肺移植缺血再灌注損傷肺保護的研究

姜文波，劉爭楊，楊 睿，姜平秀

（大慶龍南醫(yī)院，黑龍江 大慶 163453）

肺移植手術已成為治療終末期肺病的唯一有效手段。盡管已有許多改進措施，做為肺移植術后常見并發(fā)癥，缺血再灌注損傷（IRI）或原發(fā)性移植肺衰竭仍是導致手術失敗的主要原因之一。IRI是急性肺損傷的一種，通過研究缺血再灌注肺損傷的發(fā)生機制、所能采取的肺保護措施的研究（自由基清除劑的應用、鈣拮抗劑的應用、與NO有關的炎癥介質(zhì)等），為臨床肺移植在缺血再灌注損傷的控制上提供啟示和借鑒，進而提供理論依據(jù)，更為肺移植術技術的逐漸完善奠定基礎。

1 研究內(nèi)容

應用大鼠離體肺灌注模型，依據(jù)肺移植術后再灌注肺損傷的可能機制，給予相關預處理，與對照組比較得出肺缺血再灌注損傷的研究可能預期結(jié)果。依據(jù)現(xiàn)有條件，我們將對以下三項內(nèi)容進行試驗及研究。

（1）研究應用自由基清除劑（free radical scavenger，F(xiàn)RS）后對肺移植術后缺血再灌注損傷是否有減輕；（2）研究鈣拮抗劑的運用后對肺移植術后缺血再灌注損傷是否有緩解；（3）研究通過補充外來源NO（靜脈滴注硝酸甘油或NO氣體），對于肺移植術后缺血再灌注損傷是否有緩解。

2 擬解決的問題

（1）正確建立合理大鼠的離體肺灌注模型；（2）病理切片制作技術，western-blot技術，酶聯(lián)免疫吸附試驗技術等的應用；（3）小動物呼吸機的使用，保證實驗動物的存活率，減少或避免因操作失誤導致的失敗。

3 創(chuàng)新點

缺血再灌注損傷在全國范圍內(nèi)已研究很多，但我省目前仍為空缺（經(jīng)過查新報告可證明），對于肺移植術后肺缺血再灌注損傷的研究目前省內(nèi)亦是空缺，現(xiàn)已證明肺移植術后影響術后早期肺功能的主要因素。

4 研究方法

4.1 實驗動物

選用實驗動物中心提供的SD雄性大鼠32只，體重250～300 g，隨機配對成16對。

4.2 對照組分組

自由基清除劑（維生素C）組、鈣通道拮抗劑（地爾硫卓）組、補充外源性NO（硝酸甘油和NO氣體）組

4.3 檢測指標和方法

（1）動脈血氣取移植肺靜脈血0.3 mL，行血氣分析。（2）病理（冰凍）切片：經(jīng)固定、沉糖、冰凍、切片、染色、封片等處理后，觀察不同組別雙肺組織光鏡下形態(tài)學改變。光鏡下觀察肺泡的結(jié)構、中性粒細胞的浸潤、毛細血管內(nèi)紅細胞的數(shù)目以及肺泡水腫、出血、滲出的程度等。（3）濕干重比（W/D）測定肺組織用電子天平稱重為濕重。60℃烘96 h后稱重為干重，計算濕干重比。（4）蛋白印跡（Western blot）分析：取不同組別移植左肺組織，測定不同組別肺泡表面活性物質(zhì)蛋白（SPA、SPB）、細胞凋亡指標（bcl-2、bax）的改變。（5）酶聯(lián)免疫吸附實驗：檢測不同組別移植術后的左肺組織氧化應激指標（SOD、MDA）和炎性因子（TNF-a，IL-6）的變化及不同。

5 實驗方案

5.1 實驗動物

選用實驗動物中心提供的SD雄性大鼠32只，體重250～300 g，實驗前12小時禁食水。

5.2 動物分組

分四組（如前述）。

5.3 動物操作及取材

（1）模型建立：動物麻醉，術中呼吸管理，游離供體左肺動脈、靜脈，血管腔內(nèi)分別置人18號（內(nèi)徑1.3ram）、16號（內(nèi)徑1.5 mm）的套管，外用6～0絲線結(jié)扎固定。游離左主支氣管，于隆凸處結(jié)扎，切除氣管及心臟、右肺組織，左肺于4℃的Euro-collins溶液保存4 h（自取下供體心肺組織開始計時），直至移植。移植前于近結(jié)扎處剪斷支氣管，置人塑料軟管（內(nèi)徑1.6 mm）外用6～0絲線固定。

（2）受體手術：麻醉及氣管插管均同供體，吸人體積百分比為100的氧氣。大鼠右側(cè)臥位于手術臺上，于第5肋間進胸，暴露并切斷左肺下韌帶，暴露左肺門，游離左肺動、靜脈和左主支氣管，以3～0絲線盡量靠遠端結(jié)扎左主支氣管、左肺動脈及左肺靜脈的2個分支。供體肺各套管分別套人相應的結(jié)構，以6～0絲線固定套管。套管順序為先動脈，后支氣管，最后靜脈。剪斷受體肺門遠端，剪下受體之左肺。依次開放靜脈、動脈和支氣管。

6 統(tǒng)計學方法

所有數(shù)據(jù)均以（±s表示，采用SPSS 13.0軟件包進行統(tǒng)計學分析。驗收指標：應用大鼠離體肺灌注模型，依據(jù)肺移植術后再灌注肺損傷的可能機制，分別應用自由基清除劑（free radical scavenger，F(xiàn)RS）、鈣通道拮抗劑（地爾硫卓）、NO（硝酸甘油或NO氣體），通過得出結(jié)論了解應用自由基清除劑對肺移植術后缺血再灌注損傷的影響。