多重PCR檢測(cè)技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中運(yùn)用

□ 王 璐 張 文 高澤岳 陳 晨 王明微 吉林省安信食品技術(shù)服務(wù)有限責(zé)任公司

在人們生活水平不斷提升的背景下，人們對(duì)于食品的需求量也變得越來(lái)越大，如果食品中含有微生物，將會(huì)引發(fā)食物中毒等問題，對(duì)人類的身體健康產(chǎn)生嚴(yán)重威脅。面對(duì)此種情況，我國(guó)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對(duì)于食品微生物的檢測(cè)，而文章主要對(duì)多重PCR檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行探討，了解該技術(shù)的具體應(yīng)用以及其本身所存在的不足，并在未來(lái)加以改進(jìn)。下面筆者就針對(duì)多重PCR檢測(cè)技術(shù)的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)闡述。

1 多重PCR檢測(cè)技術(shù)的概述

PCR中文名稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其主要是指在體外條件下，模板DNA在聚合酶的作用下進(jìn)行復(fù)制的技術(shù)，其過(guò)程主要為變性、退火與延伸。雙鏈DNA通過(guò)熱變性會(huì)形成單鏈DNA，然后其和引物進(jìn)行結(jié)合，受到聚合酶的作用，核苷酸順著DNA單鏈逐漸延伸最終形成雙鏈，再將其當(dāng)作模板產(chǎn)生新的DNA雙鏈，如此不斷循環(huán)?？傮w來(lái)說(shuō)，多重PCR在某一反應(yīng)體系之中加入超過(guò)兩對(duì)引物（包括兩對(duì)），從而產(chǎn)生更多的DNA序列。

2 多重PCR檢測(cè)技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中運(yùn)用

在食品微生物檢測(cè)中應(yīng)用多重PCR技術(shù)能夠起到更好的檢測(cè)效果，該技術(shù)主要是應(yīng)用在以下3個(gè)方面。

2.1 在檢測(cè)病原微生物時(shí)應(yīng)用

病原微生物主要分為3種類型。①沙門氏菌。該病菌極容易受到外界因素的影響，從而對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性產(chǎn)生非常大的影響。利用多重PCR技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)則能夠獲得良好效果，對(duì)突發(fā)情況進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定，有效提升檢測(cè)率。②金黃色葡萄球菌。該病菌在繁殖過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生腸毒素SE，從而引發(fā)食物中毒，該病菌存在蔬菜、發(fā)酵肉或是生肉之中。③腸出血性大腸桿菌，該病菌也會(huì)產(chǎn)生引發(fā)食物中毒，在對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)時(shí)主要是將鞭毛基因等視為目的基因[1]。

2.2 在檢測(cè)非致病菌時(shí)應(yīng)用

病菌和乳酸菌混合在一起，將會(huì)大大抑制病菌的生長(zhǎng)，而這也說(shuō)明食物將要腐敗。對(duì)于真空包裝的食品來(lái)說(shuō)，其中常常含有一定量的乳酸菌，能夠有效抑制細(xì)菌的成長(zhǎng)，通過(guò)利用多重PCR技術(shù)能夠?qū)φ婵瞻b的食品是否發(fā)生了質(zhì)變與腐敗進(jìn)行檢測(cè)。

2.3 在檢測(cè)環(huán)境微生物時(shí)應(yīng)用

在外界環(huán)境中存在各種各樣的細(xì)菌，其中多重耐藥鮑氏桿菌將會(huì)對(duì)食品安全產(chǎn)生直接影響，而且黃曲霉所產(chǎn)生的毒素也會(huì)造成癌變。根據(jù)多重PCR技術(shù)的具體使用情況來(lái)看，該技術(shù)在黃曲霉、不動(dòng)桿菌等到方面的檢測(cè)上具有非常高的準(zhǔn)確性。

3 多重PCR檢測(cè)技術(shù)的不足與改進(jìn)

雖然多重PCR技術(shù)在應(yīng)用于檢測(cè)食品微生物上能夠產(chǎn)生明顯作用，但是其本身也存在著明顯的不足，主要表現(xiàn)在引物之間會(huì)出現(xiàn)相互抑制的情況，與非靶序列進(jìn)行結(jié)合會(huì)產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增[2]。食品成分相對(duì)較為復(fù)雜或微生物含量較低，會(huì)對(duì)樣品產(chǎn)生直接影響，從而導(dǎo)致靈敏度不斷下降，甚至是形成假陰性結(jié)果，對(duì)于該檢測(cè)技術(shù)的普及應(yīng)用是非常不利的。

在對(duì)多重PCR檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行改善時(shí)，相關(guān)研究人員為了對(duì)反應(yīng)條件和多重PCR體系進(jìn)行優(yōu)化，借助免疫磁珠吸附技術(shù)以便獲得更為理想的前處理效果，并降低各種抑制因子的作用。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR可以有效免除后處理，其本身?yè)碛懈咝А⑻禺愐约皽?zhǔn)確等優(yōu)勢(shì)，然而因?yàn)樵O(shè)備成本過(guò)高，并且最終檢測(cè)結(jié)果還有可能受到其他方面因素的影響，如外源DNA，所以需要簡(jiǎn)化樣品處理過(guò)程，最大程度降低檢測(cè)成本[3]。利用變性梯度凝膠電泳可將堿基數(shù)不同的DNA分離開，然后根據(jù)DNA分布情況等了解微生物，如此操作不僅變得更加簡(jiǎn)單，而且還具有非常高的準(zhǔn)確性。另外，由于分析的樣品容量相對(duì)較小，所以只能夠應(yīng)用于相對(duì)較小的DNA片段的分析中，并且在制備樣品時(shí)圖譜條帶會(huì)發(fā)生改變。

4 總結(jié)

總之，多重PCR檢測(cè)技術(shù)在應(yīng)用時(shí)具有非常高的準(zhǔn)確率，檢測(cè)速度也更快，而且具有良好的特異性，將其應(yīng)用于非致病、環(huán)境以及食品病原微生物3種類型中能夠起到良好的作用，因此該檢測(cè)技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中擁有良好的發(fā)展前景。但是，多重PCR技術(shù)也存在很多不足之處，為了讓該技術(shù)在未來(lái)能夠得到更好的應(yīng)用，需要相關(guān)研究人員對(duì)其進(jìn)行改進(jìn)，提高該技術(shù)在食品微生物檢測(cè)中的效果。