水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法

□ 侯冰 林威 宋文 宋之光 金楓清 丹東市檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證中心

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

提取液、快速衍生試劑：廣州潤(rùn)坤生物科技有限公司；AOZ：100μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；AHD、SEM：純度≥99.0%，Dr.Ehrenstorfer；AMOZ、D4-AOZ、D5-AMOZ、13C3-AHD、13C-15NSEM：純度≥98.0%，WITEGA。

XEVO TQD液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：美國(guó)Waters公司；ME2002電子天平：瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 樣品的前處理

1.2.1.1 水解和衍生化

稱(chēng)取試樣2g（精確至0.01g），加入混合內(nèi)標(biāo)溶液100μL，加入1mL水震蕩3min，加入1mL提取液，震蕩混合1min，在4000r/min下離心5min。倒出上清液，加入100μL快速衍生試劑，置于55～60℃的恒溫水浴鍋中衍生60min。

1.2.1.2 提取和凈化

取出水解和衍生化樣液冷卻至室溫，加入5mL 0.1mol/L的磷酸氫二鉀，并用1mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)pH至7.4，混勻。用8000r/min離心10min，以小于2mL/min的流速過(guò)PEP-2小柱(規(guī)格為60mg/3mL，用5mL甲醇、5mL水活化)，并用10mL的水洗滌固相萃取小柱，負(fù)壓抽干柱子15min。用5mL乙酸乙酯洗脫，60℃下氮?dú)獯蹈?。用流?dòng)相定容至1mL，上機(jī)分析。

表1 4種硝基呋喃類(lèi)代謝物的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

1.2.2 儀器條件

1.2.2.1 色譜條件

色譜柱：C18色譜柱（2.1×50mm，1.7μm）；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸的水溶液，B為乙腈；流速：0.45mL/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；梯度洗脫程序：0～ 0.2min，A為 90%，B為 10%；0.2～ 3min，A為 10%，B為 90%；3～5min，A為10%，B為90%；5～7min，A為90%，B為10%。

1.2.2.2 質(zhì)譜條件

毛細(xì)管電壓：2.6kV；離子源溫度：150℃；去溶劑溫度：350℃；離子源：電噴霧離子源（ESI），正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM）。

2 結(jié)果與討論

2.1 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)

配制適當(dāng)濃度的硝基呋喃代謝物標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，除不加樣品外，余下操作同樣品前處理步驟。結(jié)果顯示，各曲線(xiàn)線(xiàn)性關(guān)系良好（相關(guān)性系數(shù)＞0.99）。以該4種物質(zhì)在儀器上的信噪比S/N=3作為方法檢出限，4種硝基呋喃類(lèi)代謝物的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)見(jiàn)表1。

2.2 回收率試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)

取陰性三文魚(yú)樣本進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，加標(biāo)量為0.5μg/kg，平行測(cè)試3個(gè)樣本（n=3）,回收率試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，本方法準(zhǔn)確度較高，4種硝基呋喃類(lèi)代謝物的加標(biāo)回收率在90%～105%之間，重復(fù)性較好（RSD＜5%）。

3 研究結(jié)論

表2 回收率試驗(yàn)和精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

水產(chǎn)品用提取液提取，快速衍生化試劑衍生，經(jīng)固相萃取小柱凈化后，分析物采用液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。4種硝基呋喃代謝物工作曲線(xiàn)線(xiàn)性關(guān)系良好（R2＞0.99）；方法的檢出限均為0.5μg/kg；方法測(cè)定準(zhǔn)確度較高，加標(biāo)回收率在90%～105%之間,重復(fù)性較好（RSD＜5%）。