珍珠龍膽石斑魚(yú)低溫有水保活條件優(yōu)化

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(廣東海洋大學(xué)食品科技學(xué)院,廣東省水產(chǎn)品加工與安全重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東省海洋食品工程技術(shù)研究中心,水產(chǎn)品深加工廣東普通高等學(xué)校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東湛江 524088)

珍珠龍膽石斑魚(yú)(♀Epinephelusfuscoguttatus×♂Epinepheluslanceolatus)屬鱸形目(Perciformes)、鮨科(Serranidae)、斑魚(yú)屬(Epinephelus),主要分布于我國(guó)東南沿海,是目前養(yǎng)殖的主要品種之一,且營(yíng)養(yǎng)豐富,是一種暖水性的大中型海洋高檔名貴魚(yú)類[1],深受消費(fèi)者和養(yǎng)殖者青睞[2],但因分布地區(qū)的局限性,難以滿足實(shí)際需求,而且其性格暴躁,背部和腹部有尖刺,運(yùn)輸過(guò)程中環(huán)境的變化會(huì)使其產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),劇烈掙扎,易受傷[3]。對(duì)其保活運(yùn)輸?shù)难芯繄?bào)道較少,田朝陽(yáng)[4]通過(guò)運(yùn)輸機(jī)組對(duì)石斑魚(yú)的長(zhǎng)距離運(yùn)輸技術(shù)進(jìn)行了研究,存活時(shí)間長(zhǎng)達(dá)48 h,成活率100%,但技術(shù)參數(shù)要求高。

對(duì)魚(yú)類?；钸\(yùn)輸?shù)难芯勘砻?低溫條件下,可使魚(yú)類達(dá)到休眠或深度鎮(zhèn)靜狀態(tài),使魚(yú)體內(nèi)各種酶的活性降低,進(jìn)而降低應(yīng)激反應(yīng)和新陳代謝水平,從而減緩水質(zhì)惡化及運(yùn)輸過(guò)程中帶來(lái)的機(jī)械損傷[5-6],從而達(dá)到延長(zhǎng)魚(yú)類存活時(shí)間、改善運(yùn)輸后魚(yú)體品質(zhì)的目的。Jag等[7]指出,在水溫較低的條件下,魚(yú)類的活動(dòng)量大大減少,能減緩魚(yú)類的代謝作用。劉偉東[8]在低溫有水條件下對(duì)大菱鲆的存活時(shí)間進(jìn)行研究,結(jié)果表明大菱鲆有水?；?2 h成活率達(dá)到100%,但未提及保活密度。白艷龍[9]對(duì)黃顙魚(yú)的低溫?zé)o水保活進(jìn)行了研究,結(jié)果表明:暫養(yǎng)48 h后,在低溫充氧條件下可?；?4 h。由此可見(jiàn)保活密度、溫度、暫養(yǎng)等對(duì)魚(yú)類的?；钸\(yùn)輸具有重要影響,對(duì)其研究具有重要意義。本文以珍珠龍膽石斑魚(yú)為研究對(duì)象,探討了不同溫度、暫養(yǎng)時(shí)間、保活密度、降溫模式等條件對(duì)石斑魚(yú)?；畹挠绊?確定了最佳的保活條件,以期為石斑魚(yú)成魚(yú)的?；钸\(yùn)輸?shù)於ɑA(chǔ),同時(shí)為我國(guó)海水魚(yú)成魚(yú)的?；钸\(yùn)輸提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

珍珠龍膽石斑魚(yú)(♀Epinephelusfuscoguttatus×♂Epinepheluslanceolatus) 湛江市水產(chǎn)市場(chǎng),體表無(wú)損傷,健康無(wú)病害,體重為480～510 g/尾,充氧帶水運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室;白蛋白、球蛋白、皮質(zhì)醇、血糖、甘油三脂、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐試劑盒 南京建成生物工程研究所;納氏試劑 生化試劑,天津久木科技有限公司;四水合酒石酸鉀鈉、氯化銨 分析純,西隴科學(xué)股份有限公司;MS-222麻醉劑 分析純,上海源葉生物科技有限公司。

FIM-120G顆粒制冰機(jī) 上海弗格森制冷設(shè)備有限公司;Cary 60 紫外分光光度計(jì) 安捷倫科技有限公司;5810R 臺(tái)式高速大容量離心機(jī) 艾本德中國(guó)有限公司;Var i oskan 全自動(dòng)酶標(biāo)儀 塞默飛世爾科技中國(guó)有限公司;PB-10 pH計(jì) 賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;DDS-307A 電導(dǎo)率儀雷磁 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司;電子稱 廣東香山衡器集團(tuán)股份有限公司;冷風(fēng)式冷庫(kù)機(jī)組 東莞市科安制冷設(shè)備有限公司,溫度范圍4～25 ℃。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 石斑魚(yú)的前處理 本試驗(yàn)在2017年7月進(jìn)行。珍珠龍膽石斑魚(yú)自市場(chǎng)購(gòu)買回來(lái)后,置于暫養(yǎng)池中,魚(yú)體暫養(yǎng)密度50 g/L,海水鹽度23‰～25‰,水溫23～25 ℃,采用砂濾循環(huán)海水(1100 L/h),空氣泵充氧(100 L/min),保證水體溶解氧為5～8 mg/L,暫養(yǎng)一定時(shí)間后用于試驗(yàn)。

1.2.2 單因素實(shí)驗(yàn) 珍珠龍膽經(jīng)過(guò)一定暫養(yǎng)時(shí)間后,以不同的降溫模式降至休眠狀態(tài),轉(zhuǎn)移到50 L的塑料箱中,每箱2尾魚(yú),每組三個(gè)重復(fù),共6尾魚(yú),在一定溫度,一定魚(yú)密度,一定鹽度條件下進(jìn)行試驗(yàn),分別記錄存活時(shí)間。試驗(yàn)過(guò)程均采用空氣泵充氧,簡(jiǎn)易循環(huán)水系統(tǒng)加過(guò)濾棉凈化海水。

1.2.2.1 不同溫度對(duì)石斑魚(yú)存活時(shí)間影響 將暫養(yǎng)24 h休眠狀態(tài)的石斑魚(yú)按?；蠲芏葹?00 g/L加入鹽度為25‰新鮮海水,調(diào)節(jié)冷庫(kù)溫度為13、15、18、20、25 ℃,記錄存活時(shí)間。

1.2.2.2 不同?；蠲芏葘?duì)石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響 將暫養(yǎng)24 h休眠狀態(tài)的石斑魚(yú)按保活密度為100、133、200、333 g/L分別加入鹽度為25‰的新鮮海水,在水溫為15 ℃條件下進(jìn)行?；?分別記錄存活時(shí)間。

1.2.2.3 不同降溫模式對(duì)石斑魚(yú)?；顣r(shí)間的影響 取暫養(yǎng)24 h、健康無(wú)病的石斑魚(yú)，分別采用直接降溫(30 min內(nèi)降至休眠溫度)、勻速降溫(2 ℃/h)降至休眠狀態(tài)、梯度降溫(水溫26～20，3、20～15，2、15～10 ℃，1 ℃/h)、在水溫15 ℃，魚(yú)密度為100 g/L條件下進(jìn)行?；睿謩e記錄?；顣r(shí)間。

1.2.2.4 不同暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響 取分別暫養(yǎng)0、24、48 h的石斑魚(yú),經(jīng)低溫誘導(dǎo)休眠后按?；蠲芏葹?00 g/L條件下進(jìn)行試驗(yàn),在海水鹽度為25‰,水溫為15 ℃條件下進(jìn)行?；?分別記錄存活時(shí)間。

1.2.2.5 不同鹽度對(duì)石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響 將暫養(yǎng)48 h休眠狀態(tài)的石斑魚(yú)按?；蠲芏?00 g/L分別加入不同鹽度(15‰、25‰、35‰)的新鮮海水,在水溫為15 ℃條件下進(jìn)行?；?分別記錄存活時(shí)間。

1.2.3 正交試驗(yàn) 選擇暫養(yǎng)48 h,海水鹽度為25‰,通過(guò)不同的?；顪囟取⒈；蠲芏?、降溫模式進(jìn)行三因素三水平正交試驗(yàn),如表1所示,以存活時(shí)間和水中氨氮濃度作為指標(biāo)進(jìn)行單因素方差分析,確定最佳?；顥l件,并對(duì)最佳?；顥l件進(jìn)行驗(yàn)證,分別測(cè)定石斑魚(yú)在最佳?；顥l件下的存活時(shí)間,水質(zhì)(pH、電導(dǎo)率、總氨氮含量、非離子氨氮濃度)及血清生理生化指標(biāo)的變化。

表1 正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)Table 1 Orthogonal experimental factors and levels design

1.2.4 存活時(shí)間 從低溫誘導(dǎo)休眠至死亡前的這段時(shí)間記為存活時(shí)間,期間每隔4～6 h觀察一次,通過(guò)刺激魚(yú)體觀察有無(wú)反應(yīng)或者將魚(yú)體放入常溫海水中30 min觀察魚(yú)鰓蓋是否開(kāi)閉,判斷魚(yú)體是否死亡。

1.2.5 水質(zhì)指標(biāo)的分析方法 保活過(guò)程水體pH采用pH計(jì)監(jiān)測(cè);電導(dǎo)率儀測(cè)定水體電導(dǎo)率;海水中的總氨氮濃度的測(cè)定按照GB3097-1997《中華人民共和國(guó)海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》[10],采用納氏試劑法測(cè)定。非離子氨氮采用計(jì)算法[11]。

1.2.6 血液生化指標(biāo)的測(cè)定 將魚(yú)體從?；钕渲锌焖贀破?投入到濃度為200 mg/L的MS-222麻醉液中,麻醉后用10 mL的一次性無(wú)菌注射器(預(yù)先用質(zhì)量百分比1%肝素鈉溶液浸潤(rùn)內(nèi)壁和針頭)尾動(dòng)脈抽血,抽血后注入到肝素鈉抗凝的采血管中,緩慢搖晃均勻,4 ℃下3000 r/min離心20 min,取其血清,乳酸脫氫酶(LDH)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLB)尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)均采用試劑盒測(cè)定;皮質(zhì)醇含量用酶聯(lián)免疫法測(cè)定;采用葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)血清中葡萄糖(GLU)的含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用 SPSS 19.0 軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析,在單因素方差分析(ANOVA)的基礎(chǔ)上采用最小極差法(LSD)進(jìn)行組間比較,取p<0.05 為差異顯著,利用Excel 2007軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同溫度對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響

由圖1可以看出,石斑魚(yú)在溫度為13 ℃條件下存活時(shí)間低于24 h;在15～25 ℃之間,隨著?；顪囟鹊纳仙?存活時(shí)間下降,在15 ℃時(shí)存活時(shí)間最長(zhǎng)達(dá)到128 h,且15、18、20 ℃組間存活時(shí)間無(wú)顯著差異(p>0.05);在25 ℃時(shí)存活時(shí)間降至85 h。溫度是活魚(yú)運(yùn)輸?shù)闹匾绊懸蛩刂?適當(dāng)?shù)牡蜏丨h(huán)境可減少魚(yú)體的耗氧量、降低其新陳代謝、減輕水質(zhì)惡化、提高成活率、延長(zhǎng)存活時(shí)間[8,12]。但溫度過(guò)高不利于石斑魚(yú)的生存,原因是溫度過(guò)高會(huì)使低溫休眠后的石斑魚(yú)代謝紊亂,溫度過(guò)低會(huì)影響部分與其生命活動(dòng)相關(guān)的酶的活性,進(jìn)而影響存活時(shí)間。因此15～20 ℃是適合珍珠龍膽石斑魚(yú)的?；顪囟?。Golombieski 等[13]研究發(fā)現(xiàn)在15 ℃條件下運(yùn)輸銀鯰魚(yú)的存活率明顯高于20 ℃和25 ℃下的,與本研究結(jié)果相似。

圖1 不同?；顪囟葘?duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響Fig.1 Effect of preservation temperature on the srvival time of grouper注：不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(p<0.05);圖2～圖5同。

2.2 不同?；蠲芏葘?duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響

由圖2可以看出,珍珠龍膽石斑魚(yú)的成活率隨?；蠲芏鹊臏p小而增大,與張麗[14]對(duì)大黃魚(yú)保活運(yùn)輸及冰鮮的研究結(jié)果一致。在保活密度為333 g/L存活時(shí)間顯著下降至最低60 h,?；蠲芏仍?00、133、200 g/L下存活時(shí)間無(wú)顯著差異,但在100 g/L?；蠲芏认麓婊顣r(shí)間最長(zhǎng),達(dá)到112 h,原因是?；蠲芏容^小的情況下可以減緩魚(yú)類的應(yīng)激反應(yīng),防止因代謝紊亂而死亡,同時(shí)能夠達(dá)到稀釋水中氨氮濃度的作用,防止魚(yú)體氨氮中毒,進(jìn)而達(dá)到延長(zhǎng)存活時(shí)間的效果。因此100～200 g/L?；蠲芏冗m合珍珠龍膽石斑魚(yú)的?；钸\(yùn)輸。

圖2 不同?；蠲芏葘?duì)珍珠龍膽石斑存活時(shí)間的影響Fig.2 Effect of preservation densityon the survival time of grouper

2.3 不同降溫模式對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響

由圖3可以看出，采用直接降溫模式的石斑魚(yú)保活時(shí)間最短，僅有52 h，而勻速將溫模式和梯度降溫模式可長(zhǎng)達(dá)130 h以上，且無(wú)顯著性差異。原因是溫度的劇烈變化直接影響機(jī)體的代謝活動(dòng)，間接支配著魚(yú)體的生活和生存[12]。采用梯度降溫與勻速降溫模式的兩組?；顣r(shí)間相差不大，是因?yàn)樗疁氐木徛兓刽~(yú)體有一個(gè)適應(yīng)的過(guò)程，不至于代謝紊亂，進(jìn)而延長(zhǎng)存活時(shí)間。

圖3 不同降溫模式對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響Fig.3 Effect of different cooling modeson the survival time of pearl gentian grouper

2.4 不同暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響

由圖4可以看出,石斑魚(yú)的存活時(shí)間隨暫養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而延長(zhǎng),暫養(yǎng)0 h條件下存活時(shí)間顯著低于暫養(yǎng)48 h。暫養(yǎng)24、48 h組間無(wú)顯著差異,但暫養(yǎng)48 h后的存活時(shí)間達(dá)到最大值132 h。原因是通過(guò)暫養(yǎng)可使魚(yú)體內(nèi)的代謝廢物大幅度減少,從而減緩水質(zhì)的惡化,而且可以緩解魚(yú)體應(yīng)激反應(yīng),延長(zhǎng)存活時(shí)間[3]。暫養(yǎng)24～48 h的石斑魚(yú)存活時(shí)間延長(zhǎng)至96～132 h,存活96 h前水體較為清澈,但96 h之后,魚(yú)體分泌蛋白粘液增多,水體中泡沫增加,影響魚(yú)的呼吸。因此暫養(yǎng)24～48 h適合珍珠龍膽石斑魚(yú)的?；钛芯?。Berka[15]認(rèn)為,活魚(yú)運(yùn)輸前應(yīng)停食1 d以上,運(yùn)輸時(shí)間可提高1倍。劉淇等[16]研究暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)牙鲆無(wú)水?；顣r(shí)間的影響,結(jié)果表明不經(jīng)暫養(yǎng)的牙鲆?；顣r(shí)間僅有32 h,而暫養(yǎng)48 h后,保活時(shí)間可提高到64 h。

圖4 不同暫養(yǎng)時(shí)間對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響Fig.4 Effect of holding time on the survival time of grouper

2.5 不同鹽度對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響

由圖5可以看出,珍珠龍膽石斑魚(yú)在鹽度25‰的水體中存活時(shí)間最長(zhǎng),達(dá)到132 h,而在15‰,35‰鹽度的水體中存活時(shí)間均顯著降低(p<0.05)。這與魚(yú)類的適應(yīng)環(huán)境能力有關(guān),珍珠龍膽石斑魚(yú)適應(yīng)鹽度范圍為11‰～41‰,最適生長(zhǎng)鹽度范圍為25‰～35‰,低于5‰出現(xiàn)死亡[17]。當(dāng)水體鹽度低于25‰或高于35‰時(shí),魚(yú)體受到脅迫產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng),導(dǎo)致存活能力下降。因此,珍珠龍膽石斑魚(yú)?；钸\(yùn)輸?shù)淖钸m水體鹽度為25‰。研究發(fā)現(xiàn)鯉魚(yú)使用含9 g/L NaCl的水運(yùn)輸可明顯提高運(yùn)輸存活率[18],大量研究表明在運(yùn)輸水中適當(dāng)添加鹽有利于淡水魚(yú)運(yùn)輸[19-20];但Gomes等[21]研究發(fā)現(xiàn)巨舌滑魚(yú)幼魚(yú)在塑料袋包裝運(yùn)輸時(shí)添加NaCl不僅沒(méi)有減少應(yīng)激還導(dǎo)致滲透壓調(diào)節(jié)障礙。因此改變水體鹽度的運(yùn)輸方法并不適合海水魚(yú)類運(yùn)輸。

圖5 不同鹽度對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)存活時(shí)間的影響Fig.5 Effect of different salinity on the survival time of grouper

2.6 正交試驗(yàn)結(jié)果

通過(guò)正交試驗(yàn)以存活時(shí)間作單因素方差分析可知(見(jiàn)表3),?；顪囟扰c保活密度對(duì)存活時(shí)間具有顯著性影響(p<0.05),而降溫模式對(duì)存活時(shí)間無(wú)顯著性影響(p>0.05)。對(duì)存活時(shí)間的影響A(?；顪囟?>B(保活密度)>C(降溫模式),根據(jù)均值(見(jiàn)表4)確定最佳水平為:A1B1C2,即:?；顪囟?5 ℃,?；蠲芏?00 g/L,降溫模式為梯度降溫。

表2 正交試驗(yàn)表設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 Design of orthogonal experimental table and experimental results

表3 方差分析表(因變量:存活時(shí)間)Table 3 ANOVA table(dependent variable:survival time of grouper)

表4 存活時(shí)間的因素統(tǒng)計(jì)表Table 4 Estimates of factors for survival time of grouper

通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)以水中總氨氮濃度單因素方差分析可知(見(jiàn)表5),?；顪囟?、?；蠲芏扰c降溫模式對(duì)?；钏w總氨氮濃度均具有顯著性影響(p<0.05)。對(duì)?；钏w總氨氮濃度的影響A(保活溫度)>B(?；蠲芏?>C(降溫模式)。根據(jù)均值(見(jiàn)表6)確定最佳水平為:A1B1C2,即:?；顪囟?5 ℃,?；蠲芏?00 g/L,降溫模式為梯度降溫。

表5 方差分析表(因變量:總氨氮濃度)Table 5 ANOVA table(dependent variable:Total ammonia nitrogen concentration of water)

表6 總氨氮含量的因素統(tǒng)計(jì)表Table 6 Estimates of factors for total ammonia nitrogen content of water

綜合存活時(shí)間和總氨氮濃度的單因素方差分析結(jié)果,以及各因素間的顯著性關(guān)系,選擇條件為A(?；顪囟?15 ℃,B(?；蠲芏?100 g/L,C(降溫模式)梯度降溫進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.7 最佳條件的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證,珍珠龍膽石斑魚(yú)經(jīng)過(guò)梯度降溫降至休眠狀態(tài),轉(zhuǎn)移到15 ℃,?；蠲芏葹?00 g/L條件下進(jìn)行?；钤囼?yàn),保活過(guò)程中采用充空氣(100 L/min)、過(guò)濾循環(huán)水(1100 L/h)。記錄存活時(shí)間,結(jié)果表明:該條件下石斑魚(yú)存活時(shí)間可達(dá)(168±8) h,?；?2 h后水中總氨氮含量為(7.28±0.06) mg/L。

2.8 珍珠龍膽石斑魚(yú)低溫有水?；钸^(guò)程中水質(zhì)指標(biāo)的變化

由圖6可以看出,在低溫有水?；钸^(guò)程中,水體的pH在前24 h內(nèi)略有降低,在?；?8 h時(shí),pH達(dá)到最低點(diǎn),隨后pH持續(xù)升高最終趨于穩(wěn)定,但在0～96 h內(nèi)水體pH無(wú)顯著性變化(p<0.05),這與梁養(yǎng)賢[22]模擬草魚(yú)長(zhǎng)途運(yùn)輸?shù)难芯拷Y(jié)果相似。國(guó)家漁業(yè)水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定,海水魚(yú)的水質(zhì)pH應(yīng)控制在 7.0～8.5[23],因此該?；顥l件下水質(zhì)pH的變化對(duì)石斑魚(yú)存活時(shí)間影響不大。水體的電導(dǎo)率隨?；顣r(shí)間的延長(zhǎng)呈增加趨勢(shì),在0～96 h內(nèi)增長(zhǎng)緩慢,且無(wú)顯著性差異,表明珍珠龍膽石斑魚(yú)在?；钸^(guò)程中由于代謝產(chǎn)物的積累造成水中鹽類物質(zhì)含量增加,從而電導(dǎo)率升高。

圖6 水體pH、電導(dǎo)率、總氨氮濃度和非離子氨氮濃度隨珍珠龍膽石斑魚(yú)?；顣r(shí)間的變化Fig.6 The changes of water pH,conductivity,total ammonia nitrogen concentration and non-ionic ammonia nitrog en concentration with the survival time of the pearl gentian grouper

水體總氨氮隨保活時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著上升,在0～48 h內(nèi)水體總氨氮濃度增加緩慢,由于總氨氮濃度的積累,在?；?8～96 h范圍內(nèi)水體總氨氮濃度上升迅速,在72、96 h分別達(dá)到7.28、10.31 mg/L。水體總氨氮濃度是影響石斑魚(yú)存活時(shí)間的主要因素之一,水體總氨氮濃度的增加,導(dǎo)致魚(yú)體的存活時(shí)間減短[24]。溫度為15 ℃、?；蠲芏葹?00 g/L條件下氨氮濃度增長(zhǎng)緩慢,由此可見(jiàn)低溫可以降低魚(yú)體的代謝活動(dòng),從而降低水中氨氮濃度,有利于延長(zhǎng)存活時(shí)間。非離子氨氮濃度在0～48 h無(wú)顯著變化,48 h后顯著上升(p<0.05)。氨氮具有神經(jīng)毒性,會(huì)引起魚(yú)類在運(yùn)輸過(guò)程中驚厥、昏迷甚至死亡[25]。本研究中,珍珠龍膽石斑魚(yú)?；?6 h后水體非離子氨氮濃度為0.19 mg/L,遠(yuǎn)超出《海水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)》(GB 3097-1997)中的0.02 mg/L,表明珍珠龍膽石斑魚(yú)在保活過(guò)程中能夠耐受短時(shí)高濃度的非離子氨氮。

2.9 珍珠龍膽石斑魚(yú)低溫有水?；钸^(guò)程中血清生化指標(biāo)的變化

魚(yú)類的血清學(xué)指標(biāo)是測(cè)定其健康狀況、營(yíng)養(yǎng)水平、疾病預(yù)防等方面的重要參考依據(jù)[26]。珍珠龍膽石斑魚(yú)經(jīng)過(guò)低溫有水?；畈煌瑫r(shí)間后血清生化指標(biāo)的變化見(jiàn)表7,血清中的總蛋白(TP)主要包括白蛋白(Alb)和球蛋白(Glb),白蛋白主要由肝臟合成,有維持血漿滲透壓、參與機(jī)體免疫、運(yùn)輸、營(yíng)養(yǎng)等功能,球蛋白由淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成的漿細(xì)胞分泌形成的,在機(jī)體的特異性免疫中發(fā)揮重要作用,血清總蛋白和白蛋白檢測(cè)大都可以反映慢性肝損害及肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的儲(chǔ)備功能。由表7可以看出石斑魚(yú)在?；钸^(guò)程中血清生化指標(biāo)中的白蛋白在72 h內(nèi)變化無(wú)顯著性差異(p>0.05);TP在0～72 h內(nèi)呈現(xiàn)先下降后上升的波動(dòng)狀態(tài),在?；?4 h后有顯著降低,48～72 h逐漸上升,72 h時(shí)顯著高于0 h(p<0.05),與白艷龍[9]對(duì)黃顙魚(yú)無(wú)水保活技術(shù)研究的結(jié)果一致,說(shuō)明珍珠龍膽石斑魚(yú)在低溫?；钸^(guò)程中機(jī)體免疫水平受到應(yīng)激作用先下降后逐漸恢復(fù),并在72 h后達(dá)到新的水平。通過(guò)機(jī)體特異性免疫免疫作用抵抗機(jī)體在?；钸^(guò)程中的低溫、饑餓及水質(zhì)惡化等多因素的應(yīng)激作用。

表7 珍珠龍膽石斑魚(yú)保活不同時(shí)間后血清生化指標(biāo)的變化Table 7 Changes in serum biochemical indicators after different keeping alive time of grouper

皮質(zhì)醇是應(yīng)激反應(yīng)系統(tǒng)中,最后分泌的一種激素,皮質(zhì)醇的分泌能釋放氨基酸、葡萄糖以及脂肪酸,這些被輸送帶血液里充當(dāng)能量使用,同時(shí)皮質(zhì)醇能促進(jìn)糖的合成和脂肪的降解,這些過(guò)程產(chǎn)生的能量可以供給機(jī)體抵抗饑餓和水質(zhì)惡化的脅迫,增加機(jī)體獲得生存的機(jī)會(huì)[24],皮質(zhì)醇、血糖常被作為應(yīng)激反應(yīng)的敏感指標(biāo),可以反映魚(yú)類應(yīng)激反應(yīng)的強(qiáng)弱。Zhao[27]等在大口鱸魚(yú)的運(yùn)輸研究中表明低溫能顯著降低水體的總氨氮含量與血清皮質(zhì)醇含量,降低魚(yú)體的應(yīng)激反應(yīng)。珍珠龍膽石斑魚(yú)在低溫有水?；?8 h內(nèi)血清皮質(zhì)醇濃度顯著下降,而72 h后恢復(fù)至保活前水平,表明在該條件下能有效降低魚(yú)體的應(yīng)激反應(yīng)。應(yīng)激反應(yīng)是一種耗能過(guò)程,會(huì)導(dǎo)致血糖水平的變化,因此血糖水平常被作為可靠的生理應(yīng)激指標(biāo)之一。一些研究表明冷應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致魚(yú)體血糖水平急劇升高。血糖(Glu)作為主要的能源物質(zhì),由表7可以看出珍珠龍膽石斑魚(yú)在?；钸^(guò)程中血糖濃度上升,在48 h顯著高于保活前水平(p<0.05),這與尤宏?duì)嶽28]的研究結(jié)果相似,原因是由于饑餓脅迫或環(huán)境應(yīng)激導(dǎo)致魚(yú)體代謝活動(dòng)增強(qiáng),所需能量增多,肝糖原分解加速使血糖含量增加[23]。

甘油三酯(TG)的主要功能是供能與儲(chǔ)存能源,還可以固定和保護(hù)內(nèi)臟,其合成的原料之一是脂肪組織。由表7可以看出石斑魚(yú)在?；?2 h內(nèi),血清中甘油三酯的含量無(wú)顯著性差異(p>0.05),72 h后其含量略高于初始值,表明脂肪在緩慢代謝。

血清尿素氮(BUN)是機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的最終產(chǎn)物,主要經(jīng)腎臟從尿液中排泄,腎臟受到損失,血尿素的含量會(huì)增加,因而尿素可以作為腎臟功能的評(píng)價(jià)指標(biāo)之一[9]。該條件下石斑魚(yú)在?；?2 h內(nèi)BUN與初始值相比無(wú)顯著性差異(p>0.05),說(shuō)明在該條件下的保活過(guò)程中魚(yú)體的腎臟并未受到損傷。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)是參與機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的酶,當(dāng)機(jī)體各組織器官或病變時(shí),就會(huì)把其中的ALT釋放到血液中,使血清ALT含量增加[29]。AST是肝臟中連接糖、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)代謝的重要酶,正常情況下血清 AST 活性很低而且相對(duì)穩(wěn)定,是肝臟病變程度的重要指標(biāo),正常情況下這些血清酶活性較低且相對(duì)恒定,當(dāng)肝臟受到損傷時(shí)血清 AST 活性會(huì)升高[30]。由表7可以看出,石斑魚(yú)在保活24 h后ALT含量顯著高于初始值,48 h時(shí)達(dá)到最大值,48 h和72 h時(shí)都顯著高于初始值(p<0.05),且兩者之間無(wú)顯著性差異,AST含量在石斑魚(yú)?；?4 h時(shí)有所降低,隨后逐漸升高,48 h時(shí)達(dá)到最大值,72 h時(shí)略有降低,它們之間均無(wú)顯著性差異(p>0.05)。這表明在保活過(guò)程中低溫和饑餓的脅迫作用使魚(yú)體的肝臟有所損傷。

乳酸脫氫酶(LDH)是糖代謝中催化丙酮酸向乳酸轉(zhuǎn)化的酶,是心肌梗代謝情況的主要指標(biāo)酶之一。心肌梗死、肌肉損傷都會(huì)導(dǎo)致 LDH 的升高[23]。由表7可以看出石斑魚(yú)在保活24 h時(shí)LDH含量顯著降低,隨后增長(zhǎng)至穩(wěn)定水平,且與初始值無(wú)顯著性差異(p>0.05),這說(shuō)明該條件下石斑魚(yú)進(jìn)行有氧呼吸且肌肉未損傷,心肌功能正常。

3 結(jié)論

珍珠龍膽石斑魚(yú)暫養(yǎng)48 h后,采用平均1～2 ℃/h的梯度降溫模式降到休眠狀態(tài),在水溫15 ℃、?；蠲芏?00 g/L、鹽度25%的條件下?；?存活時(shí)間可達(dá)(168±8) h;隨著?；顣r(shí)間的延長(zhǎng),水質(zhì)總氨氮濃度逐漸增加,保活72 h后水體總氨氮濃度為(7.28±0.06) mg/L,pH無(wú)顯著變化,電導(dǎo)率隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加但無(wú)顯著變化。血糖在?；钸^(guò)程中顯著上升,而血清皮質(zhì)醇濃度在72 h恢復(fù)到正常水平,白蛋白與甘油三酯無(wú)顯著變化,總蛋白與尿素氮在72 h后恢復(fù)正常水平。AST和LDH無(wú)顯著變化,ALT顯著上升,表明魚(yú)體在低溫保活過(guò)程中由于環(huán)境脅迫導(dǎo)致血清生化指標(biāo)發(fā)生變化,但在72 h內(nèi)機(jī)體能通過(guò)代謝酶的調(diào)節(jié)達(dá)到新的平衡狀態(tài)。對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)在保活運(yùn)輸過(guò)程中的應(yīng)激與代謝變化還有待進(jìn)一步深入研究。