羚黃寶兒丸包衣工藝的優(yōu)化及制劑穩(wěn)定性研究Δ

陳麗斯，曾利杰，彭紅英，江 濤，陳曉堅

（廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司，廣州 510130）

羚黃寶兒丸由麝香、黃連、羚羊角、甘草、冰片、人參、人工牛黃、豬膽膏、丁香等9味中藥制成；該藥為銀白色包衣微丸，味苦、性涼，具清熱熄風(fēng)、除痰定驚、開竅醒神之功效[1]，可用于小兒發(fā)熱、驚哭夜啼、痰熱咳嗽、泄瀉、脾胃虛弱及消化不良等的治療[2]。該藥含有麝香、冰片等成分，如貯存不當(dāng)，易造成其中揮發(fā)性成分的流失而影響藥品質(zhì)量、降低藥效，故原制劑采用鋁箔包衣。雖然鋁元素曾被認(rèn)為是一種安全的元素，但隨著醫(yī)學(xué)的深入發(fā)展，人們逐漸意識到鋁元素的毒性[3]。鋁元素不會對人體產(chǎn)生急性毒性，但其攝入體內(nèi)后長期蓄積會引發(fā)嚴(yán)重的慢性毒性，如阿爾茨海默病、慢性腎功能衰竭等[4]。該藥作為兒童用藥，更應(yīng)避免使用鋁箔包衣。另外，鋁箔難溶于液體，只能采用傳統(tǒng)的包衣鍋滾轉(zhuǎn)包衣，但包衣鍋存在干燥效率低、能源浪費大、操作耗時長等缺點[5]。為此，本研究鑒于冰片的揮發(fā)性及鋁箔包衣的種種弊端，改用流化床薄膜包衣，并對工藝進行優(yōu)化，同時參考上述相關(guān)文獻[6-11]采用氣相色譜法考察了制劑的穩(wěn)定性，旨在為該藥的劑型完善提供參考。

1 材料

1.1 儀器

FLP-5型流化床包衣機（常州市佳發(fā)制粒干燥設(shè)備有限公司）；BT-300型蠕動泵（重慶杰恒蠕動泵有限公司）；BS400S-WE1型電子天平（德國Sartorius公司）；6890型氣相色譜儀，包括氫火焰離子化檢測器等（美國Agilent公司）；KQ-600DE型超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

龍腦對照品（批號：110881-201508，純度：96.8%）、水楊酸甲酯對照品（內(nèi)標(biāo)，批號：110707-201614，純度：100%）均由中國食品藥品檢定研究院提供；包衣材料Opadry 290F690003（上?？房蛋录夹g(shù)有限公司，批號：SH562240）；羚黃寶兒丸（鋁箔包衣，廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司，批號：S07014、S07015、S07016，規(guī)格：60丸/瓶）；羚黃寶兒丸（薄膜包衣，廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司，批號：S07017、S07018、S07019，規(guī)格：60丸/瓶）；羚黃寶兒未包衣素丸（廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司，批號：S07011、S07012、S07013）；其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 包衣工藝的優(yōu)化

取Opadry中藥薄膜包衣材料適量，加水制成濃度為12%的包衣液，采用流化床包衣機對羚黃寶兒未包衣素丸（投料量750 g）進行包衣。

2.1.1 包衣液噴入方式 流化床包衣機的包衣液噴入方式主要有頂噴、側(cè)噴和底噴3種方式。選擇進風(fēng)溫度為50℃、霧化壓力為0.20 MPa、蠕動泵轉(zhuǎn)速為5 r/min、引風(fēng)頻率為25 Hz、包衣理論增質(zhì)量比例為4%，以包衣微丸色澤是否均勻、粘丸情況、包衣液粘壁情況及合格丸收率為指標(biāo)，考察不同包衣液噴入方式的薄膜包衣效果。結(jié)果，包衣液噴入方式為底噴時，包衣微丸色澤均勻，基本無粘丸，未見包衣液粘壁，合格丸收率為96.0%，優(yōu)于其他噴入方式。故確定包衣液噴入方式為底噴。

2.1.2 進風(fēng)溫度 流化床溫度需通過調(diào)節(jié)進風(fēng)溫度來控制。流化床溫度過低，易導(dǎo)致包衣液不能及時揮干而使物料過度潤濕，部分物料黏附在器壁上不能流化，從而易造成微丸粘連而起團；流化床溫度過高，除易導(dǎo)致包衣液被過早揮干而不能有效包衣外，還可能引起溫度敏感型物料性質(zhì)的變化。參照鋁箔包衣樣品的工藝干燥溫度≤60℃，選擇包衣液噴入方式為底噴、霧化壓力為0.20 MPa、蠕動泵轉(zhuǎn)速為5 r/min、引風(fēng)頻率為25 Hz、包衣理論增質(zhì)量比例為4%，以包衣微丸色澤是否均勻、粘丸情況、包衣液粘壁情況及合格丸收率為指標(biāo)，考察不同進風(fēng)溫度（40、45、50、60℃）的薄膜包衣效果。結(jié)果，進風(fēng)溫度為50℃時，包衣微丸色澤均勻，基本無粘丸，未見包衣液粘壁，合格丸收率為97.0%，優(yōu)于其他溫度條件。故確定進風(fēng)溫度為50℃。

2.1.3 霧化壓力 霧化是通過氣流將液體高度分散為液滴的過程，目的在于增加包衣液與物料的接觸面積。霧化壓力過小，會使包衣液的液滴太大，在微丸表面鋪展時易發(fā)生衣膜不均勻，不能達(dá)到良好的包衣效果；霧化壓力過大，則微丸易碰撞頂部篩網(wǎng)，導(dǎo)致丸體碎裂[12]。選擇包衣液噴入方式為底噴、進風(fēng)溫度為50℃、蠕動泵轉(zhuǎn)速為5 r/min、引風(fēng)頻率為25 Hz、包衣理論增質(zhì)量比例為4%，以包衣微丸色澤是否均勻、粘丸情況、包衣液粘壁情況及合格丸收率為指標(biāo)，考察不同霧化壓力（0.10、0.15、0.20、0.25 MPa）的薄膜包衣效果。結(jié)果，霧化壓力為0.20 MPa時，包衣微丸色澤均勻，基本無粘丸，未見包衣液粘壁，合格丸收率為97.8%，優(yōu)于其他壓力條件。故確定霧化壓力為0.20 MPa。

2.1.4 蠕動泵轉(zhuǎn)速 蠕動泵轉(zhuǎn)速決定包衣液的加入速率。選擇包衣液噴入方式為底噴、進風(fēng)溫度為50℃、霧化壓力為0.20 MPa、引風(fēng)頻率為25 Hz、包衣理論增質(zhì)量比例為4%，以包衣微丸色澤是否均勻、粘丸情況、包衣液粘壁情況及合格丸收率為指標(biāo)，考察不同蠕動泵轉(zhuǎn)速（2、3、4、5 r/min）的薄膜包衣效果。結(jié)果，蠕動泵轉(zhuǎn)速為5 r/min時，包衣微丸色澤均勻，基本無粘丸，未見包衣液粘壁，合格丸收率為97.1%，優(yōu)于其他轉(zhuǎn)速條件。故確定蠕動泵轉(zhuǎn)速為5 r/min。

2.1.5 引風(fēng)頻率 引風(fēng)頻率決定流化床內(nèi)流化氣體的強弱。流化氣體是流化床內(nèi)微丸流化、微丸干燥熱源及帶走水分的載體[13]。在流化包衣技術(shù)中，適當(dāng)?shù)牧骰瘹怏w可保證流化床層內(nèi)物料始終保持良好的沸騰流化狀態(tài)。選擇包衣液噴入方式為底噴、進風(fēng)溫度為50℃、霧化壓力為0.20 MPa、蠕動泵轉(zhuǎn)速為5 r/min，包衣理論增質(zhì)量比例為4%，以包衣微丸色澤是否均勻、粘丸情況、包衣液粘壁情況及合格丸收率為指標(biāo)，考察不同引風(fēng)頻率（20、25、30、35 Hz）的薄膜包衣效果。結(jié)果，引風(fēng)頻率為25 Hz時，包衣微丸色澤均勻，基本無粘丸，未見包衣液粘壁，合格丸收率為98.0%，優(yōu)于其他頻率條件。故確定引風(fēng)頻率為25 Hz。

2.1.6 包衣理論增質(zhì)量比例 選擇包衣液噴入方式為底噴、進風(fēng)溫度為50℃、霧化壓力為0.20 MPa、蠕動泵轉(zhuǎn)速為5 r/min、引風(fēng)頻率為25 Hz，考察不同包衣理論增質(zhì)量比例（2%、3%、4%）的合格丸收率及對微丸外觀均勻度、引濕性、溶散時限、龍腦含量的影響。結(jié)果，合格丸收率分別為98.0%、97.1%、97.6%。當(dāng)包衣理論增質(zhì)量比例為2%時，包衣微丸外觀均勻度最差；當(dāng)包衣理論增質(zhì)量比例為3%、4%時，包衣微丸外觀均勻度基本一致。不同包衣理論增質(zhì)量比例條件下所得微丸的引濕性及溶散時限無明顯差異。通過烘箱法（60℃）考察不同包衣理論增質(zhì)量比例對微丸中揮發(fā)性成分的影響，結(jié)果顯示，烘9 h時取樣測定，不同包衣理論增質(zhì)量比例下所得微丸中龍腦含量接近；烘24 h時取樣測定，包衣理論增質(zhì)量比例為2%時所得微丸中龍腦含量降低明顯，而包衣理論增質(zhì)量比例為3%、4%時所得微丸中龍腦含量無明顯差別。綜合考慮，確定包衣理論增質(zhì)量比例為3%。

2.1.7 最優(yōu)包衣工藝 確定最優(yōu)包衣工藝：包衣液濃度為12%，包衣液噴入方式為底噴，進風(fēng)溫度為50℃，霧化壓力為0.20 MPa，蠕動泵轉(zhuǎn)速為5 r/min，引風(fēng)頻率為25 Hz，包衣理論增質(zhì)量比例為3%。按此包衣工藝條件所制得微丸的外觀圓整、色澤均勻。

2.2 制劑穩(wěn)定性研究

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Technologies DB-WAX（30 m×0.25 mm，0.50 μm）；升溫程序：初始溫度為130 ℃，保持20 min后，以9℃/min升溫至200℃，保持8 min；進樣口溫度：220℃；檢測器：氫火焰離子化檢測器；檢測器溫度：250 ℃；進樣量：1 μL。

2.2.2 混合對照品溶液的制備 精密稱取龍腦對照品、水楊酸甲酯對照品各適量，加乙酸乙酯溶解，制成含龍腦、水楊酸甲酯質(zhì)量濃度均為0.1 mg/mL的混合對照品溶液。

2.2.3 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取水楊酸甲酯對照品適量，加乙酸乙酯溶解，制成質(zhì)量濃度為2.5 mg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2.4 供試品溶液的制備 取樣品1.0 g，研成細(xì)粉，過65目篩，精密稱取0.5 g，置于25 mL量瓶中，加“2.2.3”項下內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加甲醇20 mL，超聲（功率：600 W，頻率：40 kHz）處理30 min，放冷，加甲醇定容，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.5 陰性對照溶液的制備 按處方比例制備不含冰片的陰性樣品，再按“2.2.4”項下方法制備陰性對照溶液。

2.2.6 專屬性考察 分別取上述混合對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各1 μL，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，詳見圖1。由圖1可知，各色譜峰分離良好，且陰性對照溶液在龍腦對照品出峰相應(yīng)位置未見色譜峰出現(xiàn)，對測定無干擾。

2.2.7 線性關(guān)系考察 精密稱取龍腦對照品10 mg，置于20 mL量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，制成質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL的對照品溶液A；取水楊酸甲酯對照品適量，加乙酸乙酯溶解，制成質(zhì)量濃度為1.0 mg/mL的內(nèi)標(biāo)溶液A。精密吸取上述對照品溶液A 0.5、1、2、3、4、5 mL，分別置于10 mL量瓶中，加上述內(nèi)標(biāo)溶液A 1 mL，加乙酸乙酯定容至刻度，搖勻，取1 μL，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以龍腦與內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量濃度比（x）為橫坐標(biāo)、峰面積比（y）為縱坐標(biāo)進行線性回歸，得回歸方程為y＝7.019 3x－0.004 5（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，龍腦檢測質(zhì)量濃度線性范圍為0.026～0.26 mg/mL。

2.2.8 定量限與檢測限考察 分別精密量取“2.2.2”項下混合對照品溶液適量，倍比稀釋，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，以信噪比10∶1、3∶1分別計算定量限、檢測限。結(jié)果，龍腦的定量限為3.9 ng，檢測限為1.2 ng。

2.2.9 精密度試驗 取“2.2.2”項下混合對照品溶液適量，按“2.2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果，龍腦與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的RSD為0.51%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.2.10 穩(wěn)定性試驗 取“2.2.4”項下供試品溶液（批號：S07014）適量，分別于室溫下放置0、3、6、9、12、24 h時按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，龍腦與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的RSD為1.07%（n＝6），表明供試品溶液于室溫下放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

圖1 氣相色譜圖Fig 1 GC chromatograms

2.2.11 重復(fù)性試驗 取樣品細(xì)粉（批號：S07014）1.0 g，共6份，按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并以內(nèi)標(biāo)法計算樣品含量。結(jié)果，龍腦平均含量為5.04 mg/g，RSD為1.03%（n＝6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.2.12 加樣回收率試驗 取已知含量樣品細(xì)粉（批號：S07014）0.50 g，共6份，分別精密加入一定量的混合對照品溶液，按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并以內(nèi)標(biāo)法計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n＝6）Tab 1Results of recovery tests（n＝6）

2.2.13 樣品含量測定 取3批薄膜包衣樣品適量，按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并以內(nèi)標(biāo)法計算樣品含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（n＝3，mg/g）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3，mg/g）

2.2.14 制劑加速穩(wěn)定性試驗 取3批羚黃寶兒未包衣素丸（批號：S07011、S07012、S07013），按薄膜包衣工藝制備薄膜包衣樣品。取鋁箔包衣樣品與薄膜包衣樣品各200瓶，置于（40±2）℃、相對濕度（75±5）%條件下，分別于放置第0、1、2、3、6個月時取樣，按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并以內(nèi)標(biāo)法計算樣品含量，結(jié)果見表3。

表3 制劑加速穩(wěn)定性試驗結(jié)果（n＝5，mg/g）Tab 3 Results of accelerated stability tests of the preparation（n＝5，mg/g）

根據(jù)表3，按公式[損失率＝│（第n個月含量－第0個月含量）│/第0個月含量×100%]計算，鋁箔包衣樣品的平均損失率為4.10%，薄膜包衣樣品的平均損失率為3.00%，兩種包衣樣品的平均損失率均小于5%，表明兩種包衣樣品在（40±2）℃、相對溫度（75±5）%條件下放置6個月內(nèi)基本穩(wěn)定，但后者平均損失率更低。

2.2.15 制劑長期穩(wěn)定性試驗 取鋁箔包衣樣品與薄膜包衣樣品各200瓶，置于（20±2）℃、相對溫度（40±5）%條件下，分別于放置第 0、3、6、9、12個月時取樣，按“2.2.4”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并以內(nèi)標(biāo)法計算樣品含量，結(jié)果見表4。

表4 制劑長期穩(wěn)定性試驗結(jié)果（n＝5，mg/g）Tab 4 Results of long-term stability tests of preparation（n＝5，mg/g）

根據(jù)表4，按損失率公式計算，鋁箔包衣樣品的平均損失率為0.75%，薄膜包衣樣品的平均損失率為0.66%，兩種包衣樣品的平均損失率均小于1%，表明兩種包衣樣品在（20±2）℃、相對溫度（40±5）%條件下放置12個月內(nèi)基本穩(wěn)定，但后者平均損失率更低。

3 討論

薄膜包衣是將高分子化合物溶于適當(dāng)?shù)娜軇?，并在溫和的加工條件下通過噴霧方法均勻地噴于丸芯表面，形成數(shù)微米厚的塑性高分子材料薄膜層。薄膜包衣技術(shù)具有包衣時間短、包衣理論增質(zhì)量比例小、毒性小、防潮效果好等優(yōu)點[14]。流化床包衣干燥效率高，尤其適用于干燥速率高的薄膜包衣液（如水分散體），且能使微丸薄膜包衣層的厚度更加均勻[15]。本研究采用流化床薄膜包衣，通過單因素試驗分別考察并篩選包衣工藝的重要參數(shù)，優(yōu)化后的包衣工藝穩(wěn)定、可行，操作簡便，節(jié)約成本的同時可防止藥物中揮發(fā)性成分的流失，提高制劑質(zhì)量的可控性。

加速穩(wěn)定性試驗可在短時間內(nèi)考察制劑在極端條件下的含量變化情況，以初步預(yù)測其穩(wěn)定性，同時也是對制劑在運輸、貯存過程中可能遇到的短暫的超常條件下的穩(wěn)定性進行模擬考察[16]。長期穩(wěn)定性試驗可明確制劑在常規(guī)條件下貯存的穩(wěn)定性情況，以確定藥品的有效期，是穩(wěn)定性試驗的核心[17]。本研究中，兩種包衣樣品的穩(wěn)定性無明顯差異，均較穩(wěn)定；但各時間點的測定結(jié)果顯示，兩種包衣樣品中薄膜包衣樣品的龍腦含量均較高，提示薄膜包衣樣品中揮發(fā)性成分損失較少。

綜上所述，優(yōu)化所得羚黃寶兒丸薄膜包衣工藝穩(wěn)定、可行；所制微丸外觀圓整、色澤均勻，且穩(wěn)定性較好。