胸腔積液脫落細胞的不同制片方法及其病理學研究

，， ，

(廣東省第二人民醫(yī)院，廣東 廣州 510317)

脫落細胞學技術屬于一種病理學先進技術，主要通過將患者病變部位的細胞采集下來制片染色，然后病理醫(yī)師對玻片進行觀察，從而對患者病情進行診斷[1]。現階段，TCT、傳統(tǒng)涂片法是臨床通常采用的脫落細胞學制片方法[2]。本研究回顧性分析了2016年7月～2018年7月我院收治的胸腔積液標本40份的相關資料，對胸腔積液脫落細胞的不同制片方法及其病理學進行了研究，現報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：隨機選取2016年7月～2018年7月我院收治的胸腔積液標本40份，其中男性標本20份，女性標本20份，年齡17～92歲，平均(54.3±9.6)歲。

1.2方法

1.2.1標本采集與處理：將200～500 ml胸腔積液標本采集下來送檢，至少送檢3次，從而在極大程度上提升腫瘤細胞檢出率。通常情況下，離體后30 min內是最佳送檢時機，最好在處理與固定標本15 min內送檢，這時脫落細胞具有最小的退變程度。如果無法及時送檢、制片、固定或低溫保存，則可以將適量50%乙醇或40%甲醛加入固定，從而對胸腔積液變質退變的現象進行有效預防。

1.2.2不同制片方法

1.2.2.1新柏氏液基細胞學技術(TCT)：在2個容積為14 ml的離心管中置入同一患者的同一瓶胸腔積液，對其進行離心，速率為2 500～3 000 r/min，15 min左右后將上清液棄去，將沉淀物留置下來，將超薄液基波層處理液加入，2 h左右后再次離心，將上清液取出來，將上清液倒出過程中使殘留水分不對檢測造成不良影響得到切實有效的保證，然后將一個離心管底部的沉淀物吸取出來，在TCT專用玻片夾中放入，再向TCT專用制片機中放入，將細胞薄片制作出來，直徑為2 cm，制片后用95%乙醇固定15 min，最后進行蘇木素-伊紅(HE)染色，梯度乙醇脫水二甲苯透明后用中性樹膠封片，保證濕封。

1.2.2.2傳統(tǒng)涂片法：吸取另一個離心管中的沉淀物，在載玻片上均勻涂抹，稍干燥后95%乙醇固定15 min，然后進行蘇木素-伊紅(HE)染色，梯度乙醇脫水二甲苯透明后用中性樹膠封片，保證濕封。完成胸腔積液脫落細胞制片后在顯微鏡下放置觀察判斷。復檢陽性載玻片，對誤診、漏診的發(fā)生進行有效預防。

1.3判斷標準：癌癥檢出標準為觀察結果陽性[3]。

1.4統(tǒng)計學方法：采用SPSS21.0軟件進行分析處理，計數資料用率(%)表示，用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1不同制片方法標本細胞形態(tài)與質量比較：TCT具有較多的細胞量、干凈的背景、適當的細胞厚薄、均勻的分布、清晰的細胞形態(tài)與結構，偶見細胞退變。傳統(tǒng)涂片法具有較多的細胞量，缺乏干凈的背景，血細胞、炎細胞覆蓋細胞或細胞相互重疊，很難識別，具有模糊的細胞形態(tài)與結構，常見細胞退變。

2.2不同制片方法檢查結果比較：TCT檢查陽性率15.0%(6/40)顯著高于傳統(tǒng)涂片法7.5%(3/40)(P<0.05)，但兩者檢查可疑率、陰性率2.5%(1/40)、82.5%(33/40)VS 5.0%(2/40)、87.5%(35/40)之間差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1不同制片方法檢查結果比較[例(%)]

制片方法例數陽性可疑陰性TCT406(15.0)1(2.5)33(82.5)傳統(tǒng)涂片法403(7.5)2(5.0)35(87.5)χ2值11.141.320.86P值<0.05>0.05>0.05

3 討論

液基薄層細胞制片檢查系統(tǒng)處理技術誕生于1991年美國等國家，率先應用于婦科細胞學檢查，國內從2001年開始作液基細胞學篩查宮頸癌的研究，使該項技術得到迅速發(fā)展，被稱之為一場細胞學制片技術的革命，從根本上解決了常規(guī)脫落細胞制片假陰性率高(15%～20%)、丟失細胞率高(80%)和涂片質量差等技術難題，使宮頸癌的陽性檢出率達95%以上，為脫落細胞學診斷作出了重大貢獻。但是過去該技術需要國外的制片機、細胞保存液等，他的價格昂貴，在國內也只能是一些大醫(yī)院才能開展該項目，在基層醫(yī)院的推廣則比較緩慢。為此，我們聯合國內的有關廠家合作研發(fā)了半自動的離心法制片機，并自主研發(fā)了細胞保存液，大大地降低了液基薄層細胞的制片成本，從而使該項技術易于被廣大基層醫(yī)院所接受且進行推廣使用。目前，他已成為篩查宮頸癌最好的推薦方法之一，為宮頸癌的早期診斷和治療提供了非常明確的診斷依據，是一項非常值得推廣應用的臨床操作技術。對胸腔積液進行離心后，其腫瘤細胞會集中分布，絕大部分細胞呈圓形或類圓形，同時呈片狀分布，通常情況下還會呈細胞團，形式為特定組織形態(tài)[4]。相關醫(yī)學研究表明[5]，胸腔積液脫落細胞學薄層液基制片術能夠集中載破片上的細胞，將優(yōu)質細胞HE片制作出來，促進腫瘤檢查陽性率的提升，將手工涂片的各種弊端解決掉，比如，嚴重丟失細胞、缺乏良好的制片質量、通常情況下血細胞、炎性反應細胞覆蓋細胞或細胞相互重疊造成病理醫(yī)師很難識別、在沒有及時固定的情況下涂片細胞會干燥退變而對診斷造成不良影響等。液基細胞學制片具有多方面的優(yōu)越性，具體體現在：對采集與處理標本方法進行了變革，將細胞涂膜面積縮小，破壞大部分紅細胞或將其消除，溶解黏液絲，在極大程度上減少炎性反應細胞，清晰觀察異常細胞，促進漏診率的降低，且具有清晰的細胞圖像、分明的層次，能夠清晰觀察核膜、核仁、染色質等細微結構，從而促進細胞病理學診斷價值的有效提升。當然，臨床醫(yī)師的閱片經驗也對其造成了直接而深刻的影響[6]。

胸腔指的是由膈肌和胸廓圍成的總腔,胸膜腔是由臟壁兩層胸膜在左右兩肺周圍圍成的一個完全封閉的潛在性腔隙,腔內含少量漿液,起到潤滑作用。我們常說胸腔積液,實際上是胸膜腔積液。胸腔積液,可由多種疾病引起,治療上主要針對原發(fā)病,漏出液常在病因糾正后自行吸收,滲出性胸膜炎中以結核性多見,其次為炎性反應性和癌性胸膜炎,應針對其病因,進行抗結核,抗炎等治療,并可行胸腔穿刺抽液，其預后與原發(fā)病有關,腫瘤所致者預后較差。胸腔積液具有較為復雜的情況，如果單個腫瘤細胞長時間懸浮于液態(tài)環(huán)境中，那么其原有形態(tài)就可能發(fā)生改變，這樣必然會將困擾帶給臨床診斷工作。因此，在診斷過程中應該給予成團細胞以充分關注，如，通常情況下，癌腺細胞會呈腺泡狀，之后再結合特染等。胸腔積液是一種臨床癥狀，在臨床極為常見，在一些情況下甚至是唯一的臨床表現，尤其是肺腺癌會較早有胸腔積液出現，發(fā)生這一現象的原因為其有胸膜轉移發(fā)生，造成臨床在胸腔積液的影響下很難對原發(fā)癌進行影像學診斷，在這種情況下，可以將胸腔積液抽取出來，對其進行細胞學檢查，從而為診斷和鑒別診斷肺癌提供有效依據。而腫瘤細胞在脫落向胸腔的過程中，通常情況下，那些成團的細胞能夠將腫瘤組織形態(tài)保留下來。因此，在癌癥檢查手段中，胸腔積液脫落細胞學檢查已經占有極為重要的地位[7]。相關醫(yī)學研究表明[8]，采用TCT技術將優(yōu)質的胸腔積液脫落細胞HE片制備出來能夠促進胸腔積液脫落細胞病理學檢查陽性率的提升，進而促進腫瘤診斷中脫落細胞學應用價值的提升，將更為準確的診斷結果獲取過來，因此受到了臨床的廣泛關注和普遍認可。

液基薄層細胞學檢測技術(Thin-Cytologic Test TCT)，是近年新發(fā)展起來的一種細胞學診斷新技術，改變了以往巴氏涂片檢測方法的不足，標本取出后立即洗入細胞保存液中，經程序化處理，制成均勻的薄層涂片，使薄片中的不正常細胞容易觀察，并且固定的細胞核結構清楚，易于鑒別。需要做液基薄層細胞檢測者有：宮頸炎、宮頸糜爛應作為常規(guī)檢查；從未接受子宮刮片檢查；過早開始有性行為；自身或丈夫超過一個性伴侶；曾患和性行為有關疾病如滴蟲、梅毒等;HPV病毒感染；長期慢性宮頸炎。本研究為了研究胸腔積液脫落細胞的不同制片方法及其病理學，隨機選取2016年7月～2018年7月我院收治的胸腔積液標本40份，均分別運用TCT、傳統(tǒng)涂片法制片，然后比較不同制片方法標本細胞形態(tài)與質量，并統(tǒng)計分析不同制片方法檢查結果，結果表明，TCT具有較多的細胞量、干凈的背景、適當的細胞厚薄、均勻的分布、清晰的細胞形態(tài)與結構，偶見細胞退變；傳統(tǒng)涂片法具有較多的細胞量，缺乏干凈的背景，血細胞、炎細胞覆蓋細胞或細胞相互重疊，很難識別，具有模糊的細胞形態(tài)與結構，常見細胞退變。TCT檢查陽性率15.0%(6/40)顯著高于傳統(tǒng)涂片法7.5%(3/40)(P<0.05)，但兩者檢查可疑率、陰性率2.5%(1/40)、82.5%(33/40)VS 5.0%(2/40)、87.5%(35/40)之間的差異均不顯著(P>0.05)，和上述相關醫(yī)學研究結果一致。

總之，胸腔積液脫落細胞的TCT技術能夠集中載破片上的細胞，將優(yōu)質的細胞HE片制作出來，促進腫瘤細胞病理學檢查陽性率的提升，從而促進腫瘤診斷中脫落細胞學應用價值的提升，值得推廣。