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    土茯苓叢生芽誘導(dǎo)與增殖培養(yǎng)技術(shù)優(yōu)化

    2018-12-12 09:21:40梁崇廖莉莉
    熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年8期
    關(guān)鍵詞:增殖土茯苓

    梁崇 廖莉莉

    摘要 為優(yōu)化土茯苓的組織培養(yǎng)技術(shù)體系,提高土茯苓組織培養(yǎng)效率,促進(jìn)其資源保護(hù)和合理開發(fā)利用。以土茯苓帶腋芽莖段為外植體,采用組織培養(yǎng)方法,研究不同外源激素配比對(duì)莖段叢生芽誘導(dǎo)分化和不定芽增殖的影響。結(jié)果表明:土茯苓莖段叢生芽誘導(dǎo)分化最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.2mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L,芽誘導(dǎo)倍數(shù)達(dá)6.35,不定芽增殖的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L,其增殖數(shù)高達(dá)8.8,且芽生長良好。

    關(guān)鍵詞 土茯苓;叢生芽;誘導(dǎo)分化;增殖

    中圖分類號(hào) S567.32 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A

    土茯苓(Smilax glabra Roxb.)為百合科菝葜屬植物,為傳統(tǒng)清熱解毒常用中藥,具有調(diào)中止瀉、健脾胃、強(qiáng)筋骨、除濕、利關(guān)節(jié)等功效[1,2]?,F(xiàn)代分析土茯苓含生物堿、揮發(fā)油、已糖類、鞣酸、植物甾醇、琥珀酸、胡蘿b苷、落新婦苷、白藜蘆醇、異黃杞苷、異落新婦苷、抽皮素等多種成分[3,4]。臨床和藥理治療試驗(yàn)表明,土茯苓具有利尿、鎮(zhèn)痛、抗癌、抗動(dòng)脈硬化、抑菌抗炎及增強(qiáng)肌體免疫作用[5-10]。另外,土茯苓含有的甾體皂苷元為我國制作口服避孕藥的主要半合成原料[11]。廣西是土茯苓的道地產(chǎn)區(qū),由于土茯苓功用逐年開發(fā),其用量逐年增長,而土茯苓野生資源長年被無序利用及產(chǎn)地發(fā)展經(jīng)濟(jì)林對(duì)其生境的破壞,野生資源逐年消殆,市場貨源日漸緊缺[13]。因此,開展土茯苓的人工栽培以滿足市場需求勢在必行。

    土茯苓的人工栽培需解決種苗問題,然而土獲等扦插及種子繁殖均不理想;在組培方面,只有少數(shù)學(xué)者作了一些研究[12,13]。但多采用土茯苓根莖做培養(yǎng)材料,一定程度上損耗了具有高藥用價(jià)值的資源。本試驗(yàn)選擇取材方便且不具有較大藥用價(jià)值的土茯苓帶腋芽莖段進(jìn)行叢芽的誘導(dǎo)與芽增殖培養(yǎng)優(yōu)化技術(shù)研究,以期變廢為寶,在原有組織培養(yǎng)技術(shù)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步優(yōu)化改進(jìn)培養(yǎng)技術(shù),為土茯苓大規(guī)??焖俑咝Х敝程峁┘夹g(shù)參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    選用引種的土茯苓植株,取當(dāng)年生嫩莖為外植體

    1.2 方法

    1.2.1 無菌材料處理

    將土茯苓嫩莖置洗衣粉水中浸泡5min,用自來水細(xì)流水沖洗8min;在超凈工作臺(tái)上用0.2%HgCl2浸泡消毒8min,然后用無菌水浸洗3~4次,每次1min;將帶有嫩芽的外植體切成長約1.5cm[14]。

    1.2.2 叢生芽誘導(dǎo)

    以MS為基本培養(yǎng)基,添加不同濃度配比的6-芐基氨基腺嘌呤(6-BA)、激動(dòng)素(KT)、茶乙酸(NAA)。設(shè)置13種培養(yǎng)基,見表1。每種培養(yǎng)基20瓶,每瓶接種1個(gè)外植體,在培養(yǎng)條件含蔗糖2.5%,瓊脂0.5%,溫度(25±2)℃,光照時(shí)間10h/d,光照強(qiáng)度1500~20001x下培養(yǎng)[14]。培養(yǎng)期間定時(shí)觀察叢生芽生長情況,培養(yǎng)粼]d后統(tǒng)計(jì)不定芽數(shù)。

    1.2.3 叢生芽的繼代增殖

    將誘導(dǎo)獲得的叢生芽分成單芽轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)。設(shè)置4種培養(yǎng)基,見表2。培養(yǎng)條件與

    1.2.2 相同,培養(yǎng)40d后統(tǒng)計(jì)叢生芽的增殖數(shù)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同細(xì)胞分裂素及其濃度對(duì)叢生芽誘導(dǎo)分化的影響

    細(xì)胞分裂素是植物組織培養(yǎng)中促進(jìn)組織分化和生長的物質(zhì),其不同種類及濃度對(duì)組織的分化和生長有不同程度的影響。在土茯苓莖段叢芽分化培養(yǎng)中,6-BA的作用效果比KT顯著。6-BA在0.6~1.8,芽的誘導(dǎo)倍數(shù)隨著濃度的升高而提高。從叢生芽數(shù)和芽的長勢來看,不同濃度的6-BA對(duì)土茯苓叢生芽的誘導(dǎo)有很大影響。隨著6-BA濃度的增加,叢生芽誘導(dǎo)數(shù)也不斷提高,當(dāng)6-BA濃度達(dá)1.8mg幾時(shí)誘導(dǎo)叢芽數(shù)最多,誘導(dǎo)倍數(shù)為(3.35±0.6),比對(duì)照CK(0.4±0.48)提高了8倍多,芽較粗壯。當(dāng)6-BA濃度大于1.8mg/L,叢生芽減少,嚴(yán)重玻璃化。在8個(gè)處理中,6-BA1.8mg/L芽誘導(dǎo)倍數(shù)最高,與其它各處理間存在極顯著差異,其次為6-BA1.2mg/L。因此,土茯苓叢生芽分化誘導(dǎo)以細(xì)胞分裂素6-BA,濃度1.2~1.8mg/L為宜。結(jié)果見表3。

    2.2 不同外源激素及濃度配比對(duì)叢生芽誘導(dǎo)分化的影響

    在不同外源激素及濃度配比的培養(yǎng)基中土獲苓莖段都有不同程度的叢生芽分化。從分化叢生芽數(shù)和芽的長勢來看,以12號(hào)培養(yǎng)基最佳,平均芽誘導(dǎo)倍數(shù)為(6.35±1.01),與其它培養(yǎng)基存在顯著性差異。相同的6-BA濃度下,添加低濃度NAA對(duì)芽的誘導(dǎo)有促進(jìn)作用,同時(shí)減輕叢芽玻璃化;添加低濃度的KT可較大幅度提高叢芽的誘導(dǎo)倍數(shù)。結(jié)果見表4。

    2.3 叢生芽的繼代增殖

    叢生芽轉(zhuǎn)接于繼代培養(yǎng)基中,在4種不同外源激素配比的繼代培養(yǎng)基中均有不同程度的叢生芽增殖,且以16號(hào)培養(yǎng)基增殖最好,平均芽增殖倍數(shù)達(dá)(8.8±1.02),生長健壯,與其它增殖培養(yǎng)基存在顯著性差異;其次是巧號(hào)培養(yǎng)基。結(jié)果見表5、圖1。

    3 討論與結(jié)論

    植物內(nèi)源激素的調(diào)控是叢生芽成功誘導(dǎo)的重要因素。在植物組織培養(yǎng)過程中,外源生長物質(zhì)對(duì)植物形態(tài)的分化作用實(shí)際上是重新調(diào)整了內(nèi)源生長素和細(xì)胞分裂素的平衡,外植體組織中內(nèi)源激素水平的不同引起培養(yǎng)基中最適外源生長物質(zhì)濃度的變化[15]。植物的器官分化需要較嚴(yán)格的細(xì)胞分裂素和生長素平衡。因此,不同植物的組織培養(yǎng)就有不同生長物質(zhì)種類及濃度的需要。在土茯苓帶腋芽莖段叢生芽誘導(dǎo)和不定芽增殖培養(yǎng)試驗(yàn)中,適當(dāng)?shù)姆至阉睾蜕L素濃度對(duì)土茯苓叢生芽的分化有很大的影響。配比過低不利于叢生芽的誘導(dǎo)萌發(fā),配比過高,則會(huì)導(dǎo)致叢生芽產(chǎn)生玻璃化。且2種細(xì)胞分裂素與生長素配比組合比單一細(xì)胞分裂素及單一細(xì)胞分裂素、生長素配比較好,這可能是因?yàn)樵谕淋蜍唠x體培養(yǎng)中,6-BA雖是主要、需求量較大的外源細(xì)胞分裂素,但KT作為一種非天然的細(xì)胞分裂素被植物的葉、莖、緩慢吸收,其促進(jìn)細(xì)胞分化、分裂、生長,誘導(dǎo)愈傷組織長芽的機(jī)理功能可能是6-BA所不具備的,少量KT的添加,可以使植物外植體達(dá)到一個(gè)新的完美平衡,從而促使叢生芽大幅度提高,這與廖莉莉[14]等研究的KT對(duì)金櫻子芽誘導(dǎo)與增殖影響結(jié)果相似,添加KT比前人研究的土茯苓芽增殖及同屬菝葜的嫩莖芽誘導(dǎo)增殖增加1倍以上[13,16],且芽生長健壯。因此,土茯苓帶腋芽莖段叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)中以6-BA1.2mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L組合最好,誘導(dǎo)倍數(shù)可達(dá)6倍以上。不定芽增殖培養(yǎng)中,以6-BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.2mg/L組合最好,增殖倍數(shù)可高達(dá)8.8,且芽長勢良好。

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