 使得難以準(zhǔn)確判斷組胺對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的影響。因此, 本實(shí)驗(yàn)采用添加外源組胺的方式研究組胺對(duì)黃顙魚(yú)的影響。實(shí)驗(yàn)以優(yōu)質(zhì)白魚(yú)粉為主要蛋白源, 在配方中添加一定量的外源組胺, 模擬中等魚(yú)粉的組胺含量, 研究發(fā)現(xiàn):飼料中組胺含量接近500 mg/kg時(shí), 對(duì)黃顙魚(yú)的生長(zhǎng)性能(WG、SGR、FCR和PER)無(wú)影響, 相似的結(jié)果在虹鱒[6](組胺添加量2000 mg/kg)中也有報(bào)道。然而, 組胺卻引起了羅非魚(yú)[4]、大西洋庸鰈[5]生長(zhǎng)性能的下降。董小林[21]研究發(fā)現(xiàn), 飼料中添加1000 mg/kg晶體組胺對(duì)長(zhǎng)吻鮠的攝食(FI)和生長(zhǎng)(SGR)有促進(jìn)作用, 而更高含量的組胺(6000 mg/kg)則對(duì)生長(zhǎng)性能無(wú)促進(jìn)作用。組胺對(duì)不同養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)性能的影響存有差異, 一方面可能是不同養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)對(duì)組胺的耐受性和敏感性不同, 另一方面可能是養(yǎng)殖環(huán)境的差異或組胺添加量的不同使得組胺在機(jī)體中發(fā)揮的生理功能不同。在實(shí)驗(yàn)條件下, 組胺對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)及飼料利用無(wú)影響, 是由于組胺含量較低未引起生長(zhǎng)性能的變化還是組胺對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)無(wú)調(diào)控效果仍需進(jìn)一步研究探討。

組胺是機(jī)體內(nèi)普遍存在的一種炎癥因子, 其對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物組織器官的健康有一定的影響。Fairgrieve等[6]用組胺含量為2000 mg/kg的飼料飼養(yǎng)虹鱒,發(fā)現(xiàn)組胺會(huì)導(dǎo)致虹鱒胃部腫脹和黏膜層變薄。Opstvedt等[9]研究發(fā)現(xiàn), 飼料中高濃度組胺會(huì)引起大西洋鮭胃腸道皺襞長(zhǎng)度降低, 黏膜出現(xiàn)損傷; 在本研究中, 組胺未引起黃顙魚(yú)胃組織顯微結(jié)構(gòu)的顯著變化, 但腸道皺襞數(shù)目明顯減少, 長(zhǎng)度顯著變短, 相似的結(jié)論Li等[11]也有報(bào)道。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)是與體內(nèi)三大營(yíng)養(yǎng)(蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和糖類(lèi))物質(zhì)及氨基酸代謝過(guò)程最緊密相關(guān)的兩種酶。兩種轉(zhuǎn)氨酶主要存在于肝臟中, 其活力高低是魚(yú)體內(nèi)蛋白質(zhì)合成和分解代謝強(qiáng)弱的重要體現(xiàn)。在正常的生理狀況下, 肝臟中ALT和AST活力極低,只有在肝功能發(fā)生障礙或肝細(xì)胞受損時(shí), ALT和AST才會(huì)被釋放到血液中, 并表現(xiàn)出較高的活力,因此, 常常通過(guò)測(cè)定血液中ALT和AST的活力變化來(lái)檢測(cè)魚(yú)體肝臟的受損傷情況。實(shí)驗(yàn)中測(cè)的對(duì)照組和乳桿菌添加組黃顙魚(yú)血清ALT活力分別為5和7 U/L, AST活力分別為241和253 U/L, 數(shù)值上和朱磊[22]、吳代武等[23,24]報(bào)道的黃顙魚(yú)血清ALT和AST活力值接近, 低于Elmada等[25]報(bào)道的血清ALT、AST活力(分別為11和328 U/L), 出現(xiàn)這種差異可能與實(shí)驗(yàn)用飼料配方及養(yǎng)殖環(huán)境的不同相關(guān)。谷胱甘肽過(guò)氧化物(GSH-ST)是一種具有多種生理功能的二聚體蛋白, 可促使體內(nèi)谷胱甘肽與有害物質(zhì)相結(jié)合或以非酶結(jié)合方式將毒性物質(zhì)排出體外, 以達(dá)到解毒的目的[26]。在本研究中, H組肝臟GSH-ST活力顯著高于C組, 這一變化趨勢(shì)與血清ALT和AST活力變化趨勢(shì)吻合, 表明中等濃度組胺對(duì)黃顙魚(yú)肝臟有一定的損傷。然而組胺引起肝臟損傷的機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

3.2 羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能及肝腸健康的影響

羅伊氏乳桿菌是已報(bào)道的幾乎存在于所有脊椎動(dòng)物和哺乳動(dòng)物腸道內(nèi)的乳桿菌, 是具有益生功效的腸道益生菌[27]。已有研究報(bào)道, 其可顯著改善陸生養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)性能、免疫能力及腸道屏障功能。在飼料中添加0.75%的羅伊氏乳桿菌可使仔豬平均日增重率提高20.07%, 并顯著降低肝臟白球比和干擾素γ含量, 提升機(jī)體免疫能力[12]。給1日齡仔豬灌服羅伊氏乳桿菌, 可有效促進(jìn)仔豬腸絨毛發(fā)育, 提高空腸二糖酶活力, 增強(qiáng)仔豬腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá), 改善腸黏膜屏障功能[13]。然而,羅伊氏乳桿菌對(duì)養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的影響, 目前僅在羅非魚(yú)中有見(jiàn)報(bào)道。Standen[28]研究發(fā)現(xiàn)在飼料中添加羅伊氏乳桿菌對(duì)羅非魚(yú)生長(zhǎng)表現(xiàn)(WG和SGR)、飼料利用率(FCR和PER)和魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)組成無(wú)顯著影響,但對(duì)其免疫能力(紅細(xì)胞平均容量)有顯著調(diào)節(jié)作用。在本實(shí)驗(yàn)中, 羅伊氏乳桿菌對(duì)黃顙魚(yú)的生長(zhǎng)性能及魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)組成無(wú)影響, 可能與飼料中羅伊氏乳桿菌活菌數(shù)(105CFU/g)相對(duì)較低、養(yǎng)殖周期相對(duì)較短及養(yǎng)殖對(duì)象存有差異等因素有關(guān), 但實(shí)驗(yàn)條件下羅伊氏乳桿菌會(huì)顯著改善腸道組織的健康狀況,使腸道皺襞數(shù)目、長(zhǎng)度恢復(fù)到正常水平及減少皺襞脫落。羅伊氏乳桿菌可以顯著改善宿主腸道健康的原因可能為: (1)代謝產(chǎn)生抗菌肽、黏膜免疫球蛋白等, 提高腸道免疫力[29]; (2)促進(jìn)上皮細(xì)胞緊密連接蛋白表達(dá), 改善黏膜屏障功能[13]; (3)調(diào)節(jié)細(xì)胞因子, 減少機(jī)體炎癥反應(yīng)[30]; (4)和致病菌競(jìng)爭(zhēng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、能量, 促進(jìn)腸上皮細(xì)胞分泌MUC2和MUC3黏蛋白, 從而抑制致病微生物在腸黏膜上的黏附[31]。

在本實(shí)驗(yàn)中, H+B組黃顙魚(yú)血清ALT、AST和肝臟GSH-ST活力及MDA含量顯著降低, 表明羅伊氏乳桿菌的添加可以顯著減輕肝臟炎癥反應(yīng)。腸道不只是魚(yú)體的消化器官, 也是魚(yú)體最重要的免疫器官, 其與肝臟的相互作用是預(yù)防系統(tǒng)性炎癥和保護(hù)肝臟健康的重要途徑。羅伊氏乳桿菌可以顯著改善肝臟健康狀態(tài)可能與其維持腸道形態(tài)完整及改善腸道屏蔽功能及免疫能力有關(guān), 相似的結(jié)論Hsu等[32]也有報(bào)道。另外, MDA含量的高低可以反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度和細(xì)胞的損傷程度, 實(shí)驗(yàn)中H+B組黃顙魚(yú)肝臟組織MDA含量顯著低于H組, 表明乳桿菌的添加減輕了肝臟的氧化損傷, 而乳桿菌具有一定的抗氧化能力也早有報(bào)道[33,34]。羅伊氏乳桿菌是通過(guò)維持黃顙魚(yú)腸道形態(tài)完整、功能健全, 抑或是通過(guò)其自身或代謝產(chǎn)物的抗氧化能力來(lái)維持黃顙魚(yú)肝臟健康, 有待進(jìn)一步研究。

4 小結(jié)

基于本實(shí)驗(yàn)結(jié)果, H組(500 mg/kg)黃顙魚(yú)血清ALT、AST、肝臟GSH-ST活力及肝臟MDA含量顯著上升, H+B組血清ALT、AST、肝臟GSH-ST活力及肝臟MDA含量顯著低于H組, 而和C組無(wú)明顯差異; 組織顯微觀察, 發(fā)現(xiàn)H組肝臟有較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及出現(xiàn)肝細(xì)胞壞死, 而H+B組肝臟細(xì)胞無(wú)明顯損傷; 腸道皺襞數(shù)目減少、長(zhǎng)度變短, 有嚴(yán)重水腫,而羅伊氏乳桿菌添加組腸道皺襞數(shù)目及長(zhǎng)度均可恢復(fù)到正常水平。這表明在實(shí)驗(yàn)條件下, 中等濃度組胺使黃顙魚(yú)肝臟、腸道出現(xiàn)了明顯病理?yè)p傷, 而羅伊氏乳桿菌對(duì)組胺引起的肝腸損傷有一定的保護(hù)作用。