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    急性腦梗死患者血清中miRNA-22的表達(dá)水平及臨床意義

    2018-12-15 05:16:50王念戴心怡
    中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志 2018年11期
    關(guān)鍵詞:腦梗死炎癥因子

    王念 戴心怡

    急性腦梗死的發(fā)生率約占腦卒中的70%左右[1],其療效通常隨著發(fā)病時(shí)間的延長而下降,治療的臨床結(jié)局通常依賴于早期診斷和快速的臨床決策[2]。然而,現(xiàn)階段急性腦梗死病理機(jī)制尚不完全清楚,因此急需研究急性腦梗死早期診療及預(yù)后評估的新型、有效的生物標(biāo)志物。研究報(bào)道急性腦梗死患者血清中存在某些異常的循環(huán)miRNA[3],參與了炎癥因子的釋放等多種生物學(xué)過程[4],影響急性腦梗死的診斷和預(yù)后。本研究討論急性腦梗死患者血清中miRNA-22的表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性,同時(shí)也分析其與一些關(guān)鍵促炎細(xì)胞因子的相關(guān)性。

    1 材料與方法

    1.1 一般資料納入2016年1~12月于我院就診的急性腦梗死患者100例作為ACI組,同時(shí)納入50例年齡、性別相匹配的正常體檢者作為對照組。收集急性腦梗死患者和對照組臨床病史資料,以及既往病史如:吸煙史、飲酒史、高血壓史、糖尿病史、高血脂史等資料。計(jì)算患者入院NIHSS評分和發(fā)病后第30天格拉斯哥預(yù)后(GOS)評分。所有患者在入院72h內(nèi)接受腦部CT或MRI檢查,診斷為急性腦梗死。急性腦梗死的診斷依照2013年美國心臟協(xié)會/美國中風(fēng)協(xié)會(AHA/ASA)指南要求進(jìn)行[5]。

    該研究獲得我院倫理委員會批準(zhǔn),所有參與者均簽訂知情同意書。入選標(biāo)準(zhǔn)如下: ①初次發(fā)病的急性腦梗死者;②急性腦梗死患者存活時(shí)間超過72h者;③經(jīng)頭顱CT或MRI確診為急性腦梗死者。排除標(biāo)準(zhǔn):①出血性腦卒中者;②短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)者;③眩暈綜合征者;④顱內(nèi)腫瘤及其他部位惡性腫瘤者;⑤癲癇者;⑥近2個(gè)月內(nèi)有感染發(fā)作病史者;⑦既往有自身免疫性疾病病史者;⑧血液疾病者;⑨肝腎功能不全者等。

    觀察指標(biāo):急性腦梗死患者和健康對照組臨床資料及既往病史資料;入院24h內(nèi)血清miRNA-22、CRP、IL-6、IFN-γ 及 PCT水平;入院后 NIHSS評分及發(fā)病第30天GOS評分。

    1.2 研究方法

    1.2.1 標(biāo)本采集 清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集患者及對照者靜脈血5ml,室溫離心10min,收集血清并放置-80℃保存待測。

    1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 利用 TRIzol (Invitrogen)從血清樣本中提取總RNA,并在ABI 7500實(shí)時(shí)PCR 儀器上利用 Hairpin-itTM miRNAs qPCR 定量試劑盒(中國上海吉瑪制藥)檢測miRNA-22的相對表達(dá)量,而U6 (RNU6B,中國上海吉瑪制藥)則用來作為內(nèi)參對照。PCR循環(huán)程序?yàn)椋?95℃ 持續(xù)30s;隨后 95℃持續(xù) 5s , 60℃ 持續(xù) 30s,并連續(xù) 40個(gè)循環(huán)。引物在南京金斯瑞公司合成。

    1.2.3 檢測血清中細(xì)胞因子 利用酶聯(lián)免疫吸附方法(ELISA)檢測ACI患者和健康對照組血清中CRP、IL-6、IFN-γ及PCT的水平。嚴(yán)格按照C-反應(yīng)蛋白檢測試劑盒(免疫比濁法)、IL-6定量測定試劑盒(上轉(zhuǎn)發(fā)光法)、IFN-γ檢測試劑盒(膠體金法)及PCT測定試劑盒(化學(xué)發(fā)光法)及相關(guān)檢測設(shè)備的操作流程。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法利用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。卡方檢驗(yàn)對定量數(shù)據(jù)進(jìn)行檢查,如果定量數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布,則使用t檢驗(yàn)或者ANOVA方法。Spearman 和Pearson分析用來檢查變量之間的相關(guān)性。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 臨床資料比較兩組一般臨床資料對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表1。

    表1 兩組臨床資料比較[n(%)]

    2.2 急性腦梗死患者發(fā)病后第30天GOS評分急性腦梗死患者發(fā)病后30天GOS評分5分29例,4分55例,3分12例,2分3例,1分1例。

    2.3 兩組血清中miRNA-22水平表達(dá)的比較ACI組與對照組患者血清中miRNA-22的表達(dá)分別為1.89±0.23與1.01±0.11,ACI組顯著上升(t=-21.72,P<0.05)。miRNA-22 ROC曲線下面積(AUC)為0.912,95%CI 0.887~0.962,最優(yōu)割點(diǎn)為 1.5,而切點(diǎn)的敏感性和特異性分別為81.46%和95.4%。

    2.4 急性腦梗死患者血清miRNA-22的表達(dá)水平與患者GOS評分和NIHSS評分相關(guān)性GOS ≤3分的患者16例,GOS=4分患者55例,GOS=5分患者29例。急性腦梗死患者血清中miRNA-22的表達(dá)水平與 GOS 評分呈正相關(guān)(r=0.5954,P<0.001)。miRNA-22與 NHISS評 分 呈 負(fù) 相 關(guān)(r=-0.6547,P<0.0001)。

    2.5 兩組血清中炎癥因子表達(dá)水平比較急性腦梗死患者入院24h內(nèi)血清中CPR水平、IL-6水平、IFN-γ水平均較對照組表達(dá)顯著增加(P<0.05),而PCT水平較對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05),見表2。

    表2 兩組CPR、IL-6、IFN-γ及PCT表達(dá)水平

    2.6 急性腦梗死患者血清中CPR 、IL-6和IFN-γ的表達(dá)與短期預(yù)后GOS評分、NIHSS評分、miRNA-22表達(dá)水平的相關(guān)性急性腦梗死患者血清中炎癥細(xì)胞因子CPR、IL-6和IFN-γ的表達(dá)水平與GOS評分、NIHSS評分、miRNA-22表達(dá)水平都無相關(guān)性,見表3。

    表3 急性腦梗死患者血清中CPR、IL-6、IFN-γ的表達(dá)與GOS評分、NIHSS評分、miRNA-22表達(dá)的相關(guān)性

    3 討論

    急性腦梗死是臨床急診中常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一[6]。在大多數(shù)情況下,急性腦梗死發(fā)病突然,而且腦梗死的進(jìn)展很快,因此在患者入院后的幾個(gè)小時(shí)內(nèi),如果沒有給予合適的治療,患者可能會錯(cuò)過最佳治療時(shí)間。因此,有效的早期診斷和預(yù)測生物標(biāo)志物將幫助醫(yī)生制訂快速的臨床決策并對腦梗死的預(yù)后做出判斷。

    越來越多的研究發(fā)現(xiàn),急性腦梗死能夠誘發(fā)炎癥因子的釋放,導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的發(fā)生[7]。一方面,機(jī)體功能的抑制,有利于炎癥反應(yīng)的發(fā)生,另一方面,炎癥反應(yīng)能夠促使神經(jīng)系統(tǒng)功能惡化[8]。急性腦梗死發(fā)生后,炎癥因子被激活并迅速釋放至大腦組織和周圍血液中[9],炎癥反應(yīng)進(jìn)一步促進(jìn)了神經(jīng)細(xì)胞的凋亡[10]。急性腦梗死患者病情的嚴(yán)重程度和預(yù)后不僅與神經(jīng)系統(tǒng)損傷的嚴(yán)重程度相關(guān),炎癥反應(yīng)也是干預(yù)急性腦梗死預(yù)后的重要原因[11]。

    MicroRNA作為一種神經(jīng)元基因表達(dá)的重要調(diào)控因子,成為腦梗死患者一種新的早期診斷和臨床預(yù)后預(yù)測的生物標(biāo)志物[12]。Tian等[13]證明血漿中miR-16是超早期腦梗死的診斷和治療的標(biāo)志物;miR-29b可以作為腦梗死預(yù)后預(yù)測的生物標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)[14]。

    不同研究中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了腦梗死患者血清中多種炎癥因子的異常表達(dá)[15,16]。既往研究發(fā)現(xiàn)急性腦梗死患者血清中TNF-α、IFN-γ、IL-22和 IL-6等炎癥因子出現(xiàn)異常表達(dá)[17]。一些循環(huán)miRNA的表達(dá)也與炎癥反應(yīng)具有相關(guān)性[18]。 Puskarich 等研究發(fā)現(xiàn) miRNA-146a、miRNA-223 和 miRNA-150 的表達(dá)與感染性休克具有相關(guān)性,而且 miRNA-150的表達(dá)與感染性休克患者的死亡率相關(guān)[19]。

    miRNA-22和炎癥因子水平的高表達(dá),提示miRNA-22在促進(jìn)炎癥反應(yīng)方面可能發(fā)揮作用,本次研究發(fā)現(xiàn)miRNA-22與炎癥因子在急性腦梗死患者血清中表達(dá)均升高,但無相關(guān)性。miRNA-22是否直接通過某些炎性信號通路作用于炎癥因子的表達(dá),有待進(jìn)一步研究。

    在本次研究中發(fā)現(xiàn)急性腦梗死患者血清中CRP、IL-6、IFN-γ表達(dá)水平上調(diào),但與患者入院NIHSS評分和GOS評分無相關(guān)性。盡管上述促炎性因子可能并不是miRNA-22的直接靶點(diǎn)。但是,miRNAs和促炎細(xì)胞因子之間的正相關(guān)性提示miRNA-22表達(dá)的異常上升導(dǎo)致某些炎性信號通路中的關(guān)鍵信號分子的表達(dá)增加,并增加促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生。這些結(jié)果提示miRNA-22可能通過促進(jìn)炎癥反應(yīng)進(jìn)而加快急性腦梗死的發(fā)生和進(jìn)展。

    本研究不足之處在于病例數(shù)相對較少,同時(shí)僅有GOS評分,沒有生存和死亡的臨床結(jié)局。因此我們還需要進(jìn)行較大規(guī)模的臨床前瞻性研究,來探明miRNA-22在急性腦梗死進(jìn)展及預(yù)后的作用。

    綜上所述,miRNA-22表達(dá)水平與患者病情嚴(yán)重程度及患者短期預(yù)后相關(guān),有潛力成為一種急性腦梗死的診斷和進(jìn)展預(yù)后預(yù)測的生物標(biāo)志物。ACI患者血清炎癥因子CRP、IL-6、IFN-γ水平在急性腦梗死早期升高,但與急性腦梗死神經(jīng)系統(tǒng)功能缺失程度及患者預(yù)后不相關(guān)。

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