不同制備方法對當(dāng)歸提取物的質(zhì)量影響

嚴(yán)小萍 吳慧峰

（1江蘇省如皋市人民醫(yī)院中藥房 江蘇 如皋 226500）

（2江蘇省南通三越中藥飲片有限公司 江蘇 南通 226300）

中藥藥材中的有效成分含量與藥材的質(zhì)量、安全性、有效性緊密相關(guān)，因此，對其中的成分進(jìn)行一定的分析可以有效改善制備方法，提高藥材質(zhì)量。中藥材的成分比較復(fù)雜，僅根據(jù)單種成分并無法有效地對質(zhì)量進(jìn)行評估，對多種成分進(jìn)行測定、分析已成為保證中藥質(zhì)量的關(guān)鍵[1]。

當(dāng)歸是中醫(yī)上的一種藥材，它屬于傘形科植物。當(dāng)前有很多對當(dāng)歸質(zhì)量進(jìn)行控制的方法，主要有指紋圖譜、薄層色譜鑒別等，阿魏酸在多種中藥材中存在，僅將其作為測定指標(biāo)并不能全面的對當(dāng)歸質(zhì)量以及當(dāng)歸提取物的質(zhì)量進(jìn)行判斷[2]。當(dāng)歸中還有啟用它有效的成分為藁本內(nèi)酯、丁烯基苯酞，但是該成分穩(wěn)定較差，對其進(jìn)行質(zhì)量控制難度較大。因此，尋找有效地制備方式對于保證當(dāng)歸提取物質(zhì)量有著積極的意義。在不同制備方法對當(dāng)歸提取物的質(zhì)量影響研究過程中，應(yīng)用乙醇滲濾法進(jìn)行制備，藁本內(nèi)酯、阿魏酸提取率較高，現(xiàn)報道如下。

1.資料與方法

1.1 儀器與試藥

儀器為美國Agilent公司提供的1100系列HPLC系統(tǒng)。藁本內(nèi)酯、阿魏酸對照品來自上海中藥創(chuàng)新研究中心，純度超過98%，所用的水為純凈水，色譜純?yōu)橐译妫渌脑噭榉治黾?；?dāng)歸詳細(xì)信息見表1，且經(jīng)過上海中藥研究所吳立宏博士對所有的當(dāng)歸進(jìn)行了鑒定，確定為均是傘形科植物A.sinensis的根[3]。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 選用WatersNova一PakC18(150mmX3.4mm)的色譜柱；流動相選用乙腈（B）和酸水(A,磷酸調(diào)pH4)；進(jìn)行梯度洗脫的條件為：5%～78%的乙腈，0～20min,78%～78%乙腈，20～25min；檢測的波長為350nm；流速為1.0mL/min-1；柱溫為25℃。通過以上色譜條件，可以使藁本內(nèi)酯、阿魏酸與相鄰組分的基線徹底分離，色譜分離程度超過1.5[4]。

1.2.2 制備溶液 對當(dāng)歸提取物進(jìn)行精密吸取，量為5mL，后將95∶5（70%乙醇-甲酸）的溶劑加入其中定容到100mL，分析之前將其應(yīng)用0.45μm微孔濾膜進(jìn)行過濾，濾液就是所需要的供試品溶液[5]。對適量的藁本內(nèi)酯對照品進(jìn)行精密稱取，應(yīng)用乙腈將其定容到25mL且存放在棕色量瓶內(nèi)，后將其制成藁本內(nèi)酯對照品貯備溶液，濃度為6.84mg/mL-1。對適量的阿魏酸對照品進(jìn)行精密稱取，應(yīng)用乙腈將其定容到25mL且存放在棕色量瓶內(nèi)，后將其制成阿魏酸對照品貯備溶液，濃度為0.281mg/mL-1。將5mL藁本內(nèi)酯貯備溶液、10mL阿魏酸貯備溶液進(jìn)行精密吸取，應(yīng)用乙腈將其定容到25mL且存放在棕色量瓶內(nèi)，后將其制成含有1.368mg/mL-1的藁本內(nèi)酯、含阿魏酸0.112mg/mL-1的混合溶液[6]。

1.2.3 當(dāng)歸提取物制備方式 將藁本內(nèi)酯提取率、阿魏酸提取率作為評價指標(biāo)，對乙醇滲濾法、乙醇浸漬法、水提法、乙醇熱回流法、堿水提法的優(yōu)劣進(jìn)行評估。（1）乙醇滲濾法：將1倍量的70%乙醇與25g當(dāng)歸粗粉混合后將其悶潤2h,后將其放置到小滲濾桶內(nèi)應(yīng)用1mL/min-1的速度進(jìn)行滲濾，采取20倍量的滲濾液，將乙醇減壓回收，應(yīng)用70%的乙醇將其定容到100mL,即為乙醇滲濾法所得到的溶液[7]。（2）乙醇浸漬法：將70%的乙醇與12.5g當(dāng)歸粗粉混合放置室溫下進(jìn)行浸漬4d，后將混合液進(jìn)行提取、過濾，且將乙醇減壓回收,應(yīng)用70%的乙醇將其定容到100mL,即為乙醇浸漬法所得到的溶液。（3）水提法：在12.5g當(dāng)歸粗粉中加入水進(jìn)行提取(10BV×2)，首次提取2h、2次提取1h,將混合液進(jìn)行提取、過濾、濃縮，應(yīng)用水將其定容到100mL,即為水提法所得到的溶液。（4）乙醇熱回流法：將70%乙醇提取(10BV×2h×2)液與12.5g的當(dāng)歸進(jìn)行混合，將溶液進(jìn)行提取、過濾，且將乙醇進(jìn)行回收,應(yīng)用70%的乙醇將其定容到100mL,即為乙醇熱回流法所得到的溶液。（5）堿水提法：將0.1%碳酸鈉提取液(10BV×2)與12.5g當(dāng)歸粗粉混合,首次提取2h、2次提取1h，將混合液進(jìn)行提取，后將其的pH值用鹽酸中和到中性，應(yīng)用水將其定容到100mL,即為堿水提法所得到的溶液。

1.3 觀察指標(biāo)

比較5種方法的藁本內(nèi)酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進(jìn)行分析，其中計數(shù)進(jìn)行χ2（%）檢驗，計量進(jìn)行t檢測（±s）檢驗，P＜0.05提示有顯著差異。

2.結(jié)果

2.1 當(dāng)歸詳細(xì)信息見表1。

表1 當(dāng)歸詳細(xì)情況

2.2 5種方法的藁本內(nèi)酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分對比

乙醇滲濾法、乙醇浸漬法、乙醇熱回流法的藁本內(nèi)酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分均高于水提法、堿水提法（P＜0.05）。而藁本內(nèi)酯的提取率中乙醇滲濾法＞乙醇浸漬法＞乙醇熱回流法（P＜0.05），而阿魏酸提取率中各方法無明顯差別（P＞0.05），這就說明，乙醇滲濾法是制備當(dāng)歸提取物的最佳方法，且質(zhì)量最佳。

表2 5種方法的藁本內(nèi)酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分對比

3.討論

當(dāng)歸是傘形科植物A.sinensis的根，它的作用是潤腸通便、止痛、活血、調(diào)經(jīng)、補(bǔ)血，在治療風(fēng)濕痹痛、虛寒腹痛、經(jīng)閉痛經(jīng)、眩暈心悸、腸燥便秘、月經(jīng)不調(diào)、血虛萎黃方面也發(fā)揮著非常重要的作用。

當(dāng)歸提取物是我國植物提取物大量出口的商品，但是在出口前需要對提取物內(nèi)的藁本內(nèi)酯、阿魏酸含量進(jìn)行測定，該方法比本次研究過程中所用的方法更為復(fù)雜。藁本內(nèi)酯屬于苯酞類，該物質(zhì)不易溶于水，但會非常容易溶于有機(jī)溶劑，且純度較高的藁本內(nèi)酯穩(wěn)定性較差，在熱、光等的作用下容易結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，生成苯酞類其他成分。阿魏酸屬于有機(jī)酸類，它非常容易溶于堿水、熱水中，性質(zhì)非常不穩(wěn)定，加熱時間較久會使其發(fā)生降解[8]。制備供試品溶液的過程中，常應(yīng)用弱酸性溶劑，這樣的目的是為了阻止阿魏酸降解，以保證最終結(jié)果的穩(wěn)定。通過以上研究可以發(fā)現(xiàn)，浸漬時間對提取的藥物成分并沒有太大的影響，但是在《中國藥典》曾有明文規(guī)定，當(dāng)歸的滲濾時間不宜超過48h,因此，在制備當(dāng)歸提取物的過程中，要適當(dāng)?shù)臏p少滲濾時間，確保藥物成分的安全性、質(zhì)量。

研究顯示，乙醇滲濾法、乙醇浸漬法、乙醇熱回流法的藁本內(nèi)酯提取率、阿魏酸提取率以及綜合評分均高于水提法、堿水提法（P＜0.05）。而藁本內(nèi)酯的提取率中乙醇滲濾法＞乙醇浸漬法＞乙醇熱回流法（P＜0.05），而阿魏酸提取率中各方法無明顯差別（P＞0.05），這就說明，乙醇滲濾法是制備當(dāng)歸提取物的最佳方法，且質(zhì)量最佳。因此，在進(jìn)行當(dāng)歸提取物制備過程中，要選擇合適的制備方式，這樣才能有效保證最終的制備質(zhì)量。

當(dāng)歸中的有效成分揮發(fā)性較強(qiáng)，主要是丁烯基苯酞、藁本內(nèi)酯等苯酞類化合物，而在進(jìn)行指標(biāo)測定時，以上成分具有揮發(fā)性強(qiáng)、穩(wěn)定性差的特點，這就會導(dǎo)致：（1）提取物的藥物濃度無法維持恒定。（2）阿魏酸在溶液中的穩(wěn)定性極差，且在中性溶劑下見光時分解速度會更快。（3）由于阿魏酸在水中的溶解度較小，穩(wěn)定性較差，在高溫環(huán)境下會對其造成嚴(yán)重的破壞。因此在選擇指標(biāo)成分時要注意以下幾點：①制備當(dāng)歸提取物的過程中，要將這些成分棄去。②維持當(dāng)歸提取物溶液的適當(dāng)濃度，確保阿魏酸不被破壞。

中藥藥材成分制備、提取的過程中，有很多制備工藝出現(xiàn)，但是當(dāng)前大部分中藥藥材制備方式沿用常規(guī)的提取方式。雖然涌現(xiàn)出了很多新的現(xiàn)代化的制備方式，且超臨界二氧化碳制備提取技術(shù)展現(xiàn)出了很大的優(yōu)越性，但還需要進(jìn)一步對其安全性與實用性進(jìn)行研究。

綜上所述，不同制備方法對當(dāng)歸提取物的質(zhì)量影響研究過程中，發(fā)現(xiàn)乙醇滲濾法的提取率較高，綜合評分較高，進(jìn)而可以保證當(dāng)歸提取物的質(zhì)量，且可以將其作為制備當(dāng)歸提取物的最佳手段。