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    微生物修復(fù)及油污土壤改良研究

    2018-11-02 03:51:34王曙光林兆豐
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年30期
    關(guān)鍵詞:油污烷烴菌劑

    王曙光,穆 馳,林兆豐

    (陜西省土地工程建設(shè)集團(tuán),陜西西安 710075)

    石油被稱為工業(yè)的血脈,是我國現(xiàn)代化進(jìn)程的重要能源之一[1]。然而,隨著石油使用量的增加,各種泄露事故造成的環(huán)境污染在石油的勘探、開采、運(yùn)輸過程中越來越嚴(yán)重[2]。研究表明,全球每年約有500萬t的石油污染物進(jìn)入環(huán)境,每年約有60萬t石油污染衍生物進(jìn)入環(huán)境[3]。這些石油污染物以不同的渠道進(jìn)入土壤,降低土壤透氣性,改變土壤結(jié)構(gòu),影響微生物種群,減少農(nóng)作物產(chǎn)量[4-7]。污染土壤中石油主要成分為C15~C36的烷烴及苯系物酚類等,其中30多種污染物受環(huán)境優(yōu)先控制[8]。

    微生物修復(fù)技術(shù)是在人工增強(qiáng)條件下,使用天然微生物或者人造微生物起主導(dǎo)作用的一種方法。通過人為因素,將外來微生物添加到油污土壤,降解并去除土壤中烴類化合物[9-10]。相比傳統(tǒng)方法,微生物修復(fù)技術(shù)具有成本低、種類多、易變異等特點(diǎn),同時,使用微生物修復(fù)技術(shù)不會破壞土壤環(huán)境,保障生態(tài)環(huán)境的完整性。

    通過改變外部環(huán)境的溫度、濕度、通氣量、營養(yǎng)物質(zhì)及微生物表面活化性,可以實現(xiàn)油污土壤受損修復(fù)[11-13]。借助微生物修復(fù)技術(shù),接種高效降解菌株或者微生物群體,可以提高土壤中石油的降解率,但微生物修復(fù)技術(shù)對于難降解的復(fù)雜化合物(瀝青、石蠟等)和油污土壤難以適用,該方面技術(shù)還需深入研究[14-15]。

    1 油污土壤微生物修復(fù)機(jī)理

    石油烴是高分子的復(fù)雜混合物,由鏈烷烴、芳香烴、環(huán)烷烴組成。鏈烷烴的代謝機(jī)制是氧化作用和脫烴作用,通過酶的氧化作用將鏈烷烴進(jìn)行降解,鏈烷烴經(jīng)過酶化作用轉(zhuǎn)換成伯醇,經(jīng)由丙醛轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的脂肪酸,轉(zhuǎn)化產(chǎn)物進(jìn)入三羧酸循環(huán)并分解成CO2和H2O,或進(jìn)入其他轉(zhuǎn)換過程[16-17]。環(huán)烷烴通過還原反應(yīng)可形成烯烴,烯烴通過進(jìn)一步脫氫作用形成伯醇和丙醛,兩者相互作用形成脂肪酸;或者由過氧化作用直接轉(zhuǎn)化成脂肪酸。一些微生物還可以通過氧化作用形成伯醇,并進(jìn)一步氧化分解。同時,部分微生物通過脫氫作用成為不飽和脂肪酸,并形成某些脂肪酸帶有末端氫鍵,該類烴化脂肪酸降解能力強(qiáng)。土壤退化中后期細(xì)菌的生長情況見圖1、2。

    圖1 土壤退化中期細(xì)菌生長情況Fig.1 Bacteria growth in the mid-degradation of soil

    圖2 土壤退化后期細(xì)菌生長情況Fig.2 Bacteria growth in the late stage of soil degradation

    環(huán)烷烴屬于難降解烴類。環(huán)烷烴的端部沒有氫鍵,其生化原理與烷烴端部氫化原理相似,并通過氧化酶氧化功能生成烷醇,然后脫氫為酮并進(jìn)一步氧化成內(nèi)酯或者直接轉(zhuǎn)化為脂肪酸[18-20]。笨和短鏈烷基被脫氫酶和氧化還原酶代謝成為鄰苯二酚和甲基二酚,后者可以在鄰位或者間位斷裂形成羧酸。

    多環(huán)芳烴(PAHs)的降解首先由微生物產(chǎn)生的氧化酶進(jìn)行,產(chǎn)物相互作用進(jìn)行定位氧化。環(huán)氧化物由真菌被單加酶氧化所形成,再加入H2O產(chǎn)生醇和醛,將氧原子加到2個末端的苯環(huán)上,生化為過氧化物。通過物質(zhì)之間相互反應(yīng)形成的代謝產(chǎn)物,一方面可被生物合成用于微生物成分,另一方面可氧化成碳水化合物[21-22]。

    2 油污土壤微生物修復(fù)影響因素分析

    2.1微生物種類和菌群特性微生物不僅是石油降解的執(zhí)行者,而且是微生物修復(fù)的核心力量,研究表明,混合菌株降解石油的效果明顯高于單獨(dú)菌株。Hamme等[23]通過混合菌株培養(yǎng)試驗,結(jié)果表明,混合培養(yǎng)菌株可明顯提高油脂的降解率;魏偉[24]通過設(shè)置不同復(fù)合鹽濃度篩選微生物混合菌株,結(jié)果表明,混合培養(yǎng)的菌株可明顯增加石油降解效果;于齊等[25]采集陜北典型石油污染土壤,施入19種常見城市綠化樹木枯落葉粉碎樣,進(jìn)行混合分解培養(yǎng)試驗,并以主要成分層次分析法進(jìn)行綜合評價。

    2.2表面活性劑在石油烴的生物降解期間,烴的溶解度直接影響微生物降解速率。當(dāng)濃度極低時,碳?xì)浠衔锸强扇艿模蟛糠忠绯鰜淼挠椭h(yuǎn)大于其溶解限度,通過在微生物表面加入化學(xué)合成的表面活化劑可解決上述問題。微生物表面活化劑具有易降解、毒害低、對周圍環(huán)境超強(qiáng)適應(yīng)性等特點(diǎn)成為材料化學(xué)和分子物理研究的熱點(diǎn)。微生物表面結(jié)構(gòu)特性不同會產(chǎn)生不同結(jié)構(gòu)的表面活化劑,主要是磷脂、脂質(zhì)、脂肪酸和中性脂肪酸等。研究表明,微生物表面活化劑對石油烴類有明顯降解作用。

    2.3系統(tǒng)環(huán)境由于石油構(gòu)造成分復(fù)雜,因此微生物對油脂降解能力不盡相同,環(huán)境因素對石油烴類降解具有影響,這種影響通常對石油降解起關(guān)鍵作用。石油碳?xì)浠衔锟梢栽诃h(huán)境中長時間存在,而在另一個環(huán)境中,相同的碳?xì)浠衔锟梢栽跀?shù)天或者數(shù)小時內(nèi)完全降解。①土壤pH。像大多數(shù)微生物一樣,能夠降解石油物質(zhì)的土壤微生物pH為6.0~8.0,優(yōu)選7.0~7.5。在微生物降解過程中,由于長期影響產(chǎn)生的酸性物質(zhì)在土壤中積累,導(dǎo)致土壤pH逐漸下降,引起土壤酸化,在被污染的酸性土壤中,為了增強(qiáng)微生物活化性能和提高石油烴類降解速率,一些農(nóng)業(yè)酸堿緩沖劑可添加到土壤中,調(diào)節(jié)土壤的酸堿性。因此,土壤最適pH與降解菌種和降解環(huán)境有關(guān)。②土壤溫度。土壤溫度通過影響石油的物理性質(zhì)和化學(xué)組成影響微生物的碳?xì)浠衔锎x率。在溫度較低的環(huán)境下,隨著油黏度增加,烷烴末端有毒的短鏈作用揮發(fā)減弱,且烷烴水溶性加大,對微生物的毒性也增加,這將間接影響碳?xì)浠衔锏纳锝到饴?,?dāng)溫度降低時,酶活性降低,導(dǎo)致降解速率降低。較高的溫度可以使碳?xì)浠衔锏拇x率最大化,通常為30~40 ℃。③供氧狀況。環(huán)境中的氧氣是微生物極其重要的限制因素,石油的微生物降解過程因碳?xì)浠衔锒?,但好氧微生物降解的初始反?yīng)類似,在微生物降解過程中,需要尋找大量的帶電粒子,主要溶解土壤的含氧量和負(fù)離子,由于油脂會在表面形成一層油膜,降低氧氣在土壤中的傳遞速率,在石油污染區(qū),供氧不足已成為制約土壤中石油降解的主要因素。④土壤中營養(yǎng)成分。微生物的生長環(huán)境離不開必要的無機(jī)因素,但土壤環(huán)境提供的營養(yǎng)成分是有限的,石油中的烴類可以提供土壤必要的有機(jī)物,但不能提供氮、磷、硫、鎂等無機(jī)元素,因此該類無機(jī)養(yǎng)料是限制微生物活性的重要因素。為了降低土壤中的石油含量,提高土壤油脂降解率,需要在土壤中適當(dāng)添加營養(yǎng)成分,促進(jìn)石油烴類生物降解。⑤鹽濃度。低濃度的鹽類(NaCl、KCl、MgSO4等)對土壤中微生物生長具有促進(jìn)作用,但濃度過高時,會抑制微生物生長,同時溶液中NaCl濃度對細(xì)胞膜上的Na+、K+泵有很大影響,而Na+、K+泵維持的細(xì)胞內(nèi)外離子梯度具有重要的生理學(xué)意義,它不僅維持細(xì)胞的膜電位,也調(diào)節(jié)細(xì)胞的體積和驅(qū)動某些細(xì)胞中糖與氨基酸的運(yùn)輸,從而影響細(xì)胞的生長。

    3 不同條件對混合菌劑降解率的影響

    3.1培養(yǎng)時間根據(jù)1∶1混合培養(yǎng)的2種菌劑,每100 mL篩選培養(yǎng)基0.5 mL,在30 ℃、110 r/min下振蕩培養(yǎng),分別在培養(yǎng)后第2、3、4、5、6和7天測定,計算每種混合菌劑的油污降解率。從圖3可以看出,混合菌劑1#在培養(yǎng)初期的降解率非常低,第2天降解率為28.10%,混合菌劑2#為32.89%;降解率從第3天開始明顯增加,第5天混合菌劑1#的降解率為59.73%,混合菌劑2#為73.31%。隨著培養(yǎng)時間的延長,2種混合微生物菌劑對石油的降解速率逐漸變慢。第7天,混合菌劑1#對油污的降解率為70.10%,混合菌劑2#的降解率為81.23%。這說明隨著培養(yǎng)時間的延長,油脂去除率越高,去除效果越好,在設(shè)定的培養(yǎng)條件下,混合菌劑2#石油降解率顯著高于混合菌劑1#。因此,采用7 d為適宜的培養(yǎng)時間。

    3.2培養(yǎng)溫度根據(jù)1∶1混合培養(yǎng)的2種菌劑,每100 mL篩選培養(yǎng)基0.5 mL,分別置于溫度15、20、25、30、35、40、45 ℃條件下100 r/min密閉培養(yǎng),經(jīng)過7 d振蕩培養(yǎng)后,測量培養(yǎng)基中油脂含量,并計算每種溫度培養(yǎng)下石油的降解率。從圖4可以看出,培養(yǎng)溫度對混合菌劑2#的影響遠(yuǎn)大于混合菌劑1#。在溫度15 ℃培養(yǎng)7 d后,混合菌劑1#石油降解率為32.59%,混合菌劑2#石油降解率為24.19%,在該溫度條件下,混合菌劑1#石油降解率顯著高于混合菌劑2#。當(dāng)培養(yǎng)溫度繼續(xù)升高時,混合菌劑2#的降解速率呈線性增加,而混合菌劑1#的降解速率增加緩慢。當(dāng)培養(yǎng)溫度設(shè)定為35 ℃時,混合菌劑1#對石油的降解率最大,隨著溫度繼續(xù)升高,降解率逐漸下降;當(dāng)培養(yǎng)溫度設(shè)定為33 ℃時,混合菌劑2#對石油的降解率達(dá)到最大,降解率為78.69%,當(dāng)溫度繼續(xù)升高,其降解率也隨之下降。這說明培養(yǎng)溫度對2組混合菌劑石油降解率均有影響,當(dāng)培養(yǎng)時間7 d、菌劑接種量0.5 mL時,混合菌劑1#的最適培養(yǎng)溫度為35 ℃,混合培養(yǎng)菌劑2#最適培養(yǎng)溫度為33 ℃。

    圖3 培養(yǎng)時間對不同混合菌劑降解率的影響Fig.3 Effect of culture time on degradation rate of different mixed bacteria

    圖4 培養(yǎng)溫度對不同混合菌劑降解率的影響Fig.4 Effect of culture temperature on degradation rate of different mixed bacteria

    3.3培養(yǎng)基pH設(shè)定混合菌劑培養(yǎng)基的pH分別為5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0共9個水平。根據(jù)1∶1混合培養(yǎng)的2種菌劑,每100 mL篩選培養(yǎng)基0.5 mL,分別放置于溫度35 ℃條件下振蕩培養(yǎng),將培養(yǎng)基放置7 d,并測定培養(yǎng)基中石油含量和混合菌劑對石油的降解率。從圖5可以看出,當(dāng)初始pH為5.0~7.0時,混合菌劑1#石油降解率顯著高于混合菌劑2#,當(dāng)初始pH為7.0~9.0時,混合菌劑2#石油降解率顯著高于混合菌劑2#,對于混合菌劑1#,在初始pH為5.0~7.5時,其降解率隨著初始pH的升高而升高,在初始pH為7.5時降解率達(dá)到最大值70.24%,之后隨著初始pH的升高,降解率呈直線下降趨勢;對于混合菌劑2#,在初始pH為5.0~8.0時,其降解率隨著初始pH的升高而升高,在初始pH為8.0時降解率達(dá)到最大值80.10%,之后隨著初始pH的升高,降解率呈明顯下降趨勢。這說明培養(yǎng)基pH不同對2組混合菌劑石油降解率有較大影響,當(dāng)培養(yǎng)時間為7 d,菌劑接種量為0.5 mL,混合培養(yǎng)菌劑的最適培養(yǎng)溫度為35 ℃時,混合菌劑1#的最適初始pH為7.5,而混合菌劑2#的最適初始pH為8.0。

    圖5 pH對不同混合菌劑降解率的影響Fig.5 Effect of pH on degradation rate of mixed bacteria

    4 結(jié)論

    (1)相比傳統(tǒng)物理、化學(xué)修復(fù)方法,微生物具有成本低、繁殖快、污染物完全氧化等特點(diǎn),因此使用微生物改良污染的石油土壤,通過改變微生物在油污土壤的外界溫度、濕度、鹽分、氧氣含量和表面活性劑,同時接種高效的降解菌株,強(qiáng)化微生物修復(fù)能力,以此提高菌種在土壤中石油的降解速率。

    (2)微生物的種類和菌群對土壤中石油降解具有重要影響,研究表明,混合培養(yǎng)菌的石油降解效果明顯高于單株培養(yǎng)菌,為混合培養(yǎng)菌添加表面活性劑,可提高石油降解效率,顯著改善土壤中石油降解效果。微生物表面活化劑在石油降解過程中具有積極促進(jìn)作用,通過對污染土壤進(jìn)行處理,修復(fù)后土壤中石油污染物的降解率達(dá)88.63%。

    (3)每組混合菌種設(shè)置不同的培養(yǎng)時間、培養(yǎng)溫度和pH,不同試驗條件對混合菌種的降解率均有影響。隨著培養(yǎng)時間的延長,對石油的去除率越高,且去除效果越好,采用7 d 為適宜的培養(yǎng)時間,最適宜培養(yǎng)溫度為35 ℃,當(dāng)總接種量為0.5 mL時,混合菌劑最適pH為8.0。試驗結(jié)果顯示,微生物培養(yǎng)環(huán)境達(dá)到以上最適條件,混合菌劑對油污土壤的降解率最大。

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