HPLC測(cè)定通脈刺五加膠囊中金絲桃苷的含量

劉鑫，郭文婷

摘 要：建立反相高效液相色譜法測(cè)定通脈刺五加膠囊中金絲桃苷的含量。方法：采用奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm），乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，流速為1.0ml/min，柱溫為30℃。金絲桃苷在10～100μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。金絲桃苷平均回收率分別為99.6%。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于通脈刺五加膠囊中金絲桃苷的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：通脈刺五加膠囊；含量；測(cè)定

通脈刺五加膠囊為膠囊劑，內(nèi)容物為黃褐色至棕褐色的顆鐐粉末；味苦、微澀。通脈刺五加膠囊用于瘀血閉阻所致的胸痹心病，癥見胸痛，胸悶，心悸等。刺五加在中國(guó)醫(yī)藥學(xué)中做為藥物廣泛應(yīng)用已有悠久的歷史，具有“補(bǔ)中益精、堅(jiān)筋骨、強(qiáng)志意”的作用?！秳e錄》記載：“療男子陰痿，囊下濕，小便余瀝，女人陰癢及腰脊痛，兩腳疼痹風(fēng)弱，五緩虛羸，補(bǔ)中益精，堅(jiān)筋骨，強(qiáng)志意?！苯鸾z桃苷又名槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷，由槲皮素的3位O原子以β糖苷鍵與糖基相連。金絲桃苷具有抗炎、降壓、抗抑郁、增強(qiáng)免疫、降低膽固醇、蛋白同化、解痙、利尿、止咳、局部和中樞鎮(zhèn)疼等多種生理活性[1-6]。本文采用高效液相法對(duì)通脈刺五加膠囊中的金絲桃苷的進(jìn)行了含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器：電子天平FA1004型（南京華欣分析儀器制造有限公司）；YL9100液相色譜儀（汕頭市科毅儀器設(shè)備有限公司）；長(zhǎng)城獅鼎SHB-III型臺(tái)式循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；美國(guó)澤拉布Super超越系列全觸屏超純水系統(tǒng)（上海和泰儀器有限公司）；新芝scientz-T超聲波提取機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；天星進(jìn)樣瓶清洗機(jī)TX-500型（北京天星科儀科技有限公司）。

1.2 色譜柱：奧泰公司C18色譜柱（220mm×4.6mm，5μm）。

1.3 對(duì)照品：金絲桃苷

1.4 試劑：醋酸鈉（昆山諾普森實(shí)驗(yàn)室用品科技有限公司）、四氫呋喃（昆山諾普森實(shí)驗(yàn)室用品科技有限公司）、磷酸二氫銨（昆山諾普森實(shí)驗(yàn)室用品科技有限公司）、冰醋酸（杭州蕭山創(chuàng)益化工儀器有限公司）、甲醇（昆山諾普森實(shí)驗(yàn)室用品科技有限公司）、三乙胺（昆山諾普森實(shí)驗(yàn)室用品科技有限公司）、乙腈（昆山諾普森實(shí)驗(yàn)室用品科技有限公司）。

1.5 試藥：通脈刺五加膠囊

2 測(cè)定方法確定

2.1 色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下。流動(dòng)相：乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm，流速：1.0m·min-1。柱溫：30℃。理論板數(shù)按金絲桃苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

取在60℃減壓干燥4小時(shí)的金絲桃苷對(duì)照品適量，精密稱定，加流動(dòng)相制成每lml含20μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物適量，精密稱定，加60毫升70%甲醇溶液超聲處理0.5小時(shí)，放冷，濾過，濾液置100ml量瓶中，用少量70%甲醇溶液分次洗滌容器和殘?jiān)?，洗液濾人同一量瓶中，加70%甲醇溶液至刻度，搖勻，即得。

2.4 精密度試驗(yàn)

精密稱取金絲桃苷對(duì)照品適量，加流動(dòng)相使溶解，制成濃度為20μg·mL-1的供試品溶液。照上述色譜條件，精密吸取10μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，RSD=0.78%，表明本方法精密度良好。

2.5 對(duì)照品的線性考察

精密稱取適量金絲桃苷對(duì)照品，加入流動(dòng)相溶液使溶解分別配制成每毫升含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100微克的溶液。分別精密上述溶液吸取10μL，注人液相色譜儀，依照2.1項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄色譜峰。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，金絲桃苷在10～100μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱取同一批的金絲桃苷樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.87%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)

取對(duì)照品適量，精密稱取已知含量的樣品9份，置量瓶中，分別精密加入金絲桃苷對(duì)照品，按項(xiàng)下方法制備成80%、100%、120%。取模擬樣品照“ 含量測(cè)定”項(xiàng)下方法試驗(yàn)，計(jì)算回收率為99.6%，RSD為0.88%。

2.8 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定通脈刺五加膠囊三批樣品。

3 討論

分別考察甲醇-水-冰醋酸（20∶80∶0.5），甲醇-水-冰醋酸（40∶60∶0.5），甲醇-水（80：20，含0.1%三乙胺），乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（2：2：30：80），乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）為流動(dòng)相為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.5%醋酸（1：1：19：79）為流動(dòng)相為流動(dòng)相。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相法效果好、方法簡(jiǎn)便、快捷、準(zhǔn)確、專屬性好，可用于通脈刺五加膠囊中金絲桃苷的含量測(cè)定。

參考文獻(xiàn)

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