犬抗凝血滅鼠藥中毒模型的建立及犬新鮮冰凍血漿治療效果分析

杜志國(guó),王建琳,黃 凱,王 森,王冬冬,高曉琦,王 藝,黃 震,莊妤冰,耿文靜,馬志亮,郭 穎,尹燕博

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 ,山東 青島 266109;2.青島博隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,山東 青島 266200;3.北京中科拜克生物技術(shù)有限公司,北京 海淀 100038;4.美聯(lián)眾合動(dòng)物醫(yī)院轉(zhuǎn)診中心,北京 朝陽(yáng) 100101;5.沈陽(yáng)軍區(qū)總醫(yī)院輸血科,遼寧 沈陽(yáng) 110016）

抗凝血滅鼠藥是犬?dāng)z入的最常見的有毒物質(zhì)[1],其引起的凝血問題是小動(dòng)物急救常見的癥狀之一[2]。此類產(chǎn)品的作用是通過抑制肝臟中的維生素K環(huán)氧化物還原酶的活性,影響維生素K的合成,從而導(dǎo)致維生素K依賴性凝血因子II,VII,IX,X合成減少,引發(fā)凝血功能障礙,抗凝血滅鼠藥不能阻止已存在的凝血因子發(fā)揮作用,只有當(dāng)體內(nèi)的維生素K依賴性凝血因子耗竭后（凝血因子II,VII,IX,X在犬體內(nèi)的半衰期分別為41、6.2、13.9 h、和16.5 h）,才導(dǎo)致凝血功能障礙,引起出血[3-6]?？鼓獪缡笏帉?duì)體外輸入的凝血因子無破壞作用,體外輸入凝血因子（冰凍血漿、新鮮冰凍血漿、新鮮全血）可迅速糾正凝血功能障礙[6]。本試驗(yàn)通過建立犬抗凝血滅鼠藥中毒模型,利用犬新鮮冰凍血漿作為輔助治療手段與維生素K1治療方法相對(duì)比,觀察兩種治療方式的效果,為治療抗凝血滅鼠藥中毒提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 12～15月齡健康比格犬16只,公母均有,體重9～11kg,均由青島博隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。

1.2 主要儀器與試劑 TG16W醫(yī)用離心機(jī),長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司;80-2電動(dòng)離心機(jī)、HH-2型數(shù)顯恒溫水浴鍋,上海梅香儀器有限公司;Junior Vet 5血球分析儀、SP-4430自動(dòng)干式生化分析儀,蘭橋康泰醫(yī)學(xué)科技有限公司;犬新鮮冰凍血漿,青島博隆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司;抗凝血滅鼠藥,商丘市大衛(wèi)化工廠;凝血酶原時(shí)間（PT）測(cè)試盒、凝血酶時(shí)間（TT）測(cè)試盒、活化部分凝血活酶時(shí)間（APTT）測(cè)試盒（白陶土）、纖維蛋白原（FIB）測(cè)試盒,南京建成生物工程研究所;

1.3 犬抗凝血滅鼠藥中毒模型的建立 根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的犬中毒劑量[7-8],將抗凝血滅鼠藥與犬糧拌勻,劑量為20mg/kg·bw,隨機(jī)抽取12只犬進(jìn)行單獨(dú)投喂,余下4只為空白對(duì)照。

1.4 身體指標(biāo)檢測(cè) 發(fā)病時(shí)檢測(cè)犬體溫、血常規(guī)、血生化指標(biāo)、凝血4項(xiàng),治療期間每天檢測(cè)體溫,每隔1 d檢測(cè)血常規(guī)、凝血四項(xiàng),每隔3 d檢測(cè)血生化指標(biāo)。其中檢測(cè)血常規(guī)、血生化指標(biāo)的血樣利用EDTA-K2抗凝劑,檢測(cè)凝血4項(xiàng)的血樣利用檸檬酸三鈉抗凝劑。

1.5 治療分組與方案 將治療組分為維生素K1組、血漿治療1組、血漿治療2組3個(gè)治療組,將發(fā)病犬隨機(jī)分配到3個(gè)組中。3組共同的治療方案為:呋塞米注射液（2 mL/d體重,靜脈注射）,連續(xù)3 d,維生素K1注射液（2mg/kg/d體重,肌肉注射）,直至治愈。3個(gè)組間治療方案的不同點(diǎn)為:血漿治療1組使用犬新鮮冰凍血漿5 mL/kg/d·bw,每天靜脈滴注,進(jìn)行治療,連續(xù)2 d;血漿治療2組使用犬新鮮冰凍血漿5 mL/kg·bw,每天靜脈滴注）、進(jìn)行治療,連續(xù)4 d;維生素K1組作為對(duì)照組。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 將檢測(cè)數(shù)據(jù)導(dǎo)入SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)病時(shí)間及臨床癥狀 從投喂后第1天開始計(jì)數(shù),出現(xiàn)癥狀的時(shí)間為4-11 d（中位數(shù)6.5 d,平均6.5 d）,臨床癥狀表現(xiàn)為精神沉郁（6/12）,不同部位出血（9/12）,可視黏膜顏色不同程度發(fā)白（12/12）,皮下積液（5/12）,呼吸困難（3/12）,體溫升高（5/12）。

2.2 發(fā)病時(shí)生理、生化指標(biāo)及凝血四項(xiàng) 血紅蛋白、紅細(xì)胞、紅細(xì)胞壓積均出現(xiàn)不同程度降低（12/12）,白細(xì)胞升高（5/12）,血小板（PLT）含量降低（6/12）,總蛋白（T-Pro）含量降低（8/12）,白蛋白（ALB）含量降低（10/12）,PT 延長(zhǎng)（12/12）,APTT 延長(zhǎng)（12/12）,TT 延長(zhǎng)（2/12）,FIB 含量增高（9/12）（表1）。

表1 發(fā)病時(shí)凝血4項(xiàng)

2.3 治療效果及治療過程中身體指標(biāo)監(jiān)測(cè) 治療過程中均出現(xiàn)WBC值升高現(xiàn)象,預(yù)防性肌肉注射頭孢類藥物并不能很好的抑制炎癥的發(fā)生。靜脈推注喹諾酮類藥物或鹽酸林可霉素注射液和硫酸慶大霉素注射液聯(lián)合用藥效果較好,WBC值逐漸下降,并趨于正常;在治療期間3個(gè)治療組的體溫?zé)o明顯波動(dòng);HGB、RBC、HCT值均呈上升趨勢(shì),但恢復(fù)較慢,治療8 d后達(dá)到正常值范圍,但仍然偏低;WBC值于治療第6天下降,第8天恢復(fù)正常;PLT、T-Pro、Alb值均在第4天恢復(fù)正常范圍,以上指標(biāo)3組間數(shù)值差異不顯著。凝血4項(xiàng)中PT、APTT值均在治療第2天明顯降低,而后緩慢恢復(fù)為正常值范圍,與維生素K1組相比,血漿治療1組與血漿治療2組PT值在前6天中降低范圍較大,APTT值在第2天降低范圍較大,基本恢復(fù)正常值范圍,血漿治療1組與血漿治療2組間變化幅度并不明顯,TT值并無明顯變化,FIB含量由高變低（表2）。3組療程分別為維生素K1組8～12 d（平均10 d）,血漿治療1 組6 ～10 d（平均8 d）,血漿治療2組6～10 d（平均8 d）。血漿治療組與維生素K1組治療天數(shù)差異顯著（P＜0.05,F=0,df=10）。

表2 凝血四項(xiàng)變化情況

2.4 復(fù)查 分別于治療結(jié)束后7天、14天進(jìn)行復(fù)查,檢測(cè) PT、APTT。第 7天復(fù)發(fā)率為 16.7%（2/12）,剩余10只第14天復(fù)發(fā)率為0%。

3 討論

本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)抗凝血滅鼠藥中毒的臨床癥狀比較多樣化,主要以不同部位出血或積液,可視黏膜顏色不同程度發(fā)白為主要特征。由維生素K拮抗作用而繼發(fā)的凝血異常,PT和APTT均延長(zhǎng),尤其是以PT延長(zhǎng)為主要癥狀[6][9-10]。其他原因引起的凝血病,如腫瘤引起的DIC,中暑,敗血癥,全身炎癥反應(yīng)綜合征或肝功能衰竭,會(huì)使PT和APTT的延長(zhǎng)程度相似,而不是抗凝血滅鼠藥導(dǎo)致的PT延長(zhǎng)程度大而APTT延長(zhǎng)程度小的現(xiàn)象[11-12]。所以如果PT、APTT都延長(zhǎng),并且PT延長(zhǎng)大于APTT延長(zhǎng)時(shí),應(yīng)考慮抗凝血滅鼠藥中毒。

抗凝血滅鼠藥中毒的治療主要圍繞3個(gè)核心原則:（1）替換丟失的凝血因子以停止持續(xù)出血;（2）提供維生素K1使患者的肝臟能合成自身的凝血因子;（3）提供適當(dāng)?shù)闹С种委熀托菹5]。犬新鮮冰凍血漿作為輔助治療手段,取得了良好的療效。止血迅速,療程縮短,凝血因子含量恢復(fù)更快,對(duì)于皮下積液有很好的去除效果。如果犬貧血并不嚴(yán)重,考慮到輸全血的風(fēng)險(xiǎn),犬新鮮冰凍血漿是一個(gè)較好的治療選擇。2 d與4 d兩種療程的療效差別并不顯著,推薦2 d的療程作為治療手段。

何時(shí)停用維生素K1,要根據(jù)檢查結(jié)果來判定,并進(jìn)行復(fù)查,對(duì)復(fù)發(fā)的犬可以進(jìn)行一個(gè)為期4 d的治療,均可治愈,而后繼續(xù)復(fù)查,直至痊愈。犬對(duì)抗凝血滅鼠藥抵抗能力不同,治療時(shí)間亦不盡相同,切不可盲目停藥。