快速石蠟切片技術(shù)在病理檢驗(yàn)中的臨床應(yīng)用分析

吳玉戈

臨床需實(shí)施外科手術(shù)治療的患者， 術(shù)中取病灶組織進(jìn)行病理檢驗(yàn)， 在手術(shù)方案選擇、預(yù)后改善等方面發(fā)揮重要作用［1］。以往， 臨床多采用加溫石蠟切片、冰凍切片等方式進(jìn)行病理檢驗(yàn)， 但也存在不足之處， 如耗時(shí)長(zhǎng)等。有研究考慮術(shù)中病理檢驗(yàn)時(shí)間緊迫、組織樣本小特點(diǎn)， 提出實(shí)施快速石蠟切片技術(shù)， 認(rèn)為其操作簡(jiǎn)單， 且出片時(shí)間短， 染色質(zhì)量佳，診斷效果確切［2］。本研究為證實(shí)這一點(diǎn)， 在124 例手術(shù)患者術(shù)中病理檢驗(yàn)時(shí)分別實(shí)施常規(guī)石蠟切片技術(shù)、快速石蠟切片技術(shù)。此外， 考慮到不同疾病發(fā)生、發(fā)展、診斷、病理特點(diǎn)、手術(shù)轉(zhuǎn)歸等存在差異， 為故為細(xì)化分析， 以乳腺腫瘤手術(shù)患者為納入對(duì)象， 現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料

收集2017 年6 月～2018 年6 月本院124 例女性乳腺腫瘤術(shù)中切取活檢標(biāo)本， 所有患者術(shù)前均行針吸細(xì)胞學(xué)檢查懷疑乳腺腫瘤， 且資料完整。患者年齡25～72 歲，平均年齡(51.02±7.22)歲；切片大小均為1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm。

1. 2 儀器與試劑

儀器包括江蘇常州中威電子儀器廠生產(chǎn)的BMJ-Ⅲ型超聲波快速組織處理儀及程序化控制系統(tǒng)、德國(guó)SLEE 全自動(dòng)旋轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)CUT6062、梵緹斯密閉恒溫全自動(dòng)染片機(jī)［蘇寧食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2013 第1410027 號(hào)］等。試劑包括北京諾博萊德科技有限公司提供的100 ml/L AF 液(950 ml/L 酒精9 份， 400 ml/L 甲醛1 份)、石蠟(熔點(diǎn)58～60℃)、丙酮等。

1. 3 檢驗(yàn)方法

實(shí)施快速石蠟切片技術(shù)、常規(guī)石蠟切片技術(shù)行病理檢驗(yàn)。先實(shí)施快速石蠟切片技術(shù)， 具體方法為：超聲波快速處理儀開(kāi)機(jī)預(yù)熱， 直至72℃。分別在1 號(hào)、2 號(hào)燒杯內(nèi)置入快速固定液50 ml、丙酮50 ml， 在3 號(hào)燒杯內(nèi)融50 ml石蠟備用。以手術(shù)刀將組織切割為1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm大小組織塊， 先置入1 號(hào)燒杯固定， 持續(xù)5 min， 期間進(jìn)一步修整組織塊， 確保厚度均勻， 邊緣整齊， 隨后將組織塊取出，以吸水紙吸干水分。隨后置入2 號(hào)燒杯， 浸泡5 min， 組織塊以鑷子輕壓， 確保氣泡快速涌出， 脫水。隨后浸入熔化石蠟，持續(xù)5 min， 組織塊以鑷子輕壓， 加快浸蠟速度， 確保氣泡快速涌出， 以上操作均在超聲波快速處理儀內(nèi)實(shí)施。熔化預(yù)備好蠟塊凹槽底， 凹槽內(nèi)快速包埋處理好的組織塊， 置入冰箱冷卻， 持續(xù)2 min。隨后做切片處理， 切片厚度3～5 μm， 切片置于含蛋白甘油載玻片上， 以酒精燈烘烤， 直至石蠟熔化，快速HE 染色， 封片。

以快速石蠟制片后剩余組織進(jìn)行常規(guī)石蠟切片技術(shù)， 以資對(duì)照。操作步驟：標(biāo)本以福爾馬林溶液固定， 持續(xù)4 min。隨后液體以吸水紙吸干， 先置于30%酒精， 再分別置于70%、85%、95%酒精， 進(jìn)行脫水處理。取出組織， 置入透明劑，持續(xù)2 h。隨后置入石蠟、二甲苯混合液， 持續(xù)2 h。再置入石蠟液， 持續(xù)3 h， 待蠟液表層凝固， 置入冷水處理。取出切片，切片厚度為3 μm， 進(jìn)行常規(guī)染色、封片。

1. 4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

①比較兩種技術(shù)標(biāo)本制作時(shí)間；②比較兩種技術(shù)診斷結(jié)果， 一般分為良性、惡性；③分析快速石蠟切片圖像特征。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示， 采用t 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 兩種技術(shù)標(biāo)本制作時(shí)間比較

快速石蠟切片技術(shù)標(biāo)本制作時(shí)間為(42.01±5.26)min， 常規(guī)石蠟切片技術(shù)標(biāo)本制作時(shí)間為(1325.65±25.12)min， 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=556.950，P=0.000＜0.05)。

2. 2 兩種技術(shù)診斷結(jié)果比較

快速石蠟切片技術(shù)確診率為95.97%(119/124)， 其中惡性腫瘤105 例， 包括95 例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌， 5 例小葉癌， 3 例小細(xì)胞癌， 2 例黏液癌；良性腫瘤14 例， 均為乳腺纖維腺瘤。3 例未定性(有待常規(guī)石蠟切片證實(shí))， 腫瘤組織圖像不夠典型未能確診2 例， 漏診率為4.03%(5/124)。常規(guī)石蠟切片技術(shù)確診率為96.77%(120/124)，其中惡性腫瘤105 例， 包括95 例浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌， 5 例小葉癌， 3 例小細(xì)胞癌， 2 例黏液癌；良性腫瘤15 例， 均為乳腺纖維腺瘤。腫瘤組織圖像不夠典型未能確診4 例， 漏診率為3.23%(4/124)。兩種技術(shù)確診率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.115， P＞0.05)。

2. 3 圖像特征

經(jīng)快速石蠟切片技術(shù)進(jìn)行病理檢驗(yàn)， 鏡下顯示組織結(jié)構(gòu)清晰， 組織原有形態(tài)得以保持， 且細(xì)胞形態(tài)完整， 且胞核胞質(zhì)清晰， 切片較薄， 且較為完整， 染色清晰， 切片質(zhì)量接近常規(guī)石蠟切片。

3 討論

目前外科手術(shù)患者病理檢驗(yàn)中石蠟切片發(fā)揮重要作用，便于快速、準(zhǔn)確判斷病情， 指導(dǎo)治療方案制定。以往多經(jīng)加溫石蠟切片、冰凍切片技術(shù)行病理處理。但常規(guī)加溫石蠟切片具有制備步驟繁瑣、易收縮、組織易硬變等弊端；而相較于加溫石蠟切片， 冰凍石蠟切片診斷效果更佳， 但也具有易發(fā)生細(xì)胞腫脹、成本高、技術(shù)要求高等弊端。近年來(lái)， 人們開(kāi)始越來(lái)越多地關(guān)注術(shù)中病理檢驗(yàn)中快速石蠟切片技術(shù)的應(yīng)用， 認(rèn)為其能克服常規(guī)石蠟切片技術(shù)耗時(shí)長(zhǎng)、成本高等問(wèn)題，可盡快確定病理性質(zhì)， 指導(dǎo)治療方案制定［3-5］。

快速石蠟切片主要是經(jīng)由超聲迅速處理標(biāo)本進(jìn)行， 可縮短標(biāo)本制作時(shí)間， 且能避免標(biāo)本形態(tài)出現(xiàn)改變。此外， 以快速石蠟切片技術(shù)進(jìn)行病理檢驗(yàn)期間， 采用超聲波快速處理儀處理石蠟切片固定、浸蠟、脫水等環(huán)節(jié)， 并應(yīng)用微波輻射技術(shù)，可促使制作出的蠟片得以長(zhǎng)期保存， 不會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)理化性狀變化［6-8］。

本研究結(jié)果顯示， 快速石蠟切片技術(shù)確診率為95.97%(119/124)， 常規(guī)石蠟切片技術(shù)確診率為96.77%(120/124)?？焖偈炃衅校?3 例未定性(有待常規(guī)石蠟切片證實(shí))， 腫瘤組織圖像不夠典型未能確診2 例。分析可能與切除組織期間切取質(zhì)量未達(dá)標(biāo)準(zhǔn)， 切片過(guò)小， 或厚度不符標(biāo)準(zhǔn)， 脫水時(shí)間短等因素有關(guān)。而在圖像特征上， 快速石蠟切片鏡下顯示組織結(jié)構(gòu)清晰， 細(xì)胞形態(tài)完整， 且胞核胞質(zhì)清晰， 切片較薄， 且較為完整， 染色清晰， 切片質(zhì)量與常規(guī)石蠟切片相符。組織經(jīng)超聲處理后， 能保持柔韌性和外形， 還能克服常規(guī)石蠟切片易收縮、易變形等弊端。本研究結(jié)果顯示， 快速石蠟切片技術(shù)標(biāo)本制作時(shí)間為(42.01±5.26)min， 常規(guī)石蠟切片技術(shù)標(biāo)本制作時(shí)間為(1325.65±25.12)min， 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=556.950， P=0.000＜0.05)。分析是因快速石蠟切片技術(shù)可經(jīng)由超聲快速組織脫水機(jī)， 以超聲震蕩、恒溫控制技術(shù)促使組織及有機(jī)溶劑或預(yù)熔石蠟高速震蕩， 出現(xiàn)周期性縮張活動(dòng)， 以有機(jī)溶劑代替組織內(nèi)水分， 并促使預(yù)熔石蠟浸入組織內(nèi)時(shí)間縮短， 最大限度控制固定、脫水、浸蠟等操作時(shí)間， 縮短標(biāo)本制作時(shí)間， 滿足快速病理診斷需求。故快速石蠟切片技術(shù)具有操作時(shí)間短、圖像清晰、準(zhǔn)確率高等優(yōu)勢(shì)， 可作為手術(shù)病理檢驗(yàn)有效手段應(yīng)用于臨床。此外，快速石蠟切片操作中需注意以下問(wèn)題：①切片需快速完成，并確保切片大小適宜， 切片時(shí)盡量去除難以切除的鈣化組織， 以免影響診斷結(jié)果準(zhǔn)確性；②盡量選擇密封的容器進(jìn)行固定， 以便加快固定， 縮短操作時(shí)間；③合理安排脫水時(shí)間， 依據(jù)組織質(zhì)地、顏色等判斷是否結(jié)束脫水， 通常組織顏色蒼白、質(zhì)地疏松時(shí)， 可做脫水結(jié)束處理；④溫度盡量控制在78℃以下， 防止溫度過(guò)高或過(guò)低導(dǎo)致組織內(nèi)抗原、酶丟失， 影響檢驗(yàn)準(zhǔn)確性。

綜上所述， 病理檢驗(yàn)中快速石蠟切片技術(shù)應(yīng)用價(jià)值較高，可保持組織原有形態(tài)， 且細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整， 細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)清楚，診斷效果與常規(guī)石蠟切片技術(shù)相符， 還可縮短標(biāo)本制作時(shí)間，值得臨床推廣。