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      RCAS1基因與乳腺癌相關(guān)性分析

      2018-11-20 03:33:54覃新干黨裔武韋康來劉金祿張小彬
      當(dāng)代醫(yī)學(xué) 2018年31期
      關(guān)鍵詞:組織學(xué)宿主免疫組化

      覃新干,黨裔武,韋康來,劉金祿,張小彬

      (1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院胃腸腺體外科,廣西 南寧 530021;2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科,廣西 南寧 530021)

      乳腺癌是目前威脅女性健康的主要因素,根據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道,全球女性新發(fā)乳腺癌病例數(shù)和乳腺癌死亡病例數(shù)均位居各類癌癥的首位。我國(guó)乳腺癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),發(fā)病高峰在45~60歲,有年輕化的趨勢(shì)[1]。近年來,我國(guó)乳腺癌發(fā)病率的增長(zhǎng)速度是全球的2倍多,特別在城市地區(qū),像大多數(shù)其他國(guó)家一樣,乳腺癌是我國(guó)女性最常見的癌癥[2]。研究乳腺癌的發(fā)生及預(yù)防乳腺癌的發(fā)生更顯為重要和迫切。隨著腫瘤發(fā)病機(jī)制研究的深入,研究者越來越意識(shí)到腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是腫瘤細(xì)胞與宿主之間相互對(duì)抗和博弈的過程,宿主細(xì)胞與腫瘤之間的相互作用對(duì)腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)歸具有關(guān)鍵的影響,而宿主的免疫系統(tǒng)和其形成的免疫微環(huán)境在腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起至關(guān)重要的作用。SiSo細(xì)胞上的受體結(jié)合腫瘤抗原(receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells,RCAS1)是一種新的腫瘤相關(guān)抗原,具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視,影響癌組織間質(zhì)微環(huán)境的作用[3]。那么,RCAS1與乳腺癌的發(fā)生是否有關(guān)系呢?本文通過免疫組化檢測(cè)RCAS1基因在乳腺癌組織的表達(dá)情況,初步探討其與乳腺癌發(fā)生的關(guān)系。

      1 資料與方法

      1.1 臨床資料 收集2013年1月~2015年10月在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院并手術(shù)治療的105例乳腺癌患者的癌組織、癌旁組織及年齡、腫瘤大小、病理組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)等臨床病理資料。所有患者術(shù)前均無(wú)化療、放療及免疫治療等,病理學(xué)診斷均為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌。全部為女性患者,年齡24~81歲。標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛固定、石蠟包埋、常規(guī)切片、HE染色后病理學(xué)檢查確定。

      1.2 主要試劑 RCAS1抗體購(gòu)自美國(guó)SANTA CRUZ生物技術(shù)有限公司,SupervisionTM鼠、兔通用二抗檢測(cè)系統(tǒng)購(gòu)自上海長(zhǎng)島生物科技有限公司。

      1.3 方法 免疫組化染色參照抗體說明書操作,4疫組常規(guī)石蠟組織切片65℃烘烤2 h,二甲苯脫蠟,梯度酒精至水。將切片浸入預(yù)熱至沸騰的檸檬酸鈉修復(fù)液中,繼續(xù)加熱至高壓鍋閥門上汽后計(jì)時(shí)2.5 min,3%H2O2滅活內(nèi)源性過氧化物酶,PBS浸洗3洗3 min。滴加50加n性過氧化物抗體(1:100),37℃濕盒中孵育90 min,PBS充分浸洗3 min。滴加SupervisionTM鼠/兔通用二抗檢測(cè)系統(tǒng)室溫孵育25 min,PBS充分浸洗3 min。DAB顯色,蘇木素復(fù)染,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。光學(xué)顯微鏡下觀察和分析。選用已知陽(yáng)性的乳腺癌標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照,用PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。

      1.4 結(jié)果判定 RCAS1陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞為細(xì)胞漿或膜著色,呈棕黃色。每例切片隨機(jī)選取至少5個(gè)高倍視野(×高倍視野),計(jì)數(shù)至少500個(gè)細(xì)胞,評(píng)分參照免疫反應(yīng)積分法。染色強(qiáng)度分為4級(jí):不顯色為0分;淺黃色為1分;棕黃色為2分;棕褐色為3分。陽(yáng)性細(xì)胞百分率分為4級(jí),陰性為0分,≤25%為1分,25%~50%為2分,>50%為3分。兩分級(jí)相加,0~3分為陰性表達(dá),≥4分為陽(yáng)性表達(dá)。

      1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)數(shù)資料組間率(%)的比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      2 結(jié)果

      2.1 RCAS1蛋白表達(dá)情況 RCAS1陽(yáng)性表達(dá)在細(xì)胞為細(xì)胞漿或膜著色,呈棕黃色。RCAS1在乳腺癌組織、癌旁組織的表達(dá)率分別為84%(88/105)、17%(18/105),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      表1 RCAS1蛋白在乳腺癌組織及癌旁組織表達(dá)情況Table 1 Expression of RCAS1 protein in breast cancer tissue and paracancerous tissue

      2.2 RCAS1蛋白的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征關(guān)系 在乳腺癌組織中,RCAS1蛋白的表達(dá)在以患者的年齡、腫瘤大小、病理組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

      表2 RCAS1蛋白的表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征關(guān)系Table 2 Relationship between expression of RCAS1 protein and clinicopathological features of breast cancer

      3 討論

      腫瘤細(xì)胞為實(shí)現(xiàn)其對(duì)宿主的免疫逃逸,主要通過修飾腫瘤細(xì)胞本身和改變腫瘤微環(huán)境以逃逸宿主免疫細(xì)胞的識(shí)別和攻擊。而腫瘤一旦發(fā)生其細(xì)胞的自身特點(diǎn)就決定其逃逸能力。腫瘤微環(huán)境由腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)、腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞以及細(xì)胞因子等組成,是機(jī)體免疫系統(tǒng)與腫瘤細(xì)胞進(jìn)行博弈的場(chǎng)所,因而,腫瘤微環(huán)境上的機(jī)體免疫細(xì)胞識(shí)別與攻擊腫瘤細(xì)胞的強(qiáng)弱在很大程度上決定了腫瘤細(xì)胞能否成功實(shí)現(xiàn)免疫逃逸。

      人RCAS1/EBAG9基因即SiSo細(xì)胞上/雌激素受體結(jié)合片段相關(guān)基因9表達(dá)的受體結(jié)合腫瘤抗原,定位于人類染色體8q23.2,是一種雌激素轉(zhuǎn)錄蛋白。RCAS1蛋白是通過其C末端卷曲螺旋結(jié)構(gòu)形成同型寡聚體的Ⅱ型膜蛋白,在多種人類癌細(xì)胞上有表達(dá),如子宮、卵巢、前列腺癌、肝細(xì)胞癌、肺癌細(xì)胞等。研究表明,RCAS1蛋白作為存在于各種人類細(xì)胞中的推定受體的配體,包括正常的外周淋巴細(xì)胞,如T,B和天然殺傷(NK)細(xì)胞,不僅存在于腫瘤細(xì)胞中,而且還存在于正常組織的細(xì)胞中,并且控制免疫應(yīng)答。在體外和體內(nèi)RCAS1蛋白抑制受體表達(dá)的細(xì)胞生長(zhǎng),并通過caspase-3的活化和線粒體跨膜電位的崩解誘導(dǎo)凋亡的細(xì)胞死亡,RCAS1蛋白可能通過抑制T淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)又促進(jìn)其凋亡而在腫瘤細(xì)胞免疫逃逸中發(fā)揮作用,如RCAS1誘導(dǎo)活化的TILs凋亡而使腫瘤細(xì)胞逃避宿主的免疫監(jiān)視。RCAS1蛋白的高表達(dá)與腫瘤進(jìn)展和多種癌癥患者的不良預(yù)后顯著相關(guān)[4-8]。

      本文采用免疫組化檢查發(fā)現(xiàn)RCAS1蛋白在乳腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)率分別為84%(88/105)、17%(18/105),與Suzuki T等在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中,用免疫組化等方法研究發(fā)現(xiàn)RCAS1表達(dá)陽(yáng)性率為90.1%(82/91)相似[9]。乳腺癌組織與癌旁組織中RCAS1蛋白的表達(dá)有差異,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí),我們發(fā)現(xiàn)在乳腺癌組織中,RCAS1蛋白的表達(dá)在以病人的年齡、腫瘤大小、病理組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面作為比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RCAS1基因在乳腺癌組織中高表達(dá),癌旁組織中呈低表達(dá),而這種高表達(dá)在以年齡、腫瘤大小、病理組織學(xué)分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否等方面作為比較的癌組織中表達(dá)沒有差異,提示RCAS1基因表達(dá)可能與乳腺癌發(fā)生密切相關(guān),與年齡、腫瘤大小、病理組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等方面關(guān)系不密切,這可能是RCAS1蛋白可能通過抑制T淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)又促進(jìn)其凋亡而在腫瘤細(xì)胞免疫逃逸中發(fā)揮作用有關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道,RCAS1蛋白質(zhì)參與調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境及其免疫反應(yīng),使腫瘤細(xì)胞實(shí)現(xiàn)免疫逃逸[10]。

      本文采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)105例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織及相應(yīng)癌旁組織的RCAS1基因表達(dá),發(fā)現(xiàn)RCAS1基因與乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌密切相關(guān),值得進(jìn)一步研究。

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