高效液相色譜法快速測定草莓中7種氨基酸酯類農(nóng)藥殘留

余朝旭，陳月丹，黃玉，陸王佳

(象山縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，浙江 象山 315700)

草莓于20世紀(jì)初引進我國，并得到了迅速發(fā)展，我國已成為全球第一大草莓種植國。由于草莓果實柔軟多汁且無外皮保護，易受病蟲為害，生產(chǎn)中施用農(nóng)藥是主要防治手段[1]。近幾年，各地屢次出現(xiàn)草莓中檢測出高毒農(nóng)藥克百威的新聞報道，引起社會各界對草莓生產(chǎn)中農(nóng)藥使用安全的擔(dān)憂[2-4]。氨基甲酸酯類農(nóng)藥是一種高效、廣譜型殺蟲劑，具有殺蟲效果顯著、分解快、殘留期短、代謝迅速的特點，其殺蟲作用機制為抑制昆蟲神經(jīng)傳導(dǎo)的重要物質(zhì)乙酰膽堿酯酶的活性[5]。由于氨基甲酸酯類農(nóng)藥在草莓生產(chǎn)中未被科學(xué)地使用，增加了產(chǎn)品安全風(fēng)險，使得氨基甲酸酯類農(nóng)藥的分析檢測倍受關(guān)注。

本文采用乙腈提取、固相萃取凈化、濃縮定容、使用高效液相色譜-柱后衍生-熒光檢測法，同時測定7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留量。本方法前處理操作快速簡單，檢測靈敏度高，重復(fù)性好，有助于提高檢測工作效率。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器與試劑

Waters E2695高效液相色譜儀(配Waters 2475熒光檢測器、柱后衍生系統(tǒng))，天平(0.01，奧豪斯)，IKA T18 勻漿機(IKA公司)，3K-15高速冷凍離心機(德國SIGMA公司)，氮吹儀(美國Organomation公司)，固相萃取裝置(安捷倫公司)，快速混勻器(常州國華電器有限公司)，溶劑抽濾裝置(天津市津騰實驗設(shè)備有限公司)。

乙腈、甲醇、二氯甲烷(色譜純，美國天地有限公司)；氯化鈉，氫氧化鈉(分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司)；四硼酸鈉(分析純，上海展云化工有限公司)；娃哈哈純凈水；氨基固相萃取小柱(500 mg/6 mL，安捷倫公司)；0.22 μm尼龍濾膜(天津市津騰實驗設(shè)備有限公司)；鄰苯二甲醛、巰基乙醇(色譜純，Pickering公司)。

1.1.2 柱后衍生試劑溶液配制

0.05 mol·L-1氫氧化鈉。稱2 g NaOH溶于1 L水中，經(jīng)0.45 μm濾膜抽濾脫氣。

OPA試劑。稱19.1 g四硼酸鈉溶于1 L水加入0.1 g鄰苯二甲醛(先溶解在10 mL甲醇中)，經(jīng)0.45 μm濾膜抽濾脫氣，加入2 g巰基乙醇混勻，棕色瓶避光保存。

1.1.3 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、克百威、三羥基克百威、甲萘威等7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均由農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研檢測所生產(chǎn)，濃度均為100 μg·mL-1，用甲醇稀釋成1 μg·mL-1濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液。

1.2 方法

1.2.1 樣品前處理

取15.0 g混勻粉碎后的草莓樣品置于50 mL離心管中，加入15 mL乙腈，用勻漿機勻漿1 min，加入5 g氯化鈉，震蕩2 min，置于離心機以4 000 r·min-1離心3 min。吸取4.00 mL上清液到10 mL玻璃試管中，水浴50 ℃下氮吹至近干，用2 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)溶解殘渣，待凈化。

用4.0 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)活化氨基固相萃取小柱后，倒入上述待凈化液并收集洗脫液，用2 mL甲醇+二氯甲烷(1+99)清洗待凈化液試管后過柱，并重復(fù)1次。洗脫液于水浴50 ℃下氮吹至近干，用50%甲醇水溶液準(zhǔn)確定容至2.0 mL，在混勻器上混勻后，用0.22 μm濾膜過濾，待測。

1.2.2 儀器分析條件

色譜柱。Sunfire C18液相色譜柱，4.6 mm×250 mm，5 μm；流動相為乙腈、水，梯度洗脫(表1)；柱溫42 ℃；進樣量20.0 μL；定量方法采用外標(biāo)法；熒光檢測器(λex330 nm，λem465 nm)；柱后衍生：流速0.3 mL·min-1，水解溫度80 ℃，衍生溫度為室溫。

表1 流動相梯度與流速

2 結(jié)果與分析

2.1 7種氨基甲酸酯農(nóng)藥的液相色譜圖,分離度及拖尾因子

按照1.2.2儀器條件測定，得到0.2 mg·L-1濃度(溶劑為50%甲醇水溶液)的7種氨基甲酸酯農(nóng)藥的液相色譜圖(圖1)，7種農(nóng)藥在25 min內(nèi)均得到良好的分離。如表2所示，分離度均大于1.5，到達完全分離狀態(tài)，對稱性良好。得到的色譜圖分離效果、峰型和響應(yīng)值均比較理想。

圖1 7種氨基甲酸酯類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜

農(nóng)藥保留時間/min分離度拖尾因子信噪比涕滅威亞砜8.9691.17149.26涕滅威砜10.8187.221.22132.75滅多威12.1594.761.20185.74三羥基克百威14.2188.141.24151.86涕滅威16.59710.051.16192.23克百威19.1659.871.17133.09甲萘威19.9632.841.13154.86

2.2 線性范圍、標(biāo)準(zhǔn)曲線及定量限

試驗前取1 μg·mL-1的7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥(涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、克百威、三羥基克百威、甲萘威)混合標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用甲醇和水分別稀釋成0.01、0.05、0.10、0.20、0.50 mg·L-1(溶劑為50%甲醇水溶液)5個濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.2.2節(jié)所述的儀器條件進行測定。以10倍信噪比表示定量限，以各色譜峰的面積為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)做線性回歸處理。由表3可知，7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在0.01～0.50 mg·L-1的線性范圍內(nèi)，R2為0.999 932～0.999 998，線性關(guān)系良好；定量限達0.005～0.008 mg·kg-1，低于國家標(biāo)準(zhǔn)的限量值。

2.3 方法回收率及精密度

取經(jīng)檢測不含有待測農(nóng)藥的草莓樣品分成2組，每組3個平行樣，分別添加7種氨基甲酸酯農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。第1組添加水平為0.05 mg·kg-1，第2組添加水平為0.10 mg·kg-1。以1.2.1所述的前處理方法，1.2.2節(jié)所述的儀器條件，進行回收率和精密度的試驗。經(jīng)檢測，7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥加標(biāo)濃度為0.05 mg·kg-1時，回收率為81%～110%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～3.8%。加標(biāo)濃度為0.10 mg·kg-1時，回收率為87%～116%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.3%～1.2%。2組樣品回收率均在80%～120%，第2組高濃度樣品的精密度相對較好。由表4可知，試驗所用前處理方法和儀器分析方法可以得到滿意的回收率和精密度。

表3 不同農(nóng)藥的定量限、線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)

表4 草莓平行樣混標(biāo)添加水平的回收率和精密度

3 小結(jié)與討論

草莓中涕滅威、涕滅威砜、涕滅威亞砜、滅多威、克百威、三羥基克百威、甲萘威等7種氨基甲酸酯農(nóng)藥的殘留量用乙腈提取、氨基柱凈化，使用高效液相色譜儀-柱后衍生-熒光檢測器測定，在25 min內(nèi)得到良好的分離，R2為0.999 932～0.999 998，定量限達0.005～0.008 mg·kg-1。當(dāng)添加水平為0.05 mg·kg-1時，回收率為81%～110%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.1%～3.8%；當(dāng)添加水平為0.10 mg·kg-1時，回收率為87%～116%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.3%～1.2%。

此方法與《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測定》(NY/T 761—2008)第3部分比較，變化如下：1)稱樣量和試劑用量進行適當(dāng)調(diào)整；2)樣品前處理中過濾靜置步驟調(diào)整為離心；3)樣品最后定容溶劑純甲醇調(diào)整為50%甲醇水溶液；4)儀器條件流動相由甲醇水調(diào)整為乙腈水，并適度調(diào)整梯度。經(jīng)試驗確證，此方法前處理步驟簡便，操作簡單，用時較短，目標(biāo)物峰型和峰高比較理想，達到良好的分析效果，可運用于對草莓中氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速定量檢測。