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      聯(lián)合檢測(cè)P16與SOX-2在宮頸上皮內(nèi)病變中的表達(dá)及臨床意義

      2018-11-20 03:33:58李梅香蔡麗萍
      當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2018年31期
      關(guān)鍵詞:弱陽(yáng)性上皮免疫組化

      李梅香,蔡麗萍

      (南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科,江西 南昌 330000)

      在女性惡性腫瘤死亡疾病中,宮頸癌占第二位,目前宮頸癌是唯一一個(gè)機(jī)制明確,且可以預(yù)防的惡性腫瘤[1]。宮頸癌的癌前病變?yōu)閷m頸上皮內(nèi)病變(CIN),積極有效地治療宮頸上皮內(nèi)病變可降低宮頸癌的發(fā)病率。臨床上用于評(píng)估宮頸上皮內(nèi)病變癌變的常用分類方法為:低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變(LSIL)以及高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病瘤變(HSIL)[2]。對(duì)于HPV感染不足以診斷 CIN以及CINⅠ級(jí)則為 LSIL,對(duì)于CINⅡ級(jí)及CINⅢ級(jí)則為HSIL。低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變與高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病瘤變的治療及預(yù)后均具有顯著的差異性,有著不同的治療方式,因此,診斷明確對(duì)于治療具有重要意義[3]。病理醫(yī)師主觀因素易影響到CIN的分級(jí),各分級(jí)間難以進(jìn)行明確的區(qū)分,故診斷與治療的難度增加。為了提高不同病理醫(yī)師間診斷的可重復(fù)性,引進(jìn)了多種生物化學(xué)標(biāo)記物,其中P16、SOX-2已經(jīng)在臨床上廣泛應(yīng)用[4]。當(dāng)病理醫(yī)師用常規(guī)的HE染色不能明確診斷CIN時(shí),則可以使用免疫組化法檢測(cè)P16、SOX-2以進(jìn)行形態(tài)學(xué)的診斷。本研究通過(guò)觀察不同程度病變的宮頸組織中 P16、SOX-2陽(yáng)性表達(dá)情況,探討P16、SOX-2在病變組織中表達(dá)的意義。

      1 資料與方法

      1.1 臨床資料 搜集2013年6月~2016年6月期間在本院經(jīng)病理活檢確診為宮頸上皮內(nèi)病變的病理組織標(biāo)本80例,并搜集同期在本院經(jīng)病理活檢示宮頸組織正常的組織標(biāo)本40例。將低級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變組織標(biāo)本設(shè)為為低級(jí)別組(n=30),將高級(jí)別宮頸上皮內(nèi)病變組織標(biāo)本設(shè)為高級(jí)別組(n=50),將宮頸組織正常標(biāo)本設(shè)為正常組(n=40)。所有病理組織標(biāo)本均經(jīng)兩位高年資病理醫(yī)師審核確定符合本研究的要求,且病例臨床資料完備,活檢前均未行任何放化療或中藥等抗腫瘤治療。

      1.2 免疫組化染色檢查 參照免疫組化染色質(zhì)量控制要求嚴(yán)格執(zhí)行操作程序。P16抗體、SOX-2抗體、濃縮型DAB試劑盒均來(lái)自于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司;其中P16抗體的克隆號(hào)為:3G5D5;SOX-2抗體的克隆號(hào)為:EP103;濃縮型DAB試劑盒的產(chǎn)品編號(hào)為:ZLI-9017。

      1.3 結(jié)果判定 P16陽(yáng)性:細(xì)胞漿呈棕黃色,SOX-2陽(yáng)性:細(xì)胞核呈棕黃色。綜合陽(yáng)性率與染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分:①陽(yáng)性率評(píng)分:每張組織切片上觀察5個(gè)高倍視野(×200),平均每高倍視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占觀察總細(xì)胞數(shù)的百分比;0分:陽(yáng)性率<5%;1分:陽(yáng)性率在5%~25%;2分:陽(yáng)性率在26%~50%;3分:陽(yáng)性率在51%~75%;4分:陽(yáng)性率在76%~100%。②染色強(qiáng)度評(píng)分:0分:無(wú)色;1分:淡黃色;2分:棕黃色;3分:棕褐色。最終陽(yáng)性率評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分的得分相乘,若為0分,則為陰性(-);若為1~4分,則為弱陽(yáng)性(+);若為5~12分,則為陽(yáng)性(++)。

      1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料采用“x±s”表示,組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料用例數(shù)(n)表示,計(jì)數(shù)資料組間率(%)的比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      正常組織中SOX-2、P16表達(dá)的陽(yáng)性率均為0.00%,宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中SOX-2、P16表達(dá)的陽(yáng)性率分別為55%(44/80)、67.5%(54/80),,見(jiàn)表1。低級(jí)別組內(nèi)SOX-2的陽(yáng)性表達(dá)率為13.33%(4/30),陰性(-)表達(dá)有26例,弱陽(yáng)性(+)表達(dá)有3例,陽(yáng)性(++)表達(dá)有1例;P16的陽(yáng)性表達(dá)率為23.33%(7/30),陰性(-)表達(dá)有23例,弱陽(yáng)性(+)表達(dá)有3例,陽(yáng)性(++)表達(dá)有4例;高級(jí)別組內(nèi)SOX-2的陽(yáng)性表達(dá)率為80%(40/50),陰性(-)表達(dá)有10例,弱陽(yáng)性(+)表達(dá)有13例,陽(yáng)性(++)表達(dá)有27例;P16的陽(yáng)性表達(dá)率為94%(47/50),陰性(-)表達(dá)有3例,弱陽(yáng)性(+)表達(dá)有15例,陽(yáng)性(++)表達(dá)有32例;組間的P16、SOX-2陽(yáng)性表達(dá)率均有明顯的差異性,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。

      表1 SOX-2、P16在正常組織與宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達(dá)Table 1 Sox-2 and P16 expression in normal tissue and cervical epithelial neoplasia

      表2 SOX-2、P16在不同級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中的表達(dá)Table 2 Sox-2 and P16 expression in different levels of cervical epithelial neoplasia

      3 討論

      宮頸癌是一種常見(jiàn)的女性惡性腫瘤,而宮頸上皮內(nèi)病變是其癌前病變。明確的CIN分級(jí)診斷可以為宮頸上皮內(nèi)病變提供有效的治療方法,從而降低宮頸癌的發(fā)病率[5]。目前臨床上病理活檢為診斷CIN的金標(biāo)準(zhǔn)。宮頸組織標(biāo)本通常采用HE染色診斷,而有一部分標(biāo)本通過(guò)HE染色難以明確診斷,其受病理醫(yī)師主觀因素的影響較大[6]。有相關(guān)研究結(jié)果顯示,不同病理醫(yī)師對(duì)CINⅠ級(jí)診斷的一致性僅為64%,CINⅡ級(jí)診斷的一致性低于50%[7]。宮頸上皮內(nèi)病變的病理診斷還會(huì)受到其它因素的影響。若標(biāo)本采集時(shí)組織標(biāo)本切片過(guò)厚,則CINⅠ級(jí)可能被診斷為CINⅡ級(jí);若標(biāo)本采集時(shí)組織標(biāo)本切片過(guò)薄,則CINⅢ級(jí)可能被診斷為 CINⅡ級(jí)[8]。鱗狀上皮萎縮、慢性炎癥、特殊治療、不成熟鱗狀上皮化生等均有可能導(dǎo)致出現(xiàn)類似CIN病灶,從而會(huì)影響到宮頸上皮內(nèi)病變的治療。若治療過(guò)度會(huì)對(duì)組織造成不必要的損傷,若治療不足會(huì)使病灶殘留。因此,為了提高宮頸上皮內(nèi)病變病理診斷的可重復(fù)性及一致性,學(xué)術(shù)界提倡采用特異性強(qiáng)的生化指標(biāo)來(lái)輔助診斷,如P16、SOX-2等。

      在宮頸癌的發(fā)生過(guò)程中,HPV發(fā)揮著重要的作用,其中最常見(jiàn)的高危亞型為HPV16/18。HPV16/18在子宮頸鱗狀細(xì)胞癌中的檢出率較高,盡管目前還沒(méi)有HPV感染導(dǎo)致宮頸癌發(fā)病的確切證據(jù),但已有大量證據(jù)顯示,HPV感染是宮頸癌十分常見(jiàn)的伴隨現(xiàn)象[9]。P16蛋白是一種重要的HPV轉(zhuǎn)染子宮頸細(xì)胞分子標(biāo)志物,其聚集于宮頸細(xì)胞內(nèi),因此可以采用免疫組化染色方法進(jìn)行清晰地觀察。在宮頸細(xì)胞發(fā)生癌變的過(guò)程中,可通過(guò)觀察P16蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況而得到HPV轉(zhuǎn)染細(xì)胞的直接證據(jù)。當(dāng)CIN伴有慢性宮頸感染時(shí),通過(guò)形態(tài)學(xué)的觀察難以進(jìn)行分級(jí)的判斷,特別是樣本較小,比較局限時(shí),其重復(fù)性較差[10]。有無(wú)HPV感染可通過(guò)HPV16/18型原位雜交結(jié)果證實(shí),但難以評(píng)價(jià)CIN的分級(jí)。在本研究結(jié)果中,正常宮頸組織的P16表達(dá)均為陰性,對(duì)于宮頸上皮內(nèi)病變組織,隨著病變嚴(yán)重程度的增加,P16的陽(yáng)性表達(dá)率也明顯增加。因此,P16在宮頸上皮內(nèi)病變的病理診斷中具有重要意義,可以將其作為診斷及判斷其病變嚴(yán)重程度的客觀指標(biāo)。

      SOX-2是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,在DNA的損傷修復(fù)、腫瘤干細(xì)胞自我更新、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)方面均有著不可替代的作用[11]。有相關(guān)文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn),腫瘤干細(xì)胞的自我更新相關(guān)、宮頸癌的發(fā)生、宮頸癌細(xì)胞株的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移均與SOX-2的表達(dá)密切相關(guān)[12]。在本研究結(jié)果中,正常宮頸組織的SOX-2表達(dá)均為陰性,對(duì)于宮頸上皮內(nèi)病變組織,隨著病變嚴(yán)重程度的增加,SOX-2的陽(yáng)性表達(dá)率也明顯增加,在高級(jí)宮頸上皮內(nèi)病變組織中,SOX-2陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)100%。該結(jié)果說(shuō)明在宮頸上皮內(nèi)病變的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中均有SOX-2的參與,其陽(yáng)性表達(dá)率與宮頸上皮內(nèi)病變的嚴(yán)重程度密切相關(guān),病變?cè)絿?yán)重,陽(yáng)性率越高。SOX-2具有調(diào)控細(xì)胞的作用,其陽(yáng)性表達(dá)率可能與宮頸細(xì)胞的分化程度有關(guān),陽(yáng)性表達(dá)率的升高表示宮頸上皮內(nèi)病變的病情在進(jìn)展。

      綜上所述,在宮頸上皮內(nèi)病變的病理診斷中,如果將HE染色的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合P16、SOX-2的免疫組化法檢測(cè),則能得到更加客觀的診斷,且P16與SOX-2的聯(lián)合檢測(cè)能客觀反映出宮頸上皮內(nèi)病變的病變程度,提高病理診斷的精確性。

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