腦卒中患者M(jìn)THFR基因多態(tài)性與同型半胱氨酸水平的關(guān)系研究

龐國勛，靳會(huì)欣，劉洪濤

腦血管意外又稱為腦卒中或中風(fēng)，臨床表現(xiàn)為一過性或永久性腦功能障礙，是因腦部供血受阻而發(fā)展迅速的腦功能損傷疾病，可由多種誘發(fā)因素引起，如血栓或栓塞等，導(dǎo)致腦內(nèi)動(dòng)脈狹窄、閉塞或破裂。該病發(fā)病率、病殘率均較高，其中缺血性腦卒中占60%～70%[1]。有報(bào)道顯示，我國每年腦卒中病死率為58/10萬～142/10萬，位于城鄉(xiāng)居民死亡原因之首，嚴(yán)重影響了人民健康和生活質(zhì)量[2]。因此，有關(guān)腦卒中的治療和評(píng)估一直是醫(yī)學(xué)研究的重點(diǎn)。近年相關(guān)研究認(rèn)為，高同型半胱氨酸(Hcy)血癥是腦卒中的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，且當(dāng)?shù)鞍彼岽x過程中所涉及的酶或因子異常時(shí)，可引發(fā)高Hcy血癥[3-4]。5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)即其中的關(guān)鍵酶，當(dāng)其基因突變時(shí)，可引起MTHFR缺乏或活性降低[5]。為研究腦卒中患者Hcy水平與MTHFR基因突變的關(guān)系，本文選擇相關(guān)病例進(jìn)行研究，并將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年1月—2017年12月我院神經(jīng)內(nèi)科收治的缺血性腦卒中患者120例作為觀察組。①納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)頭顱CT或MRI確診，符合中國急性缺血性腦卒中診治指南標(biāo)準(zhǔn)。②排除標(biāo)準(zhǔn)：其他原因引起的神經(jīng)功能障礙；糖尿病、肝腎及甲狀腺功能異常、腫瘤及血液病患者；近1個(gè)月內(nèi)的創(chuàng)傷、感染患者或應(yīng)用影響Hcy水平藥物者。選擇同期健康體檢者120例作為對(duì)照組。兩組均為漢族，無血緣關(guān)系。觀察組男89例，女31例；年齡(65.70±11.29)歲。對(duì)照組男90例，女30例；年齡(64.91±10.53)歲。兩組性別和年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2儀器與試劑 全自動(dòng)雜交儀、生物芯片識(shí)讀儀、全血基因組DNA提取試劑盒和MTHFR基因檢測(cè)DNA微陣列芯片法試劑盒均購自上海百傲科技有限公司，日立7600全自動(dòng)生化分析儀和T100PCR儀均購自Bio-rad公司，Hcy試劑盒購自西門子公司。

1.3Hcy水平檢測(cè) 兩組均采集空腹外周靜脈血5 ml，3500 r/min離心20 min，-80℃冰箱保存。完全恢復(fù)室溫后，采用循環(huán)酶法全自動(dòng)生化儀檢測(cè)Hcy水平。

1.4基因分型檢測(cè) 肘靜脈采集外周血2 ml，EDTA抗凝后，參照全血DNA提取試劑盒說明提取和純化DNA。對(duì)純化的DNA標(biāo)本采用生物素標(biāo)記的MTHFR基因特異性熒光引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，步驟依照MTHFR基因檢測(cè)DNA微陣列芯法試劑盒說明書。對(duì)PCR產(chǎn)物應(yīng)用雜交儀進(jìn)行雜交及顯色，采用Baio Array Doctor V2.0基因芯片圖像分析儀軟件及生物芯片識(shí)讀儀對(duì)MTHFR基因677位點(diǎn)的等位基因進(jìn)行判讀，根據(jù)基因型不同分別定義為野生型(C/C)、雜合突變型(C/T)和純合突變型(T/T)。

2 結(jié)果

2.1相關(guān)臨床指標(biāo)比較 兩組的舒張壓、總膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。觀察組的收縮壓和Hcy水平高于對(duì)照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組研究對(duì)象的相關(guān)臨床指標(biāo)比較

2.2基因型及等位基因頻率分布 兩組MTHFR基因C/C、C/T、T/T分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。觀察組CT+TT頻率高于對(duì)照組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組研究對(duì)象的MTHFR基因型及等位基因頻率分布情況[例(%)]

2.3不同MTHFR基因型研究對(duì)象的Hcy水平比較 觀察組C/C、C/T和T/T型的Hcy水平分別為(14.65±4.39)μmol/L、(16.12±4.30)μmol/L和(26.31±10.82)μmol/L，對(duì)照組分別為(10.67±4.68)μmol/L、(10.43±3.30)μmol/L和(17.12±5.82)μmol/L。兩組T/T型的Hcy水平均高于本組C/C和C/T型(P<0.05)。觀察組T/T和C/T型的Hcy水平高于對(duì)照組(P<0.05)。

3 討論

近年多數(shù)研究指出，缺血性腦卒中發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后均與血漿Hcy水平密切相關(guān)，Hcy水平升高也是腦血管疾病發(fā)生的危險(xiǎn)因素，成為相關(guān)研究的重點(diǎn)[6-7]。血漿Hcy水平升高會(huì)損傷內(nèi)皮細(xì)胞，加重平滑肌細(xì)胞增殖，引起血液系統(tǒng)抗凝障礙及血小板功能異常，并促進(jìn)低密度脂蛋白膽固醇氧化，從而參與腦卒中疾病的發(fā)生及發(fā)展過程[8-9]。本研究結(jié)果顯示，觀察組血漿Hcy水平高于對(duì)照組，提示血漿Hcy水平是影響缺血性腦卒中的重要因素。

MTHFR作為Hcy代謝的關(guān)鍵酶，能將5,10-亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為5-甲基四氫葉酸，通過Hcy的重新甲基化完成一碳單位轉(zhuǎn)移，使血液中保持較低水平的Hcy[10-11]。因此，MTHFR基因缺陷能使機(jī)體基礎(chǔ)生化過程發(fā)生紊亂，并引發(fā)心腦血管疾病[12]。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，MTHFR基因至少有65個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，C677T是其中常見一種。C677T是指MTHFR第4個(gè)外顯子677位甲基發(fā)生C至T突變，纈氨酸將丙氨酸代替，從而使酶的熱穩(wěn)定下降，并將酶活性降低[13-15]。本研究結(jié)果顯示，兩組MTHFR基因C/C、C/T和T/T型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示Hcy水平在缺血性卒中發(fā)生過程中有關(guān)鍵作用，其關(guān)鍵酶MTHFR的C677T基因突變與腦卒中易感性關(guān)系密切。有文獻(xiàn)報(bào)道，C/T和T/T型酶活性分別下降為C/C型的32%和64%[16]。本文進(jìn)一步研究數(shù)據(jù)顯示，缺血性腦卒中患者與健康人群T/T型血漿Hcy水平均顯著高于本組C/C及C/T型，說明T/T型人群的MTHFR酶活性較低，與以上報(bào)道一致。但仍有部分學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)，腦血管疾病患者Hcy水平雖然顯著升高，而與MTHFR基因多態(tài)性并無顯著關(guān)聯(lián)[17]。推測(cè)其與本文結(jié)果不一致的原因可能為影響腦血管疾病發(fā)病原因是多因素的，且入選對(duì)象的遺傳背景、飲食習(xí)慣及選擇標(biāo)準(zhǔn)不同均可能影響研究結(jié)果，另外地區(qū)性差異及樣本量選擇也可能導(dǎo)致分析差異。因此，如進(jìn)一步探討MTHFR基因多態(tài)性與缺血性腦卒中之間的關(guān)系還需綜合考慮多種影響因素。

綜上所述，MTHFR的C677T位點(diǎn)基因突變可能是缺血性腦卒中的危險(xiǎn)因素，在臨床上可對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，以結(jié)合遺傳特征給予早期預(yù)防及治療措施，實(shí)行個(gè)體化治療。