GPC-3聯(lián)合CK-19免疫組化檢測(cè)在肝細(xì)胞癌診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用

劉冰 楊帥 費(fèi)錫斌 宋健

摘要：目的? 研究磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（GPC-3）聯(lián)合細(xì)胞角蛋白-19（CK-19）免疫組化檢測(cè)在肝細(xì)胞癌診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法? 選擇2017年1月～2019年1月我院通過(guò)肝穿刺或外科手術(shù)獲取的肝癌標(biāo)本91例。所有標(biāo)本按照GPC-3及CK-19檢測(cè)流程處理，比較肝細(xì)胞癌（HCC）、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌（ICC）及肝細(xì)胞癌合并肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌（CHC）標(biāo)本中GPC-3及CK-19檢測(cè)陽(yáng)性率，及不同分化程度HCC的GPC-3及CK-19陽(yáng)性率。結(jié)果? HCC與CHC中GPC-3陽(yáng)性率高于ICC，ICC與CHC中CK-19陽(yáng)性率高于HCC，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;中、低分化的HCC標(biāo)本中GPC-3、CK-19陽(yáng)性率高于高分化HCC，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? 在肝細(xì)胞癌診斷及鑒別診斷中采取GPC-3聯(lián)合CK-19免疫組化檢測(cè)，可有效檢出HCC，并可與CHC及ICC進(jìn)行區(qū)分，在早期診斷中也具有一定應(yīng)用價(jià)值。

關(guān)鍵詞：肝細(xì)胞癌;磷脂酰肌醇蛋白多糖-3;細(xì)胞角蛋白-19

中圖分類號(hào)：R735.7? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.23.054

文章編號(hào)：1006-1959（2019）23-0169-02

Application of GPC-3 Combined with CK-19 Immunohistochemical Detection in Diagnosis and Differential Diagnosis of Hepatocellular Carcinoma

LIU Bing1，YANG Shuai1，F(xiàn)EI Xi-bin1，SONG Jian2

（1.Department of Biochemistry，Baodi District People's Hospital，Tianjin 301800，China;

2.Department of Immunology，Tianjin Central Hospital of Obstetrics and Gynecology，Tianjin 301800， China）

Abstract：Objective? To study the application value of phosphatidylinositol-3 （GPC-3） combined with cytokeratin-19 （CK-19） immunohistochemistry in the diagnosis and differential diagnosis of hepatocellular carcinoma. Methods? From January 2017 to January 2019， 91 cases of liver cancer specimens obtained by liver puncture or surgery in our hospital were selected.All specimens were processed according to the GPC-3 and CK-19 test procedures to compare hepatocellular carcinoma （HCC），Positive rate of GPC-3 and CK-19 in intrahepatic cholangiocarcinoma （ICC） and hepatocellular carcinoma combined with intrahepatic cholangiocarcinoma （CHC） specimens，and the positive rate of GPC-3 and CK-19 of different degrees of differentiation HCC.Results? The positive rate of GPC-3 and CK-19 in HCC and CHC was higher than that in ICC， the difference was statistically significant （P<0.05）. The positive rate of GPC-3 in medium and poorly differentiated HCC specimens was higher than that in well differentiated HCC. The positive rate of CK-19 in medium and poorly differentiated HCC specimens was higher than that in well differentiated HCC，the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion? GPC-3 combined with CK-19 immunohistochemistry in the diagnosis and differential diagnosis of hepatocellular carcinoma can effectively detect HCC and distinguish it from CHC and ICC， and it has certain application value in early diagnosis.

Key words：Hepatocellular carcinoma;Phosphatidylinositol-3;Cytokeratin-19

肝癌（liver cancer）是臨床較常見的惡性腫瘤之一，根據(jù)形態(tài)學(xué)及細(xì)胞遺傳學(xué)，可分為肝細(xì)胞癌（HCC）、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌（ICC）及肝細(xì)胞癌合并肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌（CHC）[1]。甲胎蛋白（AFP）檢測(cè)在肝癌診斷中應(yīng)用較為廣泛，但敏感性和特異性較低，常導(dǎo)致假陰性、假陽(yáng)性的診斷結(jié)果。因此，選用其他可有效檢出肝細(xì)胞的手段非常重要[2]。本研究采取磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（GPC-3）聯(lián)合細(xì)胞角蛋白-19（CK-19）免疫組檢測(cè)診斷HCC，探究此法在HCC診斷及鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 選擇2017年1月～2019年1月天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院通過(guò)肝穿刺或外科手術(shù)獲取的肝癌標(biāo)本91例，其中HCC 64例，ICC 19例，CHC 8例;高分化19例（HCC 16例、ICC 2例、CHC 1例），中分化55例（HCC 38例、ICC 12例、CHC 5例），低分化17例（HCC 13例、ICC 3例、CHC 1例），所有標(biāo)本均符合免疫組化檢測(cè)要求。

1.2方法? GPC-3：采用EnVision兩步法檢測(cè)，標(biāo)本切片均經(jīng)烤片及脫蠟，逐級(jí)乙醇從高到低至入水，再放進(jìn)過(guò)3%氧化氫溶液中浸泡5 min后去除，使用磷酸鹽緩沖液（PBS）浸3次，5 min/次，將標(biāo)本放進(jìn)檸檬酸緩沖液（pH：6）行高溫高壓修復(fù)，在高壓鍋噴氣后再加熱2 min，繼而改中火2 min，關(guān)火燜10 min，取出入冷水使溫度降至37℃，再用PBS重復(fù)上述操作，完畢后加入GPC-3一抗（鼠抗人單克隆單體），留置在4℃冰箱中經(jīng)一夜，再用PBS重復(fù)上述操作，DAB顯色，PBS終止染色，乙醇從低到高濃度逐級(jí)行脫水入二甲苯，最后封片。CK-19：高溫高壓修復(fù)后，在37℃行胃酶消化，時(shí)間為1 min，再加入GPC-3一抗（鼠抗人單克隆單體），其余步驟同GPC-3。

1.3評(píng)價(jià)指標(biāo)? GPC-3：呈細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞質(zhì)表達(dá)，陽(yáng)性：黃色、棕黃色，以計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞率作為評(píng)估其表達(dá)強(qiáng)度的標(biāo)準(zhǔn)，陰性：細(xì)胞陽(yáng)性率<10%;陽(yáng)性：細(xì)胞陽(yáng)性率≥10%。CK-19：陽(yáng)性：膽管上皮細(xì)胞質(zhì)呈黃色、棕黃色，表達(dá)強(qiáng)度評(píng)估同GPC-3。以上述標(biāo)準(zhǔn)評(píng)估各類標(biāo)本中GPC-3及CK-19檢測(cè)陽(yáng)性率（陽(yáng)性檢出數(shù)/檢測(cè)總數(shù)），以及不同分化程度HCC的GPC-3及CK-19陽(yáng)性率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料使用[n（%）]表示，采用？字2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1三類標(biāo)本GPC-3及CK-19檢測(cè)陽(yáng)性率比較? ?GPC-3主要在肝癌細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)上著色，即在肝癌細(xì)胞上著色，但在正常膽管細(xì)胞及肝細(xì)胞上無(wú)著色，而在ICC標(biāo)本中只發(fā)現(xiàn)CK-19在正常膽管細(xì)胞和癌細(xì)胞上著色，而在肝癌細(xì)胞上基本不著色，即HCC中CK-19顯示為陰性。HCC與CHC中GPC-3陽(yáng)性率高于ICC，ICC與CHC中CK-19陽(yáng)性率高于HCC，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2不同分化程度HCC的GPC-3及CK-19陽(yáng)性率? 中、低分化的HCC標(biāo)本中GPC-3陽(yáng)性率高于高分化HCC，中、低分化的HCC標(biāo)本中CK-19陽(yáng)性率高于高分化HCC，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 GPC-3聯(lián)合CK-19鑒別HCC、CHC及ICC? ? ? ? HCC：GPC-3陽(yáng)性或陰性，CK-19陰性;ICC：GPC-3陰性，CK-19陽(yáng)性;CHC：GPC-3陽(yáng)性，CK-19陽(yáng)性。以上述所得不同肝癌GPC-3、CK-19特點(diǎn)為鑒別標(biāo)準(zhǔn)，診斷HCC準(zhǔn)確率為93.75%（60/64），診斷ICC準(zhǔn)確率為89.47%（17/19），診斷CHC準(zhǔn)確率為87.50%（7/8）。

3討論

HCC、CHC及ICC是較難區(qū)分的三種肝腫瘤，其中HCC最為常見。不同類型的肝癌，治療方法及預(yù)后結(jié)局均有較大差異，故早期診斷及準(zhǔn)確鑒別診斷其病理類型非常重要。GPC-3屬于癌胚蛋白的一種，為肝癌標(biāo)志物，可經(jīng)糖基磷脂酰肌醇與細(xì)胞膜相連接，是影響細(xì)胞生長(zhǎng)及分化的重要物質(zhì)，其表達(dá)具有顯著的器官組織及分化時(shí)相特異性[3]。且其在丙肝晚期患者中陽(yáng)性率是100%，而在良性肝病及健康者中表達(dá)接近0，可作為診斷肝癌的重要指標(biāo)[4]。

王娟等[5]研究顯示，CK-19與GPC-3的表達(dá)可提高臨床對(duì)HCC、CHC及ICC診斷的敏感性及特異性的結(jié)論。本研究結(jié)果顯示，GPC-3主要在肝癌細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)上著色，即在肝癌細(xì)胞上著色，但在正常膽管細(xì)胞及肝細(xì)胞上無(wú)著色，而在ICC標(biāo)本中只發(fā)現(xiàn)CK-19在正常膽管細(xì)胞和癌細(xì)胞上著色，而在肝癌細(xì)胞上基本不著色，即HCC中CK-19顯示為陰性。此外，HCC標(biāo)本的GPC-3陽(yáng)性檢出率超過(guò)80%，而HCC標(biāo)本的CK-19檢測(cè)結(jié)果全部為陰性，但在CHC及ICC中陽(yáng)性率超過(guò)90%，表明HCC具有CK-19陰性而GPC-3多為陽(yáng)性的特點(diǎn)，據(jù)此可將其與CHC及ICC進(jìn)行區(qū)分。同時(shí)中、低分化的HCC標(biāo)本中GPC-3陽(yáng)性率高于高分化HCC，中、低分化HCC標(biāo)本中CK-19陽(yáng)性率高于高分化HCC，表明CK-19與GPC-3在中低分化HCC中陽(yáng)性檢出率均較高，且高于高分化HCC，故CK-19與GPC-3在HCC早期診斷中具有一定價(jià)值，與既往研究結(jié)果一致。

綜上所述，在肝細(xì)胞癌診斷及鑒別診斷中采取GPC-3聯(lián)合CK-19免疫組化檢測(cè)，可有效檢出HCC并可與CHC及ICC進(jìn)行區(qū)分，且在早期診斷中也具有一定應(yīng)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]溫實(shí)，戴新武，黃麗娟，等.KR1B10與GPC-3免疫組化檢測(cè)對(duì)肝細(xì)胞肝癌的診斷價(jià)值[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，15（32）：6263-6265.

[2]劉沖，唐浩，鄧霖，等.血清miRNA-186，miRNA-30c在肝細(xì)胞性癌中診斷價(jià)值的研究[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，31（6）：44-47.

[3]周新剛，張亮，王鵬，等.Arginase-1聯(lián)合Glypican-3在肝細(xì)胞肝癌和非肝臟來(lái)源腫瘤鑒別診斷中的意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2017，33（8）：841-846.

[4]晏文強(qiáng)，謝明水，劉楊.GP73、AFP-L3與GPC-3聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床價(jià)值[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2015，19（10）：1651-1654.

[5]王娟，張曙光，孫穎，等.免疫組化檢測(cè)GPC-3與CK-19在肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，16（14）：50-53.

收稿日期：2019-9-4;修回日期：2019-9-11

編輯/馮清亮