子宮平滑肌小窩蛋白表達(dá)與產(chǎn)后出血發(fā)病關(guān)系

廖秋萍 顏建英 劉兆董 羅金英

目前，全世界范圍內(nèi)導(dǎo)致孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一是產(chǎn)后出血（Postpartum hemorrhage，PPH）。而宮縮乏力是導(dǎo)致產(chǎn)后出血的首要原因。目前認(rèn)為[1]，小窩是細(xì)胞信號分子富集和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐。其主要的結(jié)構(gòu)蛋白是小窩蛋白（caveolin），調(diào)控許多關(guān)鍵信號分子的活性狀態(tài)。調(diào)控信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路活性的分子通過聚集到細(xì)胞膜表面小窩，與小窩蛋白結(jié)合并相互作用，改變信號通路活性。其中子宮平滑肌細(xì)胞的興奮性是其調(diào)控終點之一。本研究通過檢測產(chǎn)婦子宮平滑肌小窩蛋白表達(dá)水平，探討其與宮縮乏力性產(chǎn)后出血發(fā)病的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 資料來源與分組

選擇我院2012年10月—2015年10月行子宮下段剖宮產(chǎn)的產(chǎn)婦60例，分為研究組（宮縮乏力性產(chǎn)后出血組，n=30）和對照組（宮縮正常無產(chǎn)后出血組，n=30）。兩組產(chǎn)婦年齡、分娩次數(shù)、孕周、入院時BMI及入院時凝血功能指標(biāo)水平差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。宮縮乏力性產(chǎn)后出血診斷標(biāo)準(zhǔn)參照第8版《婦產(chǎn)科學(xué)》[2]，采用稱重法測量產(chǎn)后出血量。剖宮產(chǎn)指征為臍帶因素、社會因素。所有研究對象均獲知情同意后簽署知情同意書，并經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

（1）標(biāo)本收集：在胎兒娩出后、處理宮縮乏力之前，切取少許子宮下段切口上緣子宮平滑肌組織。取組織約1.0 g用于蛋白提?。蝗〗M織約1 mm3大小，用于石蠟切片。

（2）采用免疫熒光法觀察子宮平滑肌細(xì)胞小窩蛋白定位情況。采用TRITC標(biāo)記的二抗進(jìn)行試驗，采集紅色熒光圖片。用激光共聚焦顯微鏡觀察。

（3）采用蛋白印跡法測定子宮平滑肌組織中小窩蛋白蛋白表達(dá)水平。結(jié)果計算：蛋白表達(dá)相對量=目的蛋白IOD值/內(nèi)參IOD值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件包處理，計量資料比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般情況比較

兩組產(chǎn)婦年齡、孕周、分娩次數(shù)、入院時BMI及入院時凝血功能指標(biāo)水平，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1，2。

2.2 子宮平滑肌細(xì)胞小窩蛋白定位情況

用激光共聚焦顯微鏡觀察到兩組產(chǎn)婦子宮平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞膜表面和細(xì)胞質(zhì)均可見紅色熒光，即表明子宮平滑肌細(xì)胞的細(xì)胞膜表面和細(xì)胞質(zhì)均有小窩蛋白-1、小窩蛋白-2表達(dá)。

表1 兩組產(chǎn)婦一般情況比較（±s）

表1 兩組產(chǎn)婦一般情況比較（±s）

組別 年齡（歲） 孕周（周） 分娩次數(shù) BMI（kg/m2）研究組 28.30±3.26 39.53±1.17 0.80±0.55 26.97±3.52對照組 27.13±3.17 39.73±0.98 0.68±0.61 25.78±2.80 t值 1.405 -0.719 -1.138 1.446 P值 0.165 0.475 0.260 0.154

表2 兩組產(chǎn)婦入院時凝血功能指標(biāo)水平比較（±s）

表2 兩組產(chǎn)婦入院時凝血功能指標(biāo)水平比較（±s）

組別 凝血酶原時間PT（s） 國際標(biāo)準(zhǔn)化比值INR 活化部分凝血酶時間APTT（s） 凝血酶時間TT（s） 纖維蛋白原Fg（g/L）研究組 12.31±0.59 0.93±0.06 33.80±3.20 16.17±0.76 4.26±0.69對照組 12.00±0.59 0.90±0.04 33.19±2.39 16.19±0.75 4.54±0.59 t值 2.001 1.963 0.842 -0.129 -1.682 P值 0.051 0.054 0.403 0.898 0.098

表3 小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達(dá)水平比較（±s）

表3 小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達(dá)水平比較（±s）

組別 小窩蛋白-1 小窩蛋白-2研究組 2 984.12±307.56 3 522.16±592.18對照組 2 554.66±406.49 2 780.75±592.18 t值 -4.625 -4.849 P值 0.000 0.000

2.3 兩組產(chǎn)婦子宮平滑肌組織小窩蛋白表達(dá)水平比較

研究組子宮平滑肌組織小窩蛋白-1和小窩蛋白-2蛋白水平均高于對照組（均P＜0.05）。見表3及圖1。

圖1 兩組產(chǎn)婦子宮平滑肌組織小窩蛋白-1和小窩蛋白-2蛋白檢測

3 討論

小窩是細(xì)胞質(zhì)膜向內(nèi)凹陷所形成的囊狀結(jié)構(gòu)，其主要結(jié)構(gòu)蛋白是小窩蛋白。小窩作為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐，許多細(xì)胞信號分子富集于小窩，并與小窩蛋白相互作用，導(dǎo)致其活性狀態(tài)改變[3]。有研究顯示，小窩是重要的信號平臺，調(diào)控許多信號通路上關(guān)鍵分子的活性，從而調(diào)節(jié)信號通路活性狀態(tài)，改變細(xì)胞和組織功能[4]。小窩蛋白可分為1、2、3型，子宮平滑肌中主要為1、2型[5-6]。研究發(fā)現(xiàn)在鼠子宮平滑肌細(xì)胞中小窩結(jié)構(gòu)具有調(diào)控子宮平滑肌收縮活性的作用[7]。

本研究采用免疫熒光技術(shù)證實子宮平滑肌細(xì)胞中含有小窩蛋白；進(jìn)一步采用蛋白印跡法進(jìn)行定量測定，發(fā)現(xiàn)宮縮乏力性產(chǎn)后出血產(chǎn)婦子宮平滑肌小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達(dá)均顯著高于對照組。提示小窩蛋白-1和小窩蛋白-2表達(dá)增加可能與宮縮乏力性產(chǎn)后出血的發(fā)生有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)[8]：在不同妊娠階段小鼠子宮平滑肌組織小窩蛋白表達(dá)量有所不同，在分娩期間小窩蛋白表達(dá)量下降，其原因可能是小窩蛋白在調(diào)節(jié)子宮平滑肌收縮活性方面起重要作用。Lorca RA等[9]認(rèn)為，小窩作為含有豐富膽固醇和鞘脂類細(xì)胞膜上微小結(jié)構(gòu)，是信號蛋白分子聚集的“驛站”，具有調(diào)控細(xì)胞興奮性及細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)作用，從而調(diào)節(jié)子宮平滑肌細(xì)胞收縮活性；其重要機(jī)制之一是：作為調(diào)節(jié)子宮平滑肌細(xì)胞收縮的大電導(dǎo)鈣激活鉀通道能定位于小窩，并與小窩上的小窩蛋白-1和小窩蛋白-2結(jié)合并相互作用，調(diào)節(jié)子宮平滑肌細(xì)胞鉀離子電流，導(dǎo)致細(xì)胞膜電位改變，起到調(diào)節(jié)子宮平滑肌收縮的作用。近期有研究者總結(jié)出[10]，小窩作為子宮平滑肌收縮活動性信號通路轉(zhuǎn)導(dǎo)樞紐，參與了肥胖孕婦因脂肪因子介導(dǎo)發(fā)生的早產(chǎn)與過期妊娠；并指出小窩可能是預(yù)防和治療肥胖孕婦早產(chǎn)、延期與難產(chǎn)的靶點之一。此外，最近研究表明，小窩蛋白可能是通過與雌激素受體相結(jié)合起到信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的樞紐作用[11-12]。

本研究從定性到定量研究揭示小窩蛋白可能參與宮縮乏力性產(chǎn)后出血的發(fā)病，但具體作用機(jī)制尚不明確。未來尚需進(jìn)一步深入研究其具體發(fā)病機(jī)制，從而為臨床防治該病拓展新思路。