研究TPX2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及其在甲狀腺癌KAT細胞增殖過程中的作用

許騰 楊麗瑋 郝立君

【摘 要】目的：深入研析TPX2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及其在甲狀腺癌KAT細胞增殖過程中的作用。方法：隨機抽選于2016年3月-2018年3月期間我院順利收集的60例甲狀腺乳頭狀癌組織及其癌旁組織，將PTC細胞分為空白對照組（Blank組）、無義序列轉(zhuǎn)染組（NC組）、siRNA-1組、siRNA-2組。應(yīng)用熒光定量PCR法對其TPX2mRNA表達水平進行檢測，再采用siRNA干擾甲狀腺癌KAT細胞增殖。結(jié)果：甲狀腺細胞癌組織中TPX2蛋白表達含量在mRNA表達水平明顯高于癌旁組織（P<0.05）；甲狀腺癌KAT細胞對TPX2蛋白表達進行干擾之后，增加了其細胞凋亡率，有效抑制了細胞增殖性。結(jié)論：TPX2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達含量相對高于癌旁組織，與甲狀腺癌KAT細胞增值性存在相關(guān)性，可作為干預甲狀腺癌的一項新靶點。

【關(guān)鍵詞】TPX2蛋白；甲狀腺乳頭狀癌組織；甲狀腺癌；KAT細胞；增殖

【中圖分類號】R335+.2 【文獻標志碼】B 【文章編號】1005-0019（2018）10-023-02

甲狀腺癌在臨床中是一種較為多見的內(nèi)分泌腺惡性腫瘤。據(jù)不完全統(tǒng)計，在甲狀腺癌類型中，甲狀腺乳頭狀癌（PTC）約占81%，且呈不斷急劇上漲趨勢，已成為一種增長速度最快的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤類型，對人類健康安全構(gòu)成嚴重威脅[1]。隨著分子生物學技術(shù)不斷研發(fā)與進步，可采用新技術(shù)來幫助探尋PTC腫瘤的新靶點，對預后與轉(zhuǎn)歸具有重大臨床實際意義。鑒于此，在本次研究中，深入研析TPX2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及其在甲狀腺癌KAT細胞增殖過程中的作用?，F(xiàn)將報告如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機抽選于2016年3月-2018年3月期間入院接受甲狀腺癌切除術(shù)的60例患者，在術(shù)后均經(jīng)臨床病理確診為甲狀腺乳頭狀癌。我院順利收集的60例甲狀腺乳頭狀癌組織及其癌旁組織，應(yīng)用熒光定量PCR法對其TPX2mRNA表達水平進行檢測，再采用siRNA干擾甲狀腺癌KAT細胞增殖。所有患者的臨床一般資料保留完整，且通過采用統(tǒng)計學分析，結(jié)果得出（P>0.05），可進行臨床分析與討論。所有患者及其家屬均已知情同意，并自愿納入本次研究中，且經(jīng)由我院倫理委員會批準。

1.2 方法 嚴格依照RNAisoRNA提取試劑盒的說明參照書對組織中的總RNA進行提取，采用分光光度計對總RNA濃度與純度進行檢測[2]。依照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的操作指南對cDNA合成進行測定，應(yīng)用熒光定量PCR法對其TPX2mRNA表達水平進行檢測。

本次研究對象為甲狀腺乳頭狀癌組織KAT細胞株，并將其放置于RPMI1640培養(yǎng)基中（10%胎牛血清）進行培養(yǎng)，設(shè)定溫度為37℃，CO2濃度為50ml/L[3]。

空白對照組（Blank組）、無義序列轉(zhuǎn)染組（NC組）、siRNA-1組、siRNA-2組培養(yǎng)24h后，依照相關(guān)說明書要求進行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h、96h采用酶標儀進行測定。

1.3 統(tǒng)計學方法 在SPSS21.0統(tǒng)計軟件中算出本次研究所有數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果

2.1 TPX2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中表達情況 60例甲狀腺乳頭狀癌組織中，39例甲狀腺細胞癌組織中TPX2蛋白表達在mRNA表達水平明顯高于癌旁組織（log2值>0）（P<0.05）。

2.2 TPX2與KAT細胞凋亡的聯(lián)系 通過流式細胞儀進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NC組與Blank組的細胞凋亡率比較差異不存在統(tǒng)計學意義（P>0.05）；siRNA-2的細胞凋亡率（18%）明顯高于siRNA-1（6%）（P<0.05）。

2.3 TPX2與KAT細胞增殖的聯(lián)系 經(jīng)MTT細胞增殖臨床研究發(fā)現(xiàn)，NC組與Blank組的細胞增殖性比較差異不存在統(tǒng)計學意義（P>0.05）；siRNA-1在不同轉(zhuǎn)染時間中的細胞增殖性均低于siRNA-2（P<0.05）

3 討論

甲狀腺癌已成為目前全球患病率急劇增長速度最快的惡性腫瘤之一，其中甲狀腺乳頭狀癌約占81%[4]。在目前臨床治療PTC中常用切除術(shù)可改善預后效果，但在淋巴結(jié)清掃、手術(shù)切除范圍、介入消融等尚未明確統(tǒng)一標準。因此，可能會出現(xiàn)過度治療、預防干預等不良現(xiàn)象。充分采用分子生物檢測的新技術(shù)探尋PTC腫瘤治療新靶點以及其發(fā)生發(fā)展機制，可為后期臨床制定最佳治療方案提供科學有力的理論支持。

本研究表明，甲狀腺細胞癌組織中TPX2蛋白表達含量在mRNA表達水平明顯高于癌旁組織（P<0.05）；甲狀腺癌KAT細胞對TPX2蛋白表達進行干擾之后，增加了其細胞凋亡率，有效抑制了細胞增殖性，提示TPX2siRNA在轉(zhuǎn)染48h后甲狀腺癌KAI細胞生長曲線上升呈減緩趨勢，當TPX表達下調(diào)之后能對甲狀腺癌KAI細胞增殖能力發(fā)揮有效抑制作用[5]。此外，TPX2siRNA在轉(zhuǎn)染48h后，甲狀腺癌KAI細胞的凋亡率逐漸上升，表明在TPX表達下調(diào)之后，對KAI細胞凋亡具有促進作用[6]?？傊琓PX2可作為判定PTC惡性程度、治療新靶點的有效指標之一，為后續(xù)臨床干預治療提供至關(guān)重要的參考價值。

綜上所述，TPX2蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達含量相對高于癌旁組織，與甲狀腺癌KAT細胞增值性存在相關(guān)性，可作為干預甲狀腺癌的一項新靶點。

參考文獻

[1] 關(guān)善斌，黃新若，李加偉，等.TPX2在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及其對甲狀腺癌KAT細胞增殖能力的影響[J].廣東藥學院學報，2017，33（4）：551-555.

[2] 趙愛國，師丙帥，張雙林，等.甲狀腺癌相關(guān)基因1mRNA和蛋白在甲狀腺乳頭狀癌組織的表達及其相關(guān)性[J].中華實驗外科雜志，2015，32（1）：144-146.

[3] 王倩倩，李偉娟，劉閣玲，等.細胞周期蛋白G2在人甲狀腺乳頭狀癌K1細胞中的表達及其對K1細胞增殖凋亡的影響[J].腫瘤防治研究，2017，44（7）：460-464.

[4] 熊超.結(jié)腸癌組織中RNF181、TPX2的表達量及其與癌細胞活力、血管新生的相關(guān)性分析[J].海南醫(yī)學院學報，2017，23（14）：1969-1971.

[5] 李鴻濤，單美慧，羅琳，等.甲狀腺乳頭狀癌組織中Ki-67表達及其臨床病理意義[J].新疆醫(yī)科大學學報，2016，39（10）：1291-1293.

[6] 宋淑芳，常海平，楊彩容，等.慢病毒介導的TPX2基因沉默對人宮頸癌HeLa細胞系增殖、遷移和細胞周期的影響及機制[J].癌變·畸變·突變，2017，29（5）：329-334.