飼料中抗氧化劑的應(yīng)用及檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

王蘋(píng)蘋(píng)，武笑穎，劉忠強(qiáng)，康兆廣

(山東省產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)研究院，山東濟(jì)南250102)

抗氧化劑作為一種重要的飼料添加劑，也受到人們廣泛的關(guān)注。飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如油脂、脂溶性維生素、胡蘿卜及類(lèi)胡蘿卜素等物質(zhì)在運(yùn)輸存儲(chǔ)過(guò)程中易發(fā)生氧化，可導(dǎo)致飼料酸敗變質(zhì)，長(zhǎng)期攝入這些酸敗飼料會(huì)造成維生素缺乏癥，肉產(chǎn)品貯藏期間發(fā)生肌肉滲出性損失，還會(huì)影響動(dòng)物生產(chǎn)性能，如蛋雞產(chǎn)蛋率急劇下降等。抗氧化劑是一類(lèi)捕獲并清除自由基的物質(zhì)，可以防止或延緩食品及飼料的氧化。飼料中添加抗氧化劑可以提高產(chǎn)品穩(wěn)定性，延長(zhǎng)保質(zhì)期，降低運(yùn)輸成本。市場(chǎng)上抗氧化劑種類(lèi)繁多，給使用及研究人員帶來(lái)了較大的困擾，本文系統(tǒng)分析了飼料中常用抗氧化劑的種類(lèi)及作用，對(duì)飼料抗氧化劑研究提供相關(guān)支持。

飼料中被廣泛使用的抗氧化劑多為人工合成的抗氧化劑，此類(lèi)抗氧化劑雖然在飼料保質(zhì)方面有很好的優(yōu)勢(shì)，但是飼料中抗氧化劑的亂用、濫用的現(xiàn)象成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題，這些過(guò)量投入的抗氧化劑，隨著食物鏈對(duì)人產(chǎn)生一定的危害?，F(xiàn)有研究表明抗氧化劑叔丁基對(duì)甲苯酚(BHT)能抑制人體呼吸酶活性，使肝臟微粒體酶活性增加，其轉(zhuǎn)化產(chǎn)物BHT- 醌甲基化產(chǎn)物疑是BHT 引起組織毒性的主要物質(zhì)；目前，常見(jiàn)的檢測(cè)飼料中抗氧化劑的方法有：高效液相色譜法、氣相色譜法、高效毛細(xì)管電泳法等，本文總結(jié)了飼料中抗氧化劑常用的檢測(cè)手段，并對(duì)飼料中抗氧化劑檢測(cè)方法存在的問(wèn)題提出了自己的見(jiàn)解。

1 抗氧化劑分類(lèi)

1.1 天然抗氧化劑，飼料中常見(jiàn)天然抗氧化劑主要有胡蘿卜素、維生素C、維生素E、茶多酚。維生素E 是較早被發(fā)現(xiàn)的，目前唯一工業(yè)化生產(chǎn)的飼料天然抗氧化劑，其對(duì)氧特別敏感，極易被氧化，因此可保護(hù)其他易被氧化的物質(zhì)不被破壞，抗氧化效果極強(qiáng)[8]。這些天然抗氧化劑具有較好的抗氧化能力，飼用安全性比化學(xué)合成抗氧化劑要好，來(lái)源廣泛，綠色環(huán)保。天然抗氧化劑在食品飼料等各領(lǐng)域的使用具有廣闊的發(fā)展空間，順應(yīng)時(shí)代的要求。

1.2 化學(xué)合成抗氧化劑，目前市面上常用的化學(xué)合成抗氧化劑有二叔丁基羥基甲苯(BHT)、叔丁基羥基茴香醚(BHA)、叔丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)、乙氧基喹啉(EQ)、沒(méi)食子酸丙酯(PG)。不同抗氧化劑有不同的特性，不同的抗氧化效果。

2 抗氧化劑檢測(cè)方法

2.1 飼料中抗氧化劑前處理方法

2.1.1 固相萃取法 固相萃取法提取出的溶液較干凈，干擾較小，降低了儀器的污染程度，但是步驟繁瑣，費(fèi)時(shí)。張曼、何佳等利用乙腈提取飼料中抗氧化劑，提取液通過(guò)C18 柱凈化后氮吹濃縮上機(jī)，得到較好的結(jié)果，回收率在84～106%范圍內(nèi)[11]。

2.1.2 凝膠色譜法 凝膠色譜法操作簡(jiǎn)單，選擇性較好，特別適用于油脂含量較高飼料的檢測(cè)，但是凝膠色譜儀器較貴，且樣品處理耗時(shí)較長(zhǎng)，不太適合大批量樣品的檢測(cè)。楊曉鳳利用乙腈提取飼料中抗氧化劑，提取液經(jīng)凝膠色譜凈化，去除油脂及大部分色素，BHA、BHT、EQ 三者回收率均大于95%。

2.1.3 有機(jī)溶劑直接提取法 有機(jī)溶劑直接提取的前處理方法簡(jiǎn)單快捷，適用于大批量樣品檢測(cè)，但提取出的成分復(fù)雜，干擾較多。陳集元用無(wú)水乙醇直接提取水產(chǎn)配合飼料中的合成抗氧化劑，回收率為86.5～97.5%，得到較好的檢測(cè)結(jié)果[13]。董茂鋒、白冰等利用不同提取液(異丙醇、乙醇、正己烷、乙腈)直接提取飼料中BHT 和EQ 兩種抗氧化劑，發(fā)現(xiàn)異丙醇提取效果較好。

2.2 飼料中抗氧化劑檢測(cè)方法 抗氧化劑的檢測(cè)方法有很多如分光光度法、電化學(xué)分析法、薄層色譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜法- 質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜法、氣相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法、高效毛細(xì)管電泳法等。但是目前用于飼料中抗氧化劑檢測(cè)的方法多為高效液相色譜法、高效液相色譜法- 質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜法、高效毛細(xì)管電泳法。

2.2.1 高效毛細(xì)管電泳法 高效毛細(xì)管電泳法具有效率高，消耗少、成本低、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，但是對(duì)PH 值要求較高。Delgado-Zamarreno 和Boyce 在堿性條件下實(shí)現(xiàn)了食品中抗氧化劑的分離檢測(cè)。堿性環(huán)境會(huì)降低毛細(xì)管的使用壽命，龐軍、劉文紅等從緩沖液的種類(lèi)，緩沖液的濃度以及pH 等多方面研究，找到了合適的分離條件，以25 mmol/L 硼砂- 硼酸（Na2B4O7-H3BO3）和10 mmol/L 十二烷基硫酸鈉（SDS）的混合液（pH=7.00）作為緩沖液，采用高效毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜法測(cè)定了飼料中抗氧化劑，得到了較好的線(xiàn)性關(guān)系，平均回收率為81.8～102.0%。

2.2.2 高效液相色譜法 高效液相色譜法在檢測(cè)領(lǐng)域被廣泛使用，具有靈敏度高、分析速度快、重復(fù)性好、精密度高等優(yōu)點(diǎn)。謝海燕、姜德銘等利用甲醇超聲一次提取樣品中的BHA、BHT,并使用反相高效液相色譜- 二極管陣列測(cè)定含量。校準(zhǔn)曲線(xiàn)在1.0～50μg/mL 范圍內(nèi),不同類(lèi)型的樣品的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差＜4.70%,回收率在90%～103%之間,樣品最低檢出限在0.002～0.005 g/kg 之間，實(shí)現(xiàn)了及飼料中BHA、BHT 的快速檢測(cè)；楊春林、李佳峻等建立了同時(shí)測(cè)定飼料中4 種酚類(lèi)抗氧化劑（沒(méi)食子酸丙酯、丁基羥基茴香醚、二丁基羥基甲苯、特丁基對(duì)苯二酚）和3 種尼泊金酯類(lèi)防腐劑（尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯）的高效液相色譜方法。樣品以甲醇- 乙腈溶液（30∶70，V/V）超聲提取后經(jīng)C18 柱（4.6 mm×250 mm，5μm）分離，用甲醇/ 乙酸銨溶（pH=3.5）作流動(dòng)相梯度洗脫，分別在波長(zhǎng)256 nm 和280 nm 進(jìn)行檢測(cè)，7 種物質(zhì)的線(xiàn)性范圍為0.1～100.0μg/mL，檢出限為0.027 ～0.102 mg/L，平均回收率為79.62%～112.29%，取得較好的結(jié)果。

2.2.3 液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法 液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用法體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜的優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，具有分析廣、分析能力強(qiáng)、定性分析可靠、靈敏度高、分析時(shí)間快、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)。黃彪、劉文靜等了應(yīng)用超高效液相色譜- 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)同時(shí)檢測(cè)飼料中8 種抗氧化劑，優(yōu)化飼料樣品的前處理方法，梯度洗脫使用水和乙腈流動(dòng)相運(yùn)行，電噴霧離子源電離、正負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式質(zhì)譜對(duì)檢測(cè)對(duì)象進(jìn)行分析。方法檢出限為0.005～0.1 mg/kg，定量限0.01～0.2 mg/kg;飼料中的8 種抗氧化劑顯現(xiàn)出良好的線(xiàn)性關(guān)系，在低、中、高三個(gè)不同濃度梯度的添加平均加標(biāo)回收率為76.2%～102.8%，方法能適合檢測(cè)抗氧劑的需要。

2.2.4 氣相色譜法 氣相色譜法是一個(gè)分析速度快和分離效率高的分離分析方法，操作簡(jiǎn)單，被廣泛應(yīng)用于飼料中抗氧化劑的檢測(cè)。陳集元采用乙醇提取，經(jīng)毛細(xì)管相色譜柱（ZB-5，30m×0.32mm×0.25um）分離，建立了同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)配合飼料中五種合成抗氧化劑的氣相色譜方法，并采用氣質(zhì)確證。方法研究結(jié)果表明，目標(biāo)待測(cè)抗氧在2-40 ug/mL 濃度范圍內(nèi)具有良好線(xiàn)性關(guān)系，方法定量限均低于5mg/kg；回收率為86.5～97.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.26～4.85%，該方法可行。吳玉鑾，侯向昶等采用乙醚直接提取法建立了氣相色譜法同時(shí)測(cè)定飼料添加劑中三種抗氧化劑（BHT、BHA、TBHQ）的方法。校正曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍分別為0.2～50.0mg/mL、0.2～40.0mg/mL、0.7～70.0mg/mL，回收率在92.1～98.2%，得到較好的結(jié)果。