黃薇幼胚的離體培養(yǎng)研究

鄭苗苗，張錦菲，鄭紹宇*

（浙江農(nóng)林大學(xué)園林與建筑學(xué)院，浙江杭州 311300）

黃薇（Heimia myrtifolia），為千屈菜科（Lythraceae），黃薇屬（Heimia）植物，原產(chǎn)巴西。我國上海、桂林等地有引種。花黃色，美麗，具有較高的觀賞價值[1]，在園林造景中有應(yīng)用。因此，研究黃薇胚離體培養(yǎng)技術(shù)對其無性繁殖和園林造景普及均具有重要意義。不同植物的胚胎發(fā)育狀況會因基因型的不同而出現(xiàn)明顯差異，不同發(fā)育階段情況不同，如發(fā)育正常形成完整的核[2]，如出現(xiàn)敗育則形成畸形核或者小核，胚胎的發(fā)育能力與植物生殖能力密切相關(guān)。此外，不同培養(yǎng)基中不同激素濃度的配比也會影響胚胎的發(fā)育[3-8]。

本研究采用離體培養(yǎng)技術(shù)，探討不同生長調(diào)節(jié)劑等因素對黃薇胚的不同發(fā)育期離體培養(yǎng)的影響，旨在為人工調(diào)控黃薇胚胎發(fā)育提供依據(jù)，為解決黃薇為親本材料進(jìn)行育種研究探討新途徑，在理論和實踐上均有重要意義。

1 材料與方法

試驗材料均來自2017年6月溫室內(nèi)扦插苗，選取發(fā)育正常，無病蟲害的黃薇成苗，2017年9月所得成苗后種子作為試驗材料。

收取成苗后發(fā)育成熟但未掉落，頂部微黃的朔果，因果實有后熟作用，所以先經(jīng)4℃恒溫條件下儲存5～15d后，再用70%乙醇對朔果進(jìn)行反復(fù)消毒3次，無菌水沖洗干凈，再用70%乙醇浸泡30s。以無菌水沖洗3次，再用無菌紗布充分吸干多余水分，鑷子剝除種子，選取內(nèi)含胚的種子接種到1%瓊脂固體培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

配置培養(yǎng)基，MS1培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基中加入0.1mg/L NAA+0.3mg/L 6BA+蔗糖 30g/L，MS2培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基中加入0.3mg/L NAA+0.1mg/L 6BA+蔗糖30g/L，以不加任何激素MS0培養(yǎng)基作為對照；在溫度為（25±1）℃，光照條件為2000Lx，光照時間為12h條件下培養(yǎng)，根據(jù)種胚大小分別接種到不同培養(yǎng)基上，每組接種20個。

2 結(jié)果與分析

2.1 胚乳對種胚萌發(fā)和發(fā)芽率的影響

表1結(jié)果顯示，在MS0的培養(yǎng)基礎(chǔ)上，剝除胚乳和未剝除胚乳對照種胚萌發(fā)率，從表中可見，剝除胚乳后的種胚萌發(fā)率明顯高于未剝除胚乳處理的種胚，但種胚的萌發(fā)率同時受到種胚含水量，溫度的影響（結(jié)果未列進(jìn)表內(nèi)），因此剝除種胚對于提高種胚萌發(fā)率具有重要作用。

表1 胚乳處理對種胚萌發(fā)的影響

2.2 激素對種胚離體培養(yǎng)的影響

3 種培養(yǎng)基（MS0、MS1、MS2），測定在不同激素配比條件下種胚生長情況，表2結(jié)果表明：種胚在離體條件下對外源激素要求不高，在MS0培養(yǎng)基上能夠形成完整的植株，且形成完整的植株數(shù)量最多，當(dāng)添加外源激素NAA和6BA的條件下，NAA含量較高，6BA含量較低時完整植株數(shù)量較多，相反，則形成完整植株數(shù)量較少，這也符合激素調(diào)控原理。從結(jié)果來看，NAA含量和6BA含量均會對種胚發(fā)育造成影響，而NAA含量較高時造成胚死亡的數(shù)量明顯上升。

表2 激素濃度對種胚發(fā)育的影響

3 討論

通過無性繁殖能夠有效地擴(kuò)繁植株，受精種胚發(fā)育不全是阻礙有性繁殖的重要因素，實驗從種胚的離體培養(yǎng)角度，胚乳的剝除能有效地提高雜種胚的萌發(fā)率，同時在對側(cè)金盞花種胚和野生杜梨種胚的培養(yǎng)研究中均證明溫度會影響種胚的發(fā)育[9,10]，此外種胚自身含水量對種胚的萌發(fā)和正常發(fā)育也會造成影響，可能胚乳的剝除一定程度上解決了種胚本身的機(jī)械障礙，在離體培養(yǎng)條件上，可見，6BA和NAA的含量均會對種胚形成完整植株造成影響，但外源激素含量和配比的不同對種胚造成的影響明顯，由此可見，種胚成熟后，盡早采取種子剝除胚乳利于種胚發(fā)育成苗，這種離體培養(yǎng)法對黃薇育種具有一定的應(yīng)用價值。