香訶止瀉顆粒劑提取分離和成型工藝研究

柯瑾 梁玲 朱培芳 周田婷 喬宏亮 熊磊

摘要：目的 建立香訶止瀉顆粒劑提取分離和成型工藝條件。方法 采用L9（3）4正交設(shè)計法水提分離工藝進行考察，并通過單因素考察建立顆粒劑成型工藝。結(jié)果 香訶止瀉顆粒劑提取分離工藝優(yōu)選為：12倍水，浸泡2.5 h，煎煮3次，每次1.0 h，合并煎液，藥液濃縮至相對密度0.8，10 000 r/min高速離心30 min，得上清液。成型工藝優(yōu)選為：上清液濃縮至相對密度1.0，按藥輔比1：1.5加入輔料混勻后，泵速1.0mL/min，進風(fēng)口溫度130℃，出風(fēng)口溫度90℃，噴霧制備細粉，用95%乙醇為潤濕劑制備軟材后，擠出制粒。結(jié)論 優(yōu)化的提取、分離和成型工藝合理、可行、穩(wěn)定可控，可為申報醫(yī)療機構(gòu)制劑奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：香訶止瀉顆粒劑;葛根素;離心分離;噴霧干燥

中圖分類號：R284.2 文獻標志碼：A 文章編號：1007-2349（2018）07-0065-04

Study on Extraction，Isolation and Formation of Xianghe-Made Anti-Diarrhea Granules

KE Jin LIANG Ling ZHU Pei-fang YIN Na ZHOU Tian-ting QIAO Hong-liang XIONG Lei

（1. Yunnan Unversity of Traditional Chinese Medicine，Kunming 650500;

2. Puer Songmao Diancao Liuwei Pharmaceutical co. LTD，Puer 665000;

3. Julin Zixin Banruo Pharmaceutical Group Limited，Qingshi132300）

【Abstract】Objective：To establish the conditions of extraction，isolation and formation of Xianghe-made anti-diarrhea granules. Methods：The L9（3）4 orthogonal design method was used to investigate the extraction and isolation processes. And the granule formation process was established through one factor investigation method. Results：The extraction and isolation processes of Xianghe-made anti-diarrhea granules were indicated as follows：resolve Xianghe in 12 times of water; soak it for 2.5 hours，boil it for an hour，repeat for 3 times and combine the liquid，concentrate the decoction to relative density as 0.8，centrifuge it at 10 000 r/min for 30 minutes to obtain the supernatant. The formation process was preferred as follows：concentrate the supernatant to a relative density of 1.0，adjust the ratio of drug component to auxiliary component as 1 to 1.5 with 1.0mL/min of pump speed，set the air inlet temperature as 130℃，and the outlet temperature as 90℃ to spray and make fine powder，wet the soft material with 95% ethanol and form granules. Conclusion：The optimized extraction，isolation and formation processes are reasonable，feasible，stable and controllable，and can lay the foundation for the application of officially medical agents.

【Key words】Xianghe-made anti-diarrhea granules，puerarin，isolation by centrifugation，spray for drying

香訶止瀉顆粒劑源于云南省名中醫(yī)熊磊治療小兒泄瀉的臨床效驗方，臨床療效確切。本方具芳香化濕、運脾止瀉之功，主治小兒脾氣不運、濕濁內(nèi)阻之泄瀉[1]。由云南主產(chǎn)藥材藿香、葛根、訶子、石榴皮等9味中藥組成。中醫(yī)認為，泄瀉病變主要在脾胃，尤其與脾的運化功能失調(diào)關(guān)系密切[2]。脾主升清，胃主降濁，若脾胃失常，清氣不升，濁氣不降，清濁相并，下走大腸則至泄瀉。前人亦有“無濕不成瀉”、“濕多成五瀉”之說，故治療上總以運脾化濕為基本原則[3]。

香訶止瀉湯中藿香味辛、性微溫、入脾胃經(jīng)，具有芳香化濁，化濕止嘔之功[4];訶子性平、味酸澀，酸能收斂，澀能止瀉[5]，與藿香共為君藥，兩藥相配，共湊健脾化濕、溫胃化濁、澀腸止瀉之功，且有標本兼治之妙。葛根味辛甘、性涼，入脾胃經(jīng)，具有生津止渴，升陽止瀉之功[6]，茯苓健脾利水滲濕[7]，車前子滲濕止瀉，能“利小便實大便”[8]，三藥共為臣藥。其余藥物能行氣、化濕、消痞，分別針對嘔吐、痞脹、疼痛等泄瀉伴隨癥狀起輔助治療作用。諸藥合用，共湊健脾除濕、運脾化濁、行氣止痛、溫中固澀之效，使?jié)袢テ⑦\則腹瀉自愈。 劑型選擇為療效確切、服用方便、便于攜帶、成本低、口感好、兒童順應(yīng)性好的顆粒劑，既保持了傳統(tǒng)的中醫(yī)藥用藥特色，又能最大限度地提取并保留處方中藥物的有效成分，發(fā)揮處方的綜合治療作用。同時顆粒劑還具備性質(zhì)穩(wěn)定、質(zhì)量可控、便于規(guī)模化生產(chǎn)等優(yōu)點，是醫(yī)療機構(gòu)制劑常用劑型[9]。本研究應(yīng)用新型干燥方法-噴霧干燥，該方法成型快速，輔料用量小，制得顆粒劑流動性和溶化性良好[10]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器 所用中藥材均選用《中國藥典》（2015版一部）收載的正品。廣藿香（批號：150201）;訶子（批號：151101）;葛根（批號：150101）;石榴皮（批號：150301）;茯苓（批號：150101）;車前子（批號：151001）;白術(shù)（批號：151201）;山楂（批號：150326）;仙鶴草（批號：151201）均購自云南泰華豐功藥業(yè)有限公司。葛根素對照品（批號：151102，成都普菲德生物技術(shù)有限公司）。甲醇（色譜純，默克股份兩合公司）;磷酸、乙醇（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）;純凈水（娃哈哈公司）。

Agilent1200高效液相色譜儀（美國Agilent公司）;C18色譜柱（ZOR BAX SAX-C18 4.6×250 mm，5 μm）;高速離心機（上海手術(shù)器械廠）;十萬分之一分析天平（上海菁海儀器有限公司）;電子秤（余姚市金諾天平儀器有限公司）;超聲波清洗機（YL-040S型，上海冠特超聲儀器有限公司）;電子調(diào)溫電熱套（PHTW型，鞏義市器華儀器有限責(zé)任公司）。

1.2 實驗方法

1.2.1 葛根素含量測定方法考察

1.2.1.1 色譜條件 C18色譜柱（ZOR BAX SAX-C18，4.6×250 mm，5 μm）;流動相：甲醇-水（25：75）;檢測波長：250 nm;柱溫：25℃;流速：1.0 mL/min。理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于4 000。

1.2.1.2 對照品溶液的制備 取葛根素對照品適量，30%乙醇溶解，超聲30 min，制成每1 mL含51 μg的溶液，0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.2.1.3 供試品溶液制備 按處方比例稱取1倍量的藿香、訶子、葛根等藥材，按一定條件進行煎煮，所得藥液過濾、濃縮、定容至250 mL，精密吸取1.5 mL，置蒸發(fā)皿中水浴蒸干，放冷。用30%乙醇溶液溶解并轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，超聲30 min，放冷，補足減失重量，用0.45 μm微孔濾膜過濾，續(xù)濾液即為供試品溶液。

1.2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液1、2、4、8、12、20 μL進樣，按照“1.2.1.1”項下的色譜條件測定峰面積，以葛根素峰面積（Y）對其含量（X）進行線性回歸，

1.2.1.5 精密度考察 精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進樣6次，記錄葛根素峰面積。

1.2.1.6 穩(wěn)定性考察 精密吸取對照品和供試品溶液各10 μL，分別于0、2、4、8、12 h進樣測定，記錄葛根素峰面積。

1.2.1.7 重現(xiàn)性考察 按“1.2.1.3”項下方法制備供試品溶液，平行6份，記錄峰面積，測定含量。

1.2.1.8 加樣回收率考察 精密量取9份供試品溶液，每份4 mL（濃度為54.40 μg/mL），置10 mL棕色容量瓶中，分別加入葛根素對照品溶液適量，按供試品溶液制備方法處理，測定，記錄峰面積，計算含量。

1.2.2 提取工藝研究

1.2.2.1 吸水率測定 按處方量稱取藥材110 g，共3份，每份加入8倍量水浸沒，室溫放置，分別于100，110，120，130，140，150，160 min用4號篩濾去水分，稱定藥材重量。計算吸水率=（藥材濕重-藥材干重）÷藥材干重×100%。

1.2.2.2 提取條件考察[11] 以收膏率和葛根素含量綜合指標，通過正交實驗設(shè)計，考察加水倍數(shù)（A）、煎煮時間（B）和煎煮次數(shù)（C）工藝條件，因素水平表見表1。綜合評分=收膏率÷0.2191×0.3+葛根素含量÷0.5141×0.7。

表1 提取正交因素水平表

1.2.3 分離工藝考察 以收膏率降低比率為評價指標，通過正交實驗設(shè)計，考察提取液相對密度（A）、離心轉(zhuǎn)速（B）和離心時間（C）工藝條件，因素水平表見表2。收膏率降低比率=（分離前收膏率-分離后收膏率）÷分離前收膏率×100%，分離前收膏率為照“1.2.2.2”條件制備后測定為21.4%。

表2 離心因素水平表

1.2.4 顆粒成型工藝考察[12]

1.2.4.1 制粒方法考察 以細粉得率和制粉情況為綜合評價指標，考察干浸膏粉濕法制粒、稠浸膏濕法制粒和噴霧干燥制粒。

1.2.4.2 藥液濃縮程度考察 將離心后的物料濃縮至相對密度分別為0.8、0.9、1.0、1.1、1.2，按藥輔比（干浸膏：輔料）1：2加入濃縮液中，混合后按噴霧速度0.5 mL/min，進口溫度120 ℃，出口溫度90 ℃進行噴霧制粒，考察濃縮程度對噴霧細粉得率和噴霧情況的影響。

1.2.4.3 泵速（進料速度）的考察 將離心后的物料濃縮至一定相對密度，照“1.2.4.2”，泵速分別為0.5、1.0、1.5、2 mL/min，考察噴霧速度對噴霧細粉得率和噴霧情況的影響。

1.2.4.4 噴霧溫度的考察 將離心后的物料濃縮至一定相對密度和泵速，照“1.2.4.2”，進口溫度分別按100、110、120、130、140、150 ℃，考察噴霧溫度對噴霧細粉得率和噴霧情況的影響。

1.2.4.5 輔料用量考察[13] 按上述優(yōu)化的噴霧條件，對藥輔比1：1、1：1.5、1：2進行考察，以確定最佳藥輔比。輔料為糊精-糖粉=1：2的混合物，前期對該比例進行考察，糊精比例高易導(dǎo)致顆粒劑溶液澄明度低，糖粉不僅可以作填充劑亦可作矯味劑，按該比例制備顆粒劑不僅成型性、溶化性良好，而且甜度適中，矯味效果理想。

1.2.4.6 潤濕劑的考察 由于本處方中成分粘性較強，故僅考慮潤濕劑種類的篩選。將噴霧干燥的細粉，分別用純凈水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇制軟材后擠出制粒，考察潤濕劑種類。

2 結(jié)果與討論

2.1 葛根素含量測定方法考察

2.1.1 線性考察 葛根素峰面積和含量的回歸方程：Y= 4167X-6.4036，r=1.0000，表明進樣量0.051-1.02 μg范圍內(nèi)，葛根素峰面積與進樣量有良好的線性關(guān)系，結(jié)果見圖1。

圖1 葛根素對照品線性關(guān)系

2.1.2 精密度考察 RSD為0.16%，實驗結(jié)果表明儀器的精密度較好。

2.1.3 穩(wěn)定性考察 對照品溶液RSD 0.38%，供試品溶液RSD 0.29%，說明對照品、供試品溶液12 h以內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.4 重復(fù)性考察 6份供試品溶液的平均含量為59.49 μg/mL，其RSD值為0.78%。說明該方法重現(xiàn)性良好。

2.1.5 加樣回收率考察 該測定方法準確可靠，結(jié)果見表3。

表3 加樣回收率實驗結(jié)果

2.2 提取工藝考察

2.2.1 吸收率考察 吸水率為117.8%，而且浸泡150 min后，藥材吸水率無明顯變化，故藥材浸泡時間為150 min，結(jié)果見圖2。

圖2 浸泡時間對藥材吸水率的影響

2.2.2 正交實驗結(jié)果 由表4可知影響提取效果因素順序為C>A>B，即：煎煮次數(shù)>加水倍數(shù)>煎煮時間。提取工藝的最佳條件為：A3B2C3組合，即用12倍量水煎煮3次，每次1.0 h。

表4 正交實驗結(jié)果

2.3 分離工藝考察 由表5可知影響分離工藝因素的順序為藥液相對密度>離心轉(zhuǎn)速>離心時間。精制工藝的最佳條件為：A1B3C3，即：藥液濃縮至相對密度為0.8，用10 000 r/min的高速離心機離心30 min。

表5 離心正交實驗結(jié)果

2.4 顆粒成型工藝考察

2.4.1 制粒方法考察 干浸膏粉按1：2藥輔比與輔料混勻后，加入適當無水乙醇，形成高粘度團塊，無法擠出制粒;該水提物濃縮至相對密度為1.2時，變?yōu)楣麅鰻畛砗癜肓黧w，加入輔料后，亦形成高粘度團塊，無法制粒。噴霧干燥制得細粉后用無水乙醇潤濕，軟材粘度適宜，可擠出制粒，故確定制粒方法為噴霧制粒。

2.4.2 藥液濃縮程度考察 濃縮程度低，制?？尚行粤己?，但是周期較長得率較低;濃縮程度高，制粒過程中易粘壁，得率較低。故將離心分離液濃縮至相對密度1.0，噴霧干燥效果較佳，結(jié)果見表6。

表6 藥液濃縮程度對制粒影響結(jié)果

2.4.3 泵速考察 泵速慢，不易粘壁，但是周期很長;泵速快則容易粘壁導(dǎo)致得率較低。泵速按1 mL/min，噴霧制粒的效果較佳、效率高，結(jié)果見表7。

表7 泵速對制粒影響結(jié)果

2.4.4 噴霧溫度考察 噴霧溫度高利于水分干燥，但是溫度過高會導(dǎo)致顆粒溶化后的澄明度不良，故干燥溫度較佳的為130 ℃，結(jié)果見表8。

表8 噴霧溫度對制粒影響結(jié)果

2.4.5 藥輔比例考察 噴霧制粒藥輔過低顆粒易吸潮導(dǎo)致流動性不好，同時兼顧節(jié)省成本，最終選用藥輔比為1：1.5制粒，結(jié)果見表9。

表9 噴霧溫度對制粒影響結(jié)果

2.4.6 潤濕劑種類考察 純凈水、25%乙醇、50%乙醇和75%乙醇制徳軟材粘度過大，無法擠出制粒，而95%乙醇所制軟材，軟硬適度，擠出制粒后，顆粒得率達到87.5%，故確定95%乙醇為潤濕劑。

3 結(jié)論

香訶止瀉顆粒劑提取分離工藝優(yōu)選為：12倍水，浸泡2.5 h，煎煮3次，每次1.0 h，合并煎液，藥液濃縮至相對密度0.8，10 000 r/min高速離心30 min。成型工藝優(yōu)選為：分離液濃縮至相對密度1.0，按藥輔比1：1.5加入輔料混勻后，泵速1.0 mL/min，進風(fēng)口溫度130 ℃，出風(fēng)口溫度90 ℃，噴霧制得細粉后，用95%乙醇為潤濕劑制軟材后擠出制備顆粒劑。該工藝穩(wěn)定可控合理，所得顆粒劑流動性溶化性良好，不易吸潮。

參考文獻：

[1]聶堅，謝宇環(huán)，陳柏君，等.芳香類中藥在兒科臨床運用及展望.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2015，38（2）：87-100.

[2]盧潤生，石巖，楊宇峰.論脾陽不足致小兒泄瀉[D].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2017，19（1）：129-131.

[3]葛濤濤，鄒勝男.楊季國教授治療小兒泄瀉四法經(jīng)驗[J].中醫(yī)兒科雜志，2016，12（4）：15-17.

[4]徐雯，吳艷清，丁浩然.廣藿香的藥理作用及機制研究進展[J].上海中醫(yī)藥雜志，2017，51（10）：103-106.

[5]王嘉倫，王培杰，易智威，等.訶子的化學(xué)成分、藥理作用及炮制配伍應(yīng)用研究進展[J].中醫(yī)藥信息，2016，33（3）：123-126.

[6]李昕，潘俊嫻，陳士國，等.葛根化學(xué)成分及藥理作用研究進展[J].中國食品學(xué)報，2017，17（9）：189-194.

[7]張鐘媛.茯苓藥理作用研究進展[J].繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2015，29（5）：108-109.

[8]鄭秀棉，楊莉，王錚濤.車前子的化學(xué)成分與藥理活性研究進展[J].中藥材，2013，36（7）：1190-1196.

[9]陳春玲，史雪敏.中藥顆粒劑的發(fā)展現(xiàn)狀與未來趨勢[J].臨床醫(yī)藥文獻雜志，2017，4（54）：10662-10663.

[10]程崔娜，李海兵，蔡向杰，等.中藥顆粒噴霧干燥制粒生產(chǎn)效率提高方法研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2014，10（14）：24-25.

[11]陳凌云，方波，陳兆蕊，等.健脾止瀉顆粒水提醇沉工藝研究[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2010，（1）：38-40.

[12]李玉邯，王維堅，侯麗麗.噴霧干燥法制備人參-丹參提取物超細粉[J].食品研究與開發(fā)，2016，37（19）：91-94.

[13]劉莉，楊麗紅.中藥顆粒劑輔料的現(xiàn)狀調(diào)查[J].黑龍江醫(yī)藥，2011，24（2）：246-247.

（收稿日期：2018-04-17）