雛菊無菌實生苗叢芽誘導培養(yǎng)

李云海 黃丹琴 陳麗華

摘要 以MS+6-BA 1.0 mg/L培養(yǎng)基中培養(yǎng)的雛菊無菌實生苗為試驗材料，設置4個不同濃度6-BA的培養(yǎng)基處理，探究雛菊無菌實生苗叢芽誘導培養(yǎng)的 6-BA 適宜濃度。結果表明，在培養(yǎng)基6-BA濃度為0.3 mg/L、溫度為25 ℃左右、光照強度為1 500～2 000 lx、光照時間為12 h/d的條件下，雛菊無菌實生苗初代培養(yǎng)的叢芽增殖數(shù)最高，長勢也最好。

關鍵詞 雛菊；組織培養(yǎng)；實生苗；叢芽誘導

中圖分類號 S681.9 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2018）19-0183-01

雛菊（Bellis perennis），又稱延命菊、春菊、馬頭蘭花等，屬菊科翠菊屬一年生或兩年生草本植物[1]。雛菊植株花色各異，早春開花，植株矮小旺盛，生機勃勃，天真爛漫，可作為花壇、花境、花帶以及盆景和室內裝飾等的較好材料[2]。雛菊的常用繁殖方式有分株法、播種法、扦插法和嫁接法等。其中嫁接法和播種方法技術要求較高，繁殖過程復雜，且雛菊為典型的異花傳粉植物，易發(fā)生變異，難以保證其優(yōu)良品性和純度。過去人們常采用分株法進行栽培繁殖，但分株法也有繁殖速度慢和繁殖效率不高等不足。目前，隨著植物組織培養(yǎng)技術的成熟完善及其在花卉優(yōu)質種苗快速繁殖上的大量應用，已有眾多學者對菊科觀賞植物的組織培養(yǎng)技術進行了探索和研究。侯玉杰等[3]在觀賞菊的組織培養(yǎng)研究中發(fā)現(xiàn)，6-BA與NAA配合使用且6-BA的濃度不超過1.0 mg/L時，誘導叢生芽分化的效果最佳。楊 微等[4]以雛菊的根尖為材料，進行誘導分化和生根培養(yǎng)等的研究，最終建立起了雛菊試管種苗快速繁殖體系。

本試驗以雛菊成熟種子為試驗起始材料，通過外植體無菌處理培養(yǎng)方法得到雛菊無菌實生苗后，設計了4種不同6-BA濃度的培養(yǎng)基，對無菌實生苗進行叢芽誘導培養(yǎng)。擬通過比較在不同濃度6-BA上培養(yǎng)的實生苗的叢芽增殖數(shù)、葉寬和株高等指標，篩選出適宜雛菊實生苗叢芽誘導培養(yǎng)的6-BA濃度。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗初始材料為雛菊成熟種子，種子萌發(fā)培養(yǎng)基：MS+6-BA 1.0 mg/L+瓊脂粉5 g/L+蔗糖30 g/L（pH值5.8）。實生苗叢芽誘導培養(yǎng)基：以MS+瓊脂粉5 g/L+蔗糖30 g/L為基礎，添加6-BA的濃度分別為0.1、0.3、0.6、0.9 mg/L，調至pH值5.8，將培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)瓶中（每瓶30 mL左右）后，用封口膜封口并用棉線扎緊，經(jīng)過121～125 ℃高溫高壓濕熱滅菌后備用[5-6]。

1.2 試驗方法

將雛菊種子在超凈工作臺中用蒸餾水浸泡30 min后，用0.1%升汞溶液浸泡消毒15 min，并不時搖動，然后用無菌水蕩洗4次，用無菌濾紙吸干水分。將種子接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基上進行發(fā)芽培養(yǎng)，2 周后將由種子萌發(fā)形成的長勢基本一致的無菌小苗去根，分別接種到 6-BA 濃度為 0.1、0.3、0.6、0.9 mg/L 的培養(yǎng)基中，分別用M1、M2、M3、M4表示，每個處理接種4瓶，每瓶培養(yǎng)基中接種 4 株。將上述接種好的各處理培養(yǎng)瓶苗，放置于光照強度1 500～2 000 lx、光照12 h/d及溫度25 ℃左右的培養(yǎng)室條件下培養(yǎng)。

1.3 調查指標

定期觀察無菌苗的生長和叢芽誘導情況等。至第45天時，對各處理瓶苗進行叢芽增殖數(shù)、株高和葉寬等指標考察測量和生物統(tǒng)計學分析。

2 結果與分析

2.1 不同處理下叢芽芽數(shù)統(tǒng)計與分析

種子接種2周后，發(fā)芽率達到87.5%。將無菌實生苗接種在含不同6-BA濃度的培養(yǎng)基中后，第45天時從培養(yǎng)瓶外觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)瓶中的無菌實生苗叢芽以處理M2和處理M3生長較好，植株旺盛，葉片寬大，葉色較深。

如表1所示，各處理叢芽增殖的平均值隨著6-BA濃度的升高呈先升高后降低的趨勢；而新生叢芽的長勢與此趨勢成正相關。經(jīng)方差分析和多重比較發(fā)現(xiàn)，處理M2的叢芽增殖數(shù)與其他處理之間差異顯著，其他各處理之間差異不顯著。因此，就叢芽增殖數(shù)指標而言，處理M2較有利于雛菊實生苗叢芽誘導增殖。

2.2 不同處理下實生苗叢芽葉寬統(tǒng)計分析

如表2所示，葉片寬度隨著6-BA濃度升高呈先升高后下降的趨勢。各處理間葉寬差異不顯著，表明6-BA濃度在0.1～0.9 mg/L之間時對實生苗叢芽葉片寬度的影響不明顯。

2.3 不同處理下實生苗叢芽株高統(tǒng)計分析

由表3可以看出，處理M2與處理M1、M4之間差異顯著，與處理M3差異不顯著；處理M1與處理M4之間差異不顯著。對此指標的分析進一步說明，6-BA濃度為0.3 mg/L時較適宜雛菊實生苗叢芽株高生長。

3 結論與討論

綜合上述，本試驗以MS+6-BA 1.0 mg/L培養(yǎng)基培養(yǎng)的雛菊無菌實生苗為試驗材料，通過設置4個不同濃度6-BA的培養(yǎng)基處理，探究雛菊無菌實生苗叢芽誘導培養(yǎng)的6-BA適宜濃度。結果表明，在溫度為 25 ℃左右、光照強度1 500～2 000 lx、光照時間 12 h/d的條件下，培養(yǎng)基中6-BA濃度為0.3 mg/L時，較適宜雛菊無菌實生苗初代培養(yǎng)的叢芽增殖，具體表現(xiàn)為實生苗叢芽增殖數(shù)最多、葉片寬大、植株高，與其他濃度處理的長勢相比差異顯著。

4 參考文獻

[1] 中國科學院植物研究所.中國高等植物圖冊（4冊）[M].北京：科學出版社，1980：417.

[2] 李書心.遼寧植物志（下冊）[M].沈陽：遼寧科學技術出版社，1991：447.

[3] 侯玉杰，朱濤，王曉濤.菊花的組織培養(yǎng)研究[J].信陽師范大學學報（自然科學版），2005（3）：323-325.

[4] 楊微，賈寶林，鐘程，等.雛菊組織培養(yǎng)及快速繁殖研究[J].北方園藝，2011（12）：110-113.

[5] 徐青華.雛菊的繁殖與栽培[J].科學種養(yǎng)，2012（12）：21.

[6] 唐正富.雛菊栽培及采種技術[J].云南農(nóng)業(yè)科技，2008（5）：35.