七子益腎理沖湯對多囊卵巢綜合征胰島素抵抗大鼠卵巢上皮細胞炎性因子及胰島素抵抗狀態(tài)的影響

陳海燕 湯 玲 肖承悰

北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院婦科，北京 100700

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）為臨床多見的內(nèi)分泌失調(diào)性疾病，一般是由于代謝、內(nèi)分泌與神經(jīng)系統(tǒng)及卵巢局部調(diào)控因素不平衡所造成的病理性內(nèi)分泌紊亂，其主要證候特征為高胰島素血癥、連續(xù)無排卵、高雄激素血癥和卵巢多囊樣變化等，其病理生理所涉及的范圍比較廣[1-2]。Burghen在1980年提出PCOS發(fā)病中有胰島素抵抗（IR）參加，相關研究也已經(jīng)驗證了PCOS和IR間聯(lián)系緊密，胰島素傳導路徑內(nèi)任何環(huán)節(jié)的損傷都會造成IR。當前PCOS伴隨IR已是內(nèi)分泌和婦科研究的重點，并引起相關學者廣泛關注[3-4]。

肖承悰教授，為京城四大名醫(yī)之首蕭龍友先生的嫡孫女及學術經(jīng)驗傳承人，燕京流派主要傳承人，北京中醫(yī)藥大學東直門醫(yī)院（以下簡稱“我院”）首席教授、博士生導師、博士后傳承導師，第四批、第六批國家級名老中醫(yī)藥傳承指導老師。肖教授臨床經(jīng)驗豐富，對各種婦科疑難雜癥都有獨到認識[5-7]，其所獨創(chuàng)的“七子益腎理沖湯”廣泛應用于臨床PCOS IR患者，均取得較好效果。

因此，本研究通過分析七子益腎理沖湯對PCOS IR大鼠卵巢上皮細胞炎性因子及IR狀態(tài)的影響，為臨床患者治療提供一些實驗室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

選取SPF級Wistar雄性大鼠60只，23日齡，購自成都達碩實驗動物公司（合格證號SCXK 20060009），體重 40～60 g，平均（51.06±4.82）g。 常規(guī)飼養(yǎng) 2 d 后開始實驗，大鼠分籠飼養(yǎng)，每個籠內(nèi)5只，室溫22～26℃，相對濕度55%～65%，晝夜循環(huán)，保持12 h光照，大鼠灌胃、添加飼料及換水等都有專人進行，大鼠飲用水為滅菌純水，普通飼料購自成都達碩實驗動物公司。

1.2 藥物及試劑

藥物：七子益腎理沖湯（女貞子15 g、菟絲子15 g、枸杞子 15 g、巴戟天15 g、覆盆子15 g、沙苑子 15 g、桑寄生 15 g、川斷 15 g、白芍 15 g、香附 12 g、黃芪 15 g），制成顆粒劑（來自我院），依據(jù)人鼠體重進行換算，制成濃度為0.295 g/mL的溶液，以6 mL/kg灌胃。

試劑：黃體生成素（LH）試劑盒（批號：2400543）；睪酮（T）試劑盒（國藥準字：S20050106）；卵泡刺激素（FSH）試劑盒（批號：3401125）；空腹胰島素（FINS）試劑盒（批號：3400637）；色素上皮衍生因子（PEDF）試劑盒（貨號：CSB-E08819r）；內(nèi)脂素（Visfatin）試劑盒（貨號：CSB-E08941r）；白細胞介素（IL-6）試劑盒（貨號：CSB-E04640r）；以上試劑均購自武漢華美科技公司。

1.3 方法

1.3.1 模型制備 采用高脂高卡飼料（蔗糖30%、雞蛋2%、豬油20%、奶粉4%、普通飼料44%）喂養(yǎng)80 d，并從第60天起由頸部向大鼠注射9 mg硫酸普拉睪酮鈉稀釋液，每天1次，連續(xù)注射20 d，注射的第21天采集大鼠靜脈血，檢測血清T、空腹血糖（FBG）、LH及FINS含量，算出胰島素敏感指數(shù)（ISI），剔除不符合IR型的PCOS模型，共計入選大鼠54只。

1.3.2 分組及給藥 按照隨機數(shù)字表法將PCOS IR模型大鼠分成觀察組（27只）和對照組（27只），觀察組采用劑量為6 mL/kg七子益腎理沖湯灌胃，對照組采用等劑量蒸餾水灌胃，每天1次，持續(xù)灌胃20 d。

1.4 觀察指標

1.4.1 大鼠血清性激素含量 大鼠末次給藥以后，禁止飲食、飲水24 h，腹腔注射0.3 mL 2%戊巴比妥鈉麻醉，采集腹主動脈血5 mL，3000 r/min離心（有效離心半徑10 cm）8 min后取上清液，化學免疫發(fā)光法檢測血清FSH、LH及T含量，計算LH/FSH值。

1.4.2 大鼠血糖含量、胰島素抵抗指數(shù)（HOMA-IR）及ISI放射免疫法檢測血清FINS及FBG含量，葡萄糖氧化酶法檢測胃管給葡萄糖后2 h血糖（OGTT-2 h BG）含量，采用李光偉等[8]提出的方法計算HOMA-IR和ISI，HOMA-IR=FINS×FBG/22.5，ISI=1/FINS×FBG。

1.4.3 大鼠上皮細胞炎性因子含量 酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法檢測卵巢上皮細胞內(nèi)炎性因子PEDF、Visfatin及IL-6含量。

1.5 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，采用獨立樣本t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組大鼠血清性激素含量比較

觀察組大鼠血清LH、T含量及LH/FSH均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組大鼠血清性激素含量比較（±s）

表1 兩組大鼠血清性激素含量比較（±s）

注： LH：黃體生成素；T：睪酮；FSH：卵泡刺激素

組別 只數(shù) LH（mU/mL） T（ng/mL） FSH（mU/mL） LH/FSH觀察組對照組t值P值27 27 4.48±0.49 5.80±0.52 9.637＜0.05 9.64±1.38 16.79±1.47 7.522＜0.05 2.02±0.26 1.75±0.24 1.053＞0.05 2.27±0.72 3.83±0.75 9.476＜0.05

2.2 兩組大鼠血糖含量、HOMA-IR及ISI比較

觀察組大鼠血清FBG、FINS、OGTT-2 h BG含量及HOMA-IR均低于對照組，ISI高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組大鼠血糖含量、HOMA-IR及ISI比較（±s）

表2 兩組大鼠血糖含量、HOMA-IR及ISI比較（±s）

注：HOMA-IR：胰島素抵抗指數(shù)；FBG：空腹血糖；ISI：胰島素敏感指數(shù)；FINS：空腹胰島素；OGTT-2 h BG：胃管給葡萄糖后2 h血糖

組別 只數(shù)HOMA-IR FBG（mmol/L） ISI FINS（g/L）OGTT-2 h BG（mmol/L）觀察組對照組27 27 t值 P值3.62±0.38 5.63±0.40 8.074＜0.05 3.96±0.52 5.65±0.57 9.376＜0.05 0.28±0.04 0.24±0.06 7.052＜0.05 16.83±0.17 22.31±0.19 8.552＜0.05 6.74±0.55 9.23±0.58 9.267＜0.05

2.3 兩組大鼠上皮細胞炎性因子含量比較

觀察組大鼠上皮細胞PEDF、Visfatin及IL-6含量均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3 兩組大鼠上皮細胞炎性因子含量比較（±s）

表3 兩組大鼠上皮細胞炎性因子含量比較（±s）

注：PEDF：色素上皮衍生因子；Visfatin：內(nèi)脂素；IL-6：白細胞介素-6

組別 只數(shù) PEDF（ng/mL） Visfatin（ng/mL） IL-6（pg/mL）觀察組對照組27 27 t值 P值18.84±0.63 32.90±0.68 10.074＜0.05 2.48±0.37 4.71±0.39 7.895＜0.05 22.61±1.56 32.09±1.59 8.339＜0.05

3 討論

PCOS的臨床特征、病理變化、卵巢形態(tài)學改變均具有顯著的種族和個體差異[9]，且PCOS患者多伴有IR，分泌過多的胰島素會導致體內(nèi)雄激素水平升高并促進其發(fā)揮生物學作用[10]。中醫(yī)學認為PCOS是本虛標實之證，本質(zhì)為脾腎兩虛，標是痰瘀阻滯胞宮而形成。一方面，水濕不化、脾失健運而造成痰濕內(nèi)生，進而痰濕阻滯產(chǎn)生血瘀，體內(nèi)痰瘀互結，對沖任胞宮阻滯，長時間蘊而化毒，產(chǎn)生了病理狀況[11-12]；另一方面，機體脾腎兩虛，造成運化無力，精微之物無法梳布全身，長時間化熱傷津，呈現(xiàn)出陰虛內(nèi)火瘀毒表象?，F(xiàn)代醫(yī)學研究顯示，體內(nèi)IR時多余的游離脂肪、胰島素和葡萄糖使機體陰陽平衡損壞，進而引發(fā)疾病[13]。另外，由于腎陽虧虛，機體溫煦推動力降低，造成身體功能下降，胰島素受體抵抗時表征是受體結構與功能異常，胰島素受體的數(shù)量和親和力降低造成胰島素結合量降低，受體喪失部分功能，受體結合胰島素后向細胞內(nèi)傳導信號導致代謝過程異常[14-17]。

“七子益腎理沖湯”是肖教授多年來臨床經(jīng)驗總結出的臨床驗方，從沖脈入手，重視腎、沖脈在女性生理病理中的重要地位，結合辨證，凡辨證為肝腎不足、沖脈失調(diào)的疾病均可應用。方中以女貞子、菟絲子、枸杞子、沙苑子益腎氣、滋腎陰，巴戟天、覆盆子補腎陽，桑寄生、川斷補腎氣而不滯始，顯“益腎理沖”之意，白芍、香附養(yǎng)肝疏肝，柔疏結合，沖脈得理，黃芪補氣健脾，氣行則沖血條達，全方共奏益腎養(yǎng)肝、調(diào)理沖脈之功[18-20]。肖教授運用“七子益腎理沖”湯治療PCOS IR患者，效果極佳。

本研究顯示，觀察組大鼠卵巢組織內(nèi)血清FINS、LH及T含量下降，使大鼠多囊化病理狀況得以改善。一方面通過升高PCOS大鼠ISI，降低HOMA-IR，使血清內(nèi)FINS含量降低，雄激素產(chǎn)生路徑被阻斷，血清內(nèi)雄激素含量下降，卵巢功能恢復，排卵情況得以改善；另一方面改善LH形成亢進，并使雄激素水平下降來誘發(fā)排卵。IL-6為多效能細胞因子，相關研究顯示IR及2型糖尿病與IL-6有緊密聯(lián)系，在2型糖尿病患者與肥胖者中，胰島素敏感性降低、糖耐量下降及血糖上升均與IL-6含量升高有關。Visfatin為一種新型的內(nèi)臟脂肪細胞慢性炎性因子，有類胰島素活性，同時可加速脂肪積聚、合成與分化，抑制肝細胞葡萄糖釋放。PEDF為新發(fā)現(xiàn)的脂肪因子，在IR和脂代謝內(nèi)有重要影響[21-24]。本研究顯示，觀察組大鼠上皮細胞PEDF、Visfatin及IL-6含量均低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，提示七子益腎理沖湯通過降低炎癥毒性和脂毒性，使葡萄糖轉(zhuǎn)化障礙降低，糖原合成量提升，IR得以糾正，高胰島素血癥下降。

綜上所述，七子益腎理沖湯可降低PCOS胰島素抵抗大鼠卵巢上皮細胞炎性因子含量，調(diào)節(jié)LH/FSH比值，改善高胰島素血癥與高雄激素血癥，使糖代謝紊亂得以調(diào)整。