COX-2和c-Fos在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義

陳 娟 畢明宏 高振遠 王雅萍

(蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科,安徽 蚌埠 233000)

非小細胞肺癌(NSCLC)是嚴重影響人類健康的惡性腫瘤之一[1]，其發(fā)病率與死亡率逐年上升，在發(fā)達國家和我國大中城市已居惡性腫瘤首位[2]。近20多年來，其5年生存率只有不足15%[3]。肺癌的分子生物學(xué)的研究是國內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究者不斷努力的方向[4]。環(huán)氧化酶2(COX-2)作為合成前列腺素過程中的關(guān)鍵酶，在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色[5]；c-Fos是核轉(zhuǎn)錄因子AP-1家族的主要成員，參與形成異源二聚體，調(diào)控細胞周期的進程，促進細胞增殖。研究[6]表明，多種轉(zhuǎn)錄因子共同調(diào)節(jié)COX-2水平的表達。本實驗選取我院腫瘤內(nèi)科收治的非小細胞肺癌患者38例，研究COX-2和c-Fos在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 組織標(biāo)本

選取我院腫瘤內(nèi)科自2016年3月—2017年9月收治的非小細胞肺癌患者38例，所有患者均由病理學(xué)和影像學(xué)檢查確診，符合非小細胞肺癌診斷標(biāo)準。其中男26例，女12例，平均年齡(58±2.6)歲；吸煙狀況：吸煙者22例，非吸煙者16例；腫瘤大小：≤3 cm 14例，>3 cm 24例；臨床分期(按照AJCC 2010年第7版NSCLC分期標(biāo)準)：Ⅰ、Ⅱ期11例，Ⅲ、Ⅳ期27例；淋巴轉(zhuǎn)移：是23例，非15例。

1.2 試劑

北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供兔抗人COX-2多抗(AF-0010，工作濃度1∶200)；兔抗人c-Fos抗體(ml006334，工作濃度1∶250)及相應(yīng)試劑盒、DAB酶底物顯色試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供。

1.3 免疫組織化學(xué)染色

將38例肺癌組織和30例癌旁組織新鮮標(biāo)本用10%多聚甲醛固定，石蠟包埋，4 μm左右厚連續(xù)切片，之后脫蠟(二甲苯)，水化(梯度乙醇)，抗原熱修復(fù)(微波爐中高火5 min、中低火15 min)，消除內(nèi)源性過氧化酶活性(3%雙氧水、80%甲醇室溫30 min)。一抗4℃孵育過夜，PBS漂洗，PV9000室溫孵育，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，1%鹽酸、75%乙醇分化，1%氨水返藍，過梯度乙醇脫水，封片，然后在載玻片固定讀片。PBS代替一抗為陰性對照，整個過程按照說明書操作步驟嚴格實施。

1.4 療效評定標(biāo)準

所有制作標(biāo)本切片由兩位專門病理醫(yī)生分別讀取。COX-2胞漿內(nèi)染色呈棕黃色，c-Fos細胞核染色呈棕黃色。根據(jù)芯片上陽性細胞的百分數(shù)評分：陽性細胞數(shù)≤5%，0分；6%～25%，1分；26%～50%，2分；51%～75%，3分；76%～100%，4分；0分為陰性，1～3分為弱陽性，4分為強陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS15.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析，P≤0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 COX-2、c-Fos在非小細胞肺癌組織及癌旁組織中的表達比較

COX-2和c-Fos在非小細胞肺癌組織中的表達陽性率均明顯高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 COX-2、c-Fos在非小細胞肺癌組織及癌旁組織中的表達比較

2.2 COX-2、c-Fos的表達與非小細胞肺癌臨床因素的關(guān)系

COX-2的表達與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，分化程度(高分化陽性表達率為15.38%，中分化為40.00%，低分化為66.67%)之間存在差異，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織，均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；COX-2的表達與年齡、性別、吸煙狀況、腫瘤大小、臨床分期無相關(guān)性(P>0.05)，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。c-Fos表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織中表達高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；c-Fos表達與年齡、性別、吸煙狀況、腫瘤大小、臨床分期、分化程度無相關(guān)性(P>0.05)，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義。見表2。

2.3 COX-2和c-Fos之間表達的相關(guān)性

COX-2和c-Fos在非小細胞肺癌組織中的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=15.35,P=0.004)，Spearman相關(guān)性分析顯示COX-2和c-Fos的表達存在正相關(guān)(r=0.590，P<0.01)。見表3。

3 討 論

COX是一種前列腺素合成的重要限速酶，分為兩種亞型：COX-1和COX-2[7]。其中COX-2是誘導(dǎo)酶的一種，將花生四烯酸誘導(dǎo)成前列腺素環(huán)內(nèi)過氧化物，然后經(jīng)過細胞的一系列代謝，最終生成不同的前列腺產(chǎn)物，在生理代謝和病理過程中起到重要作用[8]。臨床研究證實COX-2的表達與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。劉江等[9]研究發(fā)現(xiàn)，COX-2陽性表達與非小細胞肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及肺腺癌預(yù)后密切相關(guān)，張煥等[10]研究發(fā)現(xiàn)，COX-2的表達與非小細胞肺癌的直徑呈正相關(guān)(P<0.05)，因為COX-2可能在誘導(dǎo)生成前列腺素產(chǎn)物中，產(chǎn)生誘導(dǎo)新生血管生長的物質(zhì)，中間提供了血供和氧氣，最終促進腫瘤的快速生長。

c-Fos是核內(nèi)癌基因重要蛋白分子，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[11]。c-Fos和c-jun相互作用，形成AP-1，調(diào)節(jié)機體內(nèi)基因的轉(zhuǎn)錄過程。作用機制為通過間接調(diào)節(jié)靶基因、血管內(nèi)皮生長因子D等的生長，進而調(diào)節(jié)腫瘤細胞的增殖，導(dǎo)致侵襲性生長最終血管出現(xiàn)。Bakiri L等[12]研究表明，c-Fos參與非小細胞肺癌的形成，并且沒有通過STAT5途徑，而是其他途徑發(fā)揮其抑制細胞分化、促進細胞增殖以及促進細胞轉(zhuǎn)化。另外c-fos參與了細胞內(nèi)信息傳導(dǎo)和能量代謝，在機體活動中扮演重要角色。

表2 COX-2和c-Fos的表達與非小細胞肺癌臨床因素的關(guān)系

表3 COX-2和c-Fos之間表達的相關(guān)性

本研究結(jié)果顯示，在非小細胞肺癌中，COX-2和c-Fos的表達陽性率均明顯高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義；COX-2的表達與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與年齡、性別、吸煙狀況、腫瘤大小、臨床分期無相關(guān)性；c-Fos表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與年齡、性別、吸煙狀況、腫瘤大小、臨床分期、分化程度無相關(guān)性。COX-2和c-Fos在非小細胞肺癌組織中的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義，Spearman相關(guān)性分析顯示存在正相關(guān)(r=0.590，P<0.01)。Mascaux等[13]研究表明，分化程度較高的肺鱗癌組織中，其COX-2的表達顯著高于正常組織和輕中度不典型增生，與本研究結(jié)果一致。

綜上所述，在非小細胞肺癌組織中COX-2的表達與c-Fos的表達存在明顯相關(guān)；COX-2和c-Fos在非小細胞肺癌臨床、預(yù)后評估中可能會起到重要作用。