MMP—2與NF—KB在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用研究

潘兆寶 吉華青 韓麗芳 董安山 史立宏

摘要 目的：觀察在肺癌組織中基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和NF-KB的表達(dá)，探討MMP-2與NF-KB在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。方法：收治80例癌肺患者作為觀察組，67例肺癌旁正常患者作為對(duì)照組，用免疫組織化學(xué)方法檢測肺癌組織中MMP-2和NF-KB的表達(dá)。結(jié)果：觀察組和對(duì)照組MMP-2的表達(dá)率分別為20%（16/80）、71.6% （48/67）；觀察組和對(duì)照組NF-KB蛋白的表達(dá)率分別為68.7%（55/80）、35.8%（24/67）。肺癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及術(shù)后生存時(shí)間與MMP-2和NF-KB蛋白的表達(dá)水平有很大關(guān)系。MMP-2表達(dá)水平和NF-KB負(fù)相關(guān)（P<0.05）；患者的MMP -2蛋白表達(dá)水平低以及NF-KB蛋白表達(dá)水平高，會(huì)降低患者的平均生存時(shí)間以及5年生存率（P<0.05）。結(jié)論：MMP-2的低表達(dá)以及NF-KB蛋白的高表達(dá)在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中有直接影響，MMP-2低表達(dá)可促使NF-KB蛋白信號(hào)激活，促進(jìn)肺癌侵襲轉(zhuǎn)移。

關(guān)鍵詞 肺癌；MMP-2蛋白；NF-KB；侵襲轉(zhuǎn)移

目前在肺癌治療中較難解決的問題之一是惡性腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移。在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過程中基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和NF-KB（核因子KB）的表達(dá)起到了很重要的作用[1-3]，本研究通過對(duì)80例癌肺患者和67例肺癌旁正?；颊叩腗MP-2和NF-KB的表達(dá)水平比較，分析MMP2與NF-KB在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

2014年10月-2015年10月收治80例癌肺患者作為觀察組及67例肺癌旁正常患者作為對(duì)照組。80例癌肺患者中男45例，女35例；年齡32～74歲，平均52.8歲；均未術(shù)前無化療或放療患者。67例肺癌旁正常患者中男37例，女30例；年齡33～ 72歲，平均50.5歲。根據(jù)1997年公布的修訂分期標(biāo)準(zhǔn)，35例鱗癌，45例腺癌；低分化31例，中分化30例，高分化19例；36例I+Ⅱ期患者，44例Ⅲ+Ⅳ期患者。44例淋巴結(jié)陽性轉(zhuǎn)移，36例陰性轉(zhuǎn)移。完整隨訪78例，隨訪時(shí)間2015年11月-2016年5月，以手術(shù)日期到隨訪結(jié)束日期記為生存時(shí)間，或者囚復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移死亡的日期為生存時(shí)間，見表1。

處理方法：①免疫組織化學(xué)法：用二甲苯脫蠟和梯度乙醇水化兩組的石蠟切片，浸泡3%甲醇一過氧化氫溶液20min，抗原修復(fù)12min，用購自北京中杉公司的免疫組化sP試劑盒和DAB顯色試劑，10～15min室溫下H202氧化物進(jìn)行染色。陽性對(duì)照物為PBS。②結(jié)果判定：胞膜或胞質(zhì)染成棕色為陽性反應(yīng)，NF-KB以細(xì)胞質(zhì)和（或）細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。以200個(gè)細(xì)胞作為每張切片的計(jì)數(shù)基數(shù)，統(tǒng)計(jì)不同級(jí)別陽性細(xì)胞所占的百分比。O分為胞膜或胞質(zhì)無染色患者；1分為胞膜或胞質(zhì)染色淺棕患者；2分為胞膜或胞質(zhì)染色深棕患者。不同級(jí)別陽性細(xì)胞所占的百分比：0分為0%～ 5%；1分為6%～25%；2分為26%～50%：>50%為3分。胞膜或胞質(zhì)染色分?jǐn)?shù)不同級(jí)別陽性細(xì)胞所占的百分比分?jǐn)?shù)的得分作為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移為陰陽性的標(biāo)準(zhǔn)。強(qiáng)陽性>6分，中等陽性4～6分，弱陽性2～3分，陰性O(shè)～1分。陰性或弱陽性為低表達(dá)，中等陽性或強(qiáng)陽性為高表達(dá)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 20.0數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。所有計(jì)量資料數(shù)據(jù)采用（x±s）表示，免疫組織化學(xué)染色結(jié)果與臨床病理參數(shù)計(jì)數(shù)資料采用X2檢驗(yàn)。MMP-2與NF-KB蛋白表達(dá)的相關(guān)關(guān)系采用Spearman相關(guān)分析，采用Kaplan-Meier曲線和Log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2在肺癌和正常肺組織中的表達(dá)比較：80例癌肺患者基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2呈陰性或少數(shù)微弱陽性表達(dá)64例，高表達(dá)16例，表達(dá)率20%；65例癌旁正?；颊叱赎幮曰蛏贁?shù)微弱陽性15例，陽性表達(dá)48例（71.6%），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

NF-KB在肺癌和正常肺組織中的表達(dá)比較：80例癌肺患者NF-KB呈陰性或少數(shù)微弱陽性表達(dá)28例，高表達(dá)52例，表達(dá)率65%，在高倍顯微鏡下腫瘤細(xì)胞的胞質(zhì)或胞核成棕黃色；67例正常肺組織中陰性或少數(shù)微弱陽性表達(dá)43例，高表達(dá)24例（44.7%），兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

MMP-2與NF-KB蛋白表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系：MMP-2與NF-KB蛋白的陽性表達(dá)與性別、腫瘤大小以及吸炯史無明顯關(guān)系（P>0.05），MMP-2陽性表達(dá)隨肺癌分化變高而變高，反之NF_KB陽性表達(dá)隨隨肺癌分化變高而降低（P<0.05）。TNM分期增加，MMP-2陽性表達(dá)下降，NF-KB陽性表達(dá)上升（P<0.05）。由此可以看出MMP-2與NF-KB蛋白的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，見表4。

MMP-2和NF-KB蛋白表達(dá)與術(shù)后生存時(shí)間的關(guān)系：80例肺癌患者中78例完整隨訪，隨訪發(fā)現(xiàn)MMP-2低表達(dá)患者的術(shù)后生存時(shí)間低于高表達(dá)患者生存時(shí)間，NF-KB高表達(dá)患者的術(shù)后生存時(shí)間低于高表達(dá)患者生存時(shí)間，總之患者的生存時(shí)間受MMP-2低表達(dá)和NF-KB高表達(dá)影響，見表5。

討論

MMP-2是基質(zhì)金屬蛋白酶一種，是蛋白水解酶，可以降解如基底膜及其結(jié)締組織等細(xì)胞外間質(zhì)，為腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移打開了第一道缺口。研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中的MMP-2表達(dá)高于正常組織。核因子KB及NF-KB是真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子，NF-KB信號(hào)通路可以調(diào)控細(xì)胞增殖、分化和凋亡等重要生理功能，同時(shí)與腫瘤發(fā)生聯(lián)系密切。

綜上所述，MMP-2的低表達(dá)以及NF-KB蛋白的高表達(dá)在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中有直接影響。