蒙醫(yī)灸療對失眠模型大鼠行為學及腦組織5-HT 的影響

乎寶力格，蘇日古嘎，高玉峰

（內(nèi)蒙古民族大學附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028007）

引起失眠的原因有很多，主要是大腦正常的興奮和抑制過程失調(diào)。如環(huán)境因素、個體因素、軀體因素、精神因素、情緒因素、藥物因素等都可以通過影響大腦正常的興奮和抑制過程從而導致失眠[1-5]。蒙醫(yī)灸療法作為蒙醫(yī)傳統(tǒng)療法之一，在治療失眠癥方面有它獨特的優(yōu)勢及發(fā)展前景。蒙醫(yī)學認為引起疾病最根本的原因是三根（赫依、希拉、巴達干）失去平衡。正常情況下，三根互相制約，互相依存保持機體的平衡，任何一方出現(xiàn)偏盛或偏衰必會導致反常變化，引起疾病的發(fā)生。蒙醫(yī)理論認為失眠癥的病因有外因和內(nèi)因，外因系勞逸失調(diào)、思慮太過、驚嚇、失血等，內(nèi)因系赫依琪素紊亂累及心臟白脈受累，機體在4個發(fā)病條件的作用下，赫依希日紊亂累及心臟、腎臟或赫依琪素紊亂累及白脈從而引起失眠，因此大多屬赫依病范疇。而蒙醫(yī)灸療法則是鎮(zhèn)赫依之邪，抑制赫依病擴散之良方。前期研究已表明[6-9]，施灸赫依三穴可改善睡眠紊亂模型大鼠睡眠，可降低中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)重要的神經(jīng)遞質(zhì)NO與NOS的活性。

研究表示，5-HT的減少是引起失眠的又一主要原因之一，表明5-HT是睡眠發(fā)生和維持所必須的，有重要調(diào)節(jié)睡眠的作用[10-11]。筆者在前期研究基礎上觀察施灸赫依三穴對失眠大鼠行為學變化及腦干內(nèi)5-HT的影響，進一步探討其治療失眠的作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 實驗動物選擇健康雄性SD大鼠60只，體質(zhì)量（200±10）g，全部大鼠均由沈陽實驗動物中心提供，合格證號：（SXSK（遼）2015-0001）。

1.2 試劑及儀器 ZB-200疲勞轉(zhuǎn)棒儀購自北京智鼠多寶生物科技有限責任公司，AUW120D型島津電子天平（日本島津），對氯苯丙氨酸（PCPA）購自北京環(huán)亞太克生物醫(yī)學技術有限公司，5-HT對照品購自美國Sigma公司，艾灸貼購自蘇州東方艾絨廠。

1.3 造模方法 本實驗采用對氯苯丙氨酸造模法[12]。將PCPA用生理鹽水配置成混懸液（45 mg/100 g），腹腔注射PCPA混懸液（1 mg/100 g），1次/d，連續(xù)注射2 d。大鼠出現(xiàn)活動明顯頻繁、對外界的聲、光等刺激異常敏感，興奮性增高，晝伏夜出節(jié)律消失等，表明造模成功。

1.4 分組及處理方法 將60只SD雄性大鼠隨機分為6組，即正常組、模型組、安定組、頂會穴組、赫依穴組、黑白際穴組，每組10只。正常組：大鼠腹腔注射0.9%氯化鈉溶液（1 mL/100 g），1次/d，連續(xù)注射2 d；與治療組相同的抓取、固定，不做任何治療，連續(xù)7 d。 模型組：造模成功后同灸療組一樣抓取，固定。安定組：造模成功后，將安定（地西泮）注射液，0.92 mg/kg，1次/d，連續(xù)灌胃7 d。頂會穴組：造模成功后施灸大鼠“頂會穴”，每日施灸1次，連續(xù)7 d。赫依穴組：造模成功后施灸大鼠“赫依穴”，每日施灸1次，連續(xù)7 d。黑白際穴組：造模成功后施灸大鼠“黑白際穴”，每日施灸1次，連續(xù)7 d。

1.5 觀察指標及檢測方法

1.5.1 轉(zhuǎn)棒平衡實驗[13]實驗裝置為單頭固定的水平直棒。先將疲勞轉(zhuǎn)棒儀調(diào)整到訓練狀態(tài)，讓各組大鼠適應，再將疲勞轉(zhuǎn)棒儀調(diào)到20 r/min，當直棒轉(zhuǎn)動時，將大鼠放在轉(zhuǎn)棒上，記錄大鼠在轉(zhuǎn)棒上持續(xù)不落降的時間，每只大鼠重復測定3次，取平均值。

1.5.2 大鼠腦干中5-HT含量測定 將大鼠快速斷頭處死，冰上迅速取大腦干稱重，- 80 ℃冰箱保存待測。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠轉(zhuǎn)棒平衡實驗測定結(jié)果 見表1。與正常組相比，模型組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時間縮短（P＜0.05）。與模型組比較，安定組、赫依穴組、頂會穴組和黑白際穴組大鼠在轉(zhuǎn)棒上維持時間延長（P＜0.05）。

2.2 蒙醫(yī)灸療對PCPA致失眠模型大鼠腦干組織5-HT的影響 見表1。與正常組相比，模型組腦干5-HT含量降低（P＜0.05）。與模型組比較，安定組、赫依穴組和頂會穴組腦干內(nèi)5-HT的含量升高（P＜0.05）。

表1 蒙醫(yī)灸療法對SD大鼠轉(zhuǎn)棒平衡及腦組織中5-HT的影響（ ，n = 10）

表1 蒙醫(yī)灸療法對SD大鼠轉(zhuǎn)棒平衡及腦組織中5-HT的影響（ ，n = 10）

注：與正常組比較，# P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05

組 別 棒上停留（維持）時間/s 5-HT/（g/ng）正常組 212.98±62.90 45.63±6.38模型組 56.17±47.39# 20.14±7.92#安定組 112.13±46.84△ 38.26±8.71△赫依穴組 110.85±66.24△ 30.39±10.17△頂會穴組 111.39±74.41△ 28.6±7.89△黑白際穴組 112.2±57.80△ 23.94±5.45

3 討論

蒙醫(yī)理論認為人體體素相搏導致無法正常入睡稱失眠，屬于赫依病范疇。蒙醫(yī)灸療法具有通絡、行氣、活血，抑制赫依病之功效。蒙醫(yī)學中赫依三穴指的是頂會穴、赫依穴、黑白際穴。赫依穴：位于第七頸椎棘突與第一胸椎棘突間隙窩中；頂會穴：兩耳角直上連線中點，頭頂正中心；黑白際穴：位于兩乳正中對直的心窩處[14]?！陡事端牟俊分杏涊d[15]：“赫依偏盛引起的疾病以頂會穴、赫依穴、黑白際穴灸之?！?/p>

5-HT作為神經(jīng)遞質(zhì)，集中分布于腦干的中縫核內(nèi)，其神經(jīng)功能十分復雜，涉及睡眠、痛覺、體溫、垂體內(nèi)分泌等多種生理功能活動的調(diào)節(jié)[16]。PCPA是5-HT合成抑制劑，造成睡眠晝夜節(jié)律消失，達到完全失眠[17]。腦內(nèi)5-HT濃度的升高，會使機體產(chǎn)生疲勞和睡意[18-19]。本試驗提示蒙醫(yī)灸療赫依穴和頂會穴可通過增加腦干組織5-HT的含量，從而達到促進睡眠作用。與模型組相比，黑白際穴組腦干5-HT含量無顯著性差異（P＞0.05），其原因可能與樣本量小或不同穴位所分布的5-HT含量與受體有關。